Обнаружение природного резервуара вируса чумы плотоядных в брюхоногих моллюсках

• Автор: Кондратов, Илья Геннадьевич
• Шифр специальности: 03.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Сравнительная характеристика морбилливирусных

эпизоотий у тюленей Байкала и северных морей.

1.1.1. Морбилливирус в популяции байкальской

нерпы РИоса БЬгса.

1.1.2.Морбилливирус европейских тюленей и его отличие

от вируса байкальской нерпы

1.1.3.Сравнительная характеристика байкальской нерпы РИоса зЬгса и обыкновенных тюленей РИоса ушпа

1.2. Морбилливирусные эпизоотии водных млекопитающих

с по годы
1.3.Молекулярнобиологическая характеристика рода морбилливирусов МогЫНтгиз.
1.4. Роль беспозвоночных в экологии вирусов
теплокровных животных.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы
2.2. Методы.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Молекулярнобиологические подходы к
мониторингу.
3.2. Анализ байкальских пойкилотермных гидробионтов
на присутствие морбилливирусной РНК.
3.3. Заражение чувствительных к V животных хорьков i гомогенатом гастропод
. ii.
3.4. Изоляция V на культуре клеток от
гастропод . ii и М. i.
3.5. Молекулярногенетическая характеристика вариантов
V от различных гидробионтов оз. Байкал.
3.6. Пептидная характеризация вариантов V от моллюсков нативных и изолированных на культуре клеток .
3.7. Доказательство возможности репликации вируса чумы плотоядных в организмах пойкилотермных
животных гастропод.
3.8. Передача V по поколениям в популяции
моллюсков в искусственной системе
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ОТ АВТОРА.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Определить нуклеотидные последовательности фрагментов геномов вируса чумы плотоядных от байкальской нерпы, брюхоногих моллюсков и полученных изолятов вируса чумы плотоядных. Определить степень родства вируса чумы плотоядных от байкальской нерпы и брюхоногих моллюсков. Продемонстрировать возможность репликации вируса чумы плотоядных в организме пойкилотермного животного. Показать, что вирус чумы плотоядных способен передаваться в популяции брюхоногих моллюсков по поколениям. Научная новизна и практическая значимость работы. В представленной работе впервые показано, что вирус чумы плотоядных, представитель рода iivi, ранее считавшийся облигатным вирусом теплокровных, способен накапливаться в организмах пойкилотермных животных брюхоногих моллюсков ii и i i без потери инфекционности для теплокровных. Использованы как молекулярнобиологические ПЦР с последующим определением нуклеотидной последовательности, так и вирусологические методы заражение чувствительных животных, изоляция на культуре клеток . Впервые продемонстрирована способность вируса чумы плотоядных реплицироваться в организмах пойкилотермных животных. Впервые в результате длительного культивирования брюхоногих моллюсков аипсШапа в искусственной водной экосистеме аквариуме в условиях, исключающих дополнительную контаминацию, продемонстрирована способность вируса чумы плотоядных передаваться в популяции моллюсков по поколениям. Впервые получены изоляты вируса чумы плотоядных от брюхоногих моллюсков Ь. М. ИеЫепапа на культуре клеток МИСК, проведена их молекулярнобиологическая, иммунологическая и пептидная характеризация. Определены нуклеотидные последовательности участка кодирующей области гена фосфопротеина длиной 0 нуклеотидов для вариантов СЭУ от байкальской нерпы, и моллюсков Ь. М. Иегс1епапа. Показано, что варианты вируса чумы плотоядных от брюхоногих моллюсков и байкальской нерпы на исследуемом участке генома обнаруживают высокую степень родства. Разработанный в работе подход к изучению циркуляции морбилливирусов является абсолютно новым и может быть использован при исследовании экологии других одноцепочечных РНКсодержащих вирусов, в первую очередь вирусов гриппа. Полученные данные могут быть использованы в учебных курсах университетов. Вирус чумы плотоядных способен накапливаться в организмах пойкилотермных животных без потери инфекционности для теплокровных. Вирус чумы плотоядных способен реплицироваться в организмах пойкилотермных животных брюхоногих моллюсков. Вирус чумы плотоядных способен передаваться в популяции пойкилотермных животных брюхоногих моллюсков Ь. Варианты вируса чумы плотоядных от брюхоногих моллюсков и байкальской нерпы на исследуемом участке генома обнаруживают высокую степень родства. Апробация работы и публикации. Ii Со i i Байкал, Россия, Всероссийская научнопрактическая конференция Развитие физикохимической биологии и биотехнологии на современном этапе Иркутск, Россия, Четвертая Верещагинская Байкальская конференция Иркутск, Россия, , i i, , IX съезд гидробиологического общества РАН Тольятти, Россия, . По материалам диссертации опубликовано 3 статьи. Личный вклад соискателя Молекулярнобиологические данные получены лично автором. Заражение чувствительных к V животных проведено сотрудниками Института молекулярной биологии ГНЦ ВБ Вектор под руководством к. Шестопалова А. М. Изоляты V на культуре получены на базе ГУ НЦМЭ ВСНЦ СО РАМН, Иркутск, под руководством к. Черногор Л. И. Пептидная характеризация изолятов проведена на базе Института аналитического приборостроения РАН, г. СанктПетербург, под руководством к. Подольской Е. Структура и объм диссертации. Рукопись диссертационной работы содержит 3 главы и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов, обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы 8 наименования, из них отечественных и ИЗ зарубежных. Работа изложена на 0 страницах машинописного текста, включая рисунков и 2 таблицы.