Лабораторные методы оценки влияния экзогенной супероксиддисмутазы на параметры окислительного стресса в опытах in vitro и при острых и хронических заболеваниях человека

• Автор: Коробова, Мария Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23, 14.00.46
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 91 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОКСИДАТИВНЫЙ СТРЕСС. АНТИОКСИДАНТЫАЯ ЗАЩИТА.

МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ПОЛУЧЕНИЮ РЕКОМБИНАНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ

1.1. Свободные радикалы. Определение, классификация

и механизмы образования

1.2. Физиологическое значение свободных радикалов

1.3. Патофизиологические эффекты свободных радикалов.Оксидативный стресс

как типовой патологический процесс. Система антиоксидантной защиты организма

1.4. а и Си,гпсупероксиддисмутаза
1.5. Супероксиддисмутазаструктура, биохимия. Супероксиддисмутаза как
антиоксидант .
1.6. Возможности терапевтического применения препаратов
суиероксиддисмутазы
1.7. Принципы получения рекомбинантных препаратов
1.8. Принципы промышленного культивирования
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Лабораторный метод очистки рекомбинантной супроксиддисмутазы .
2.1.1. Метод получения белкового дезинтеграта
2.1.2. Метод ионообменной хроматографии
2.1.3. Диализ обессоливание
2.1.4. Метод гельхроматографии
2.1.5. Определение белка по методу Лоури .
2.1.6. Количественный метод определения активности
супроксиддисмутазы
2.2. Подготовка материала для проведения модельных опытов и исследований
групп пациентов
2.3. Оценка параметров свободнорадикального окисления и антиоксидантиой
системы
2.3.1. Определение конечных продуктов ПОЛ ТБКАП
2.3.2. Определение окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах периферической крови человека .
2.3.3. Определение активности супероксиддисмутазы набором x
в нейтрофилах и мононуклеарах
2.3.4. Определение активности каталазы
2.3.5. Определение окислительной деструкции белков .
2.4. Методы оценки иммунного статуса .
2.4.1. Индукция синтеза цитокинов. Определение фактора некроза
опухоли а а
2.4.2. ИФА метод определения а
2.5. Методы оценки биохимических параметров
2.5.1. Метод определения АЛТ .
2.5.2. Метод определения общего билирубина
2.5.3. Метод определения ГТТП
2.5.4. Метод определения щелочной фосфатазы .
2.5.5. Метод определения холинэстеразы
2.6. Характеристика обследованных больных
2.7. Статистические методы .
2.8. Характеристика используемых реактивов и оборудования
ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Действие препарата рексод в модельных системах на окислительную
деструкцию белков
3.2. Модифицирование метода определения активности
супероксиддисмутазы в эритроцитах для нейтрофилов и мононуклеаров периферической крови
3.3. Действие экзогенной супероксиддисмутазы на активность эндогенной
супсроксиддисмутазы в опытах i vi
3.4. Изучение влияния экзогенной СОД на продукцию фактора некроза опухоли
а а, фактора воспаления обладающего цитотоксичностыо в отношении клеток мишеней, в системах с добавлением экзогенной супероксиддисмутазы .
3.5. Оценка клиниколабораторных параметров у больных с острым гепатитом
В до и после лечения препаратом Рексод
3.6. Влияние препарата рексод на параметры свободнорадикального статуса и
антиоксидантной защиты у пациентов с хроническим течением патологического процесса возрастная макулодистрофия или сенильная исэксуда
тивная хориоретинальная дистрофия .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ . ГЛАВА 1. ОКСИДАТИВНЫЙ СТРЕСС. АНТИОКСИДАНТЫАЯ ЗАЩИТА. Свободные радикалы. Патофизиологические эффекты свободных радикалов. Супероксиддисмутазаструктура, биохимия. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Лабораторный метод очистки рекомбинантной супроксиддисмутазы . Определение белка по методу Лоури . Определение окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах периферической крови человека . Определение окислительной деструкции белков . Методы оценки иммунного статуса . Индукция синтеза цитокинов. Метод определения АЛТ . Метод определения щелочной фосфатазы . Статистические методы . ГЛАВА 3. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ . Актуальность проблемы. Как известно, при всех патологических процессах, происходящих в организме человека на клеточном уровне, возникают процессы альтерации с последующей репарацией. А.Х. I., . Среди подобных соединений особое внимание привлекают антиоксиданты, способные контролировать и модулировать окислительные процессы в клетке. Ключевым ферментом антиоксидантной защиты организма является супсроксиддисмутаза СОД. АФК. Ог действует на все компоненты клеток белки, липиды, нуклеиновые кислоты, на компоненты соединительных тканей гиалуроновая кислота, а также является предшественником более токсичного гидроксильного радикала ОН. Каталитический характер инактивации супероксидного радикала определяет преимущество СОД по сравнению с антиоксидантами неферментативной природы. К настоящему времени существует хорошо обоснованная стратегия применения препаратов СОД при самых различных заболеваниях, где патогенетическую роль выполняют активированные фагоциты, а также отмечаются нарушения, связанные с накоплением активных форм кислорода Трубников Г. А. и соавт. Чурилова И. В. и соавт. Наиболее перспективными для широкого клинического применения являются препараты гомологичных белков, а именно, препараты на основе СОД человека Черепак I. Н. и соавт. Одним из них, является Рсксод новый отечественный ферментный лекарственный препарат, обладающий антиоксидантным, антицитолитическим и противовоспалительным действием. Доклинические исследования препарата Рсксод показали, что он является нетоксичным при однократном остром пероральном, а также внутривенном и внутримышечном введении. Опыт применения зарубежными исследователями препаратов СОД человека показал, что экзогенная супероксиддисмутаза обладает широким терапевтическим действием . В связи с выше сказанным, можно сказать, что использование экзогенной супероксиддисмутазы, являющейся ключевым ферментом антиоксидантной системы, будет способствовать защите клеток макроорганизма от альтерации суиероксидными радикалами и корректировать состояние оксидативного стресса. Охарактеризовать воздействие экзогенной супероксиддисмутазы, выделенной из биомассы рекомбинантного штаммапродуцента vii, на процессы свободнорадикалыюго окисления i vi и оценить влияние препарата Рексод на клиниколабораторные показатели при острых и хронических патологических процессах i viv. Оценить действие экзогенной супероксиддисмутазы на окислительную деструкцию белков в модельных системах. Модифицировать метод определения активности супероксиддисмутазы в эритроцитах для нейтрофилов и мононуклеаров периферической крови. Изучить влияние экзогенной СОД на продукцию фактора некроза опухоли в системах i vi с добавлением экзогенной супероксиддисмутазы. Охарактеризовать показатели свободнорадикалыюго и антиоксидантного статуса, биохимические и иммунологические параметры у больных с острым гепатитом В до и после лечения препаратом Рексод. Изучить показатели свободнорадикального и антиоксидантного статуса у пациентов с хроническим течением патологического процесса возрастная макулодистрофия до и после лечения препаратом Рсксод.