Динамика спонтанных и индуцированных сестринских хроматидных обменов в делящихся клетках человека

• Автор: Платонова, Валерия Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Спонтанный уровень СХО в клетках человека

1.2. Сестринские хроматидные обмены при изучении проблем химического мутагенеза .

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Методика культивирования лимфоцитов и приготовление препаратов хромосом.

2.2. Метод дифференциальной окраски сестринских хроматид.

2.3. Анализ метафаз, учет сестринских хроматидных обменов.

2.4. Характеристика мутагена, метод обработки культур

2.5. Методы статистического анализа

3. ДИНАМИКА СПОНТАННОГО УРОВНЯ СХО
З.Г. Введение
3.2. Общая характеристика спонтанного уровня СХО .
3.3. Влияние разных сроков экспозиции БДУ при постоянном времени фиксации на спонтанный уровень СХО
3.4. Уровень СХО цри постоянной экспозиции БДУ и разных сроках культивирования
4. ДИНАМИКА ХИМИЧЕСКИ ИНДУЦИРОВАННЫХ СХО
4.1. Зависимость частоты СХО от срока экспозиции БДУ
при разных концентрациях тиофосфамида
4.2. Зависимость индуцированных тиофосфамидом СХО от времени фиксации культуры .
4.3. Зависимость частоты СХО от времени введения БДУ
и сроков фиксации культуры .
5. ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Для выявления индуцированного уровня СХО необходимо прохождение одного периода . Это положение свидетельствует о том, что проявление индуцированного уровня СХО связано с фазой клеточного цикла, в период которой действуют мутагенные факторы. Можно предположить, что наблюдаемый спонтанный уровень является, по существу, суммой истинного спонтанного уровня индивида и уровня СХО, индуцируемого различными факторами внешней среды, как бытового так и производственного характера. Не исключена возможность, что воздействие сильными химическими мутагенами на лимфоциты периферической крови человека i vi имитирует вторую компоненту спонтанного уровня, но с более высокими количественными проявлениями эффекта. Целью настоящей работы являлось изучение количественных закономерностей динамики спонтанных и индуцированных СХО в ряду клеточных поколений лимфоцитов периферической крови человека. Конкретные задачи исследования были следующими. Выяснить зависимость числа спонтанных и индуцированных тиофосфамидом СХО от сроков введения БДУ в культуру. Изучить влияние экспозиции 5бромдезоксиуридина на уровень спонтанных и индуцированных СХО в культуре. Определить зависимость числа спонтанных и индуцированных СХО от времени культивирования. Исследовать межиндивидуальные вариации спонтанного уровня СХО и среднего числа клеточных делений. Научная новизна и практическая ценность. Получены новые данные о закономерностях динамики сестринских хроматидных обменов в ряду клеточных поколений лимфоцитов периферической крови человека. Показано, что основным фактором, влияющим на спонтанный уровень СХО, является интервал времени между началом культивирования и временем добавления БДУ с увеличением продолжительности этого интервала уровень СХО снижается. Доказано, что при условии раннего введения БДУ до часа от начала культивирования длительность его присутствия в культуре не влияет на исходный спонтанный уровень, т. СХО на одну клетку постоянен для быстро и медленно делящихся клеток. Обосновано положение о том, что при позднем введении БДУ часа выявляется истинно спонтанный уровень СХО, присущий данному индивиду. Доказана необходимость раннего введения БДУ для регистрации максимального уровня химически индуцированных СХО. Прослежена динамика уровня СХО, индуцированного тиофосфамидом в зависимости от концентрации, а также от времени введения БДУ и экспозиции его в культуре. СХО снижается, приближаясь к контрольному уровню. Получены доказательства о нормальном распределении здоровых индивидов по истинно спонтанному уровню СХО на клетку. Полученные результаты и сделанные на их основе выводы позволяют повысить уровень исследований в токсикологической практике с применением методов цитологического анализа. I Л. Обмены участками мевду двумя сестринскими хроматидами одной хромосомы получили название сестринских хроматидных обменов СХО. Первое чткое цитологическое обнаружение сестринских хроматидных обменов принадлежит Тейлору . . ., . При изучении радиоавтографов хромосом Vii а после культивирования клеток в присутствии Нтимидина только в течение первого цикла репликации в метафазе второго клеточного деления метка выявлялась в одной из хроматид каждой хромосомы. Одновременно Тейлор обратил внимание на то, что между сестринскими хроматидами возможны полные обмены хромосомным материалом, названные сестринскими хроматидными обменами. Вслед за Тейлором СХО были описаны на большом количестве различных растительных и животных объектов Захаров А. I,, и этот феномен стал рассматриваться как типичное явление для хромосом эукариот. В г. , , изучая повреждающее действие 5бромдезоксиуридина на клетки i обратил внимание на необычный вид отдельных хромосом в некоторых клетках. После инкубации клеток в культуральной среде с БДУ в течение часов одна из хроматид хромосомы могла выглядеть светлее другой. Однако объяснение это явление тогда не получило. Современный период изучения сестринских хроматидных обменов начался с открытия А. Ф.Захаровым и Н.