Гетерокариоз и цитодукция у дрожжей Saccharomyces и их использование для локализации плазмид

• Автор: Юрченко, Людмила Вениаминовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 190 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ стр.

ВВЕДЕНИЕ

Г л а в а I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гетерокариоз у мицелиальных грибов

1.1. Способы получения гетерокарионов

1.2. Различные типы гетерокарионов .

1.3. Генетический контроль слияния вегетативных клеток .

1.4. Контроль ядерного слияния .

1.5. Тест на цитоплазматическую детерминацию признака.

1.6. Рекомбинация ядерного материала в гетерокарионах

1.7. Заключение .

2. Гетерокариоз у дрожжей
2.1. Открытие явления гетерокариоза у дрожжей
БассЬ. сегеузае
2.2. Открытие явления цитодукции .
2.3. Изучение мутаций, контролирующих слияние ядер у дрожжей и ведущих к образованию гетерокариона .
2.4. Частота спонтанной цитодукции .
2.5. Изучение свойств дрожжевого гетерокариона .
2.5.1. Споруляция гетерокарионов .
2.5.2. Гибель ядер при образовании гетерокарионов
2.5.3. Рекомбинация дцерных маркеров в гетерокарионе .
2.6. Использование явления цитодукции и гетерокариоза
в генетике дрожжей .
2.7. Перенос митохондрий при образовании цитодуктантов
или сегрегации гетерокарионов
2.8. Использование цитодукции для определения цитоплазматической природы факторов .
2.9. Использование метода цитодукции и теста с гетерокарионом для локализации плазмид
3. Гетерокариоз и цитодукция при слиянии дрожжевых протопластов .
4. Заключение
Г л а в а П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Штаммы.
2. Условия культивирования штаммов .
3. Методы
3.1. Отбор цитодуктантов в скрещиваниях и при слиянии протопластов .
3.2. Получение инозитзависимых мутантов, определение аллельности мутаций
3.3. Схема получения гетерокарионов и изучение состава гетерокариотичных колоний
3.4. Определение частоты цитодукции и частоты образования гетерокарионов при слиянии протопластов
3.5. Определение частоты переноса плазмид при цитодукции
3.6. Синтез гетерокарионов с одной или двумя плазмидами и определение частоты переноса плазмид при сегрегации гетерокарионов .
3.7. Статистические методы .
4. Терминология и номенклатура .
Г л а в а Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
I. Гетерокариоз У дрожжей vii
1.1. Описание линии с высокой частотой цитодукции и выделение новой мутации блокирующей кариогамию
1.2. Получение мутаций инозитзависимости и определение
ех аллельности
1.3. Получение гетерокарионов при скрещивании мутанта i4 и штаммов дикого типа.
1.4. Изучение влияния мутаций инозитзависимости в других локусах на кариогамию .
1.5. Нарушение кариогамии при слиянии протопластов дрожжей
2. Изучение локализации химерных плазмид эписомного типа
в клетках дрожжей
2.1. Изучение частоты переноса плазмид при образовании цитодуктантов.
2.2. Изучение частоты переноса плазмид при сегрегации гетерокарионов
Г л а в а У. ОБСУЖДЕНИЕ
1. Методы вьщелешя мутаций, блокирующих кариогамию . .
2. Образование гетерокарионов у дрожжей .vii
3. Влияние на кариогамию мутаций инозитзависимости . .
4. Нарушение кариогамии при слиянии протопластов дрожжей
5. Локализация плазмид эписомного типа в клетках дрожжей
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Этот процесс обеспечивается механизма, действие которых связано с особыми образованиями дикариона соединительными пряжками 4, . У базидиошцетов дикариотичная фаза длительная кариогамия значительно запаздывает по отношению к плазмогамии, а у аскомицетов кратковременная, предшествует слиянию ядер 9,. Известно, что процесс образования гетерокарионов грибов находится под генетическим контролем4,,,Так, образование гетерокариона у Неигозрога сгаэБа возможно только между гифами одного типа спаривания, в то время как у базидиомицетов дикарион образуется при контакте мицелиев разных и совместимых по типу спаривания. Образование дикарионов у базидиомицетов контролируется А и В факторами несовместимости 4, . Каждый из факторов состоит из двух сцепленных генов и В, В. В некоторых случаях рассчитано, что наиболее вероятное число аллелей и Ар в популяции гриба 9 и соответственно цит. Ар аллели, несошестимы. Аналогичная ситуация описана и для В фактора. Различие по любому из генов А фактора, а также В фактора, приводит к совместимости и образованию плодоносящего дикариона. Слияние гиф происходит и при несовместимых сочетаниях А и В факторов 4, . В комбинациях, совместимых только по одному из факторов спаривания,образуется гетерокарион, но не дикарион ц4, . Афактор контролирует слияние ядер, синхронное деление ядер в дккарионе и развитие пряжек дикариона. Вфактор контролирует миграцию ядер в мицелии и, возможно, слияние пряжек между рядом лежащими клетками 4,,6. При изучении образования гетерокарионов между штаммами, выделенными как из различных географических районов, так и в одном и том же месте, наблюдают явление несовместимости 4,,. В некоторых вариантах скрещиваний гетерокарион или вообще не образуется, или образуется временный, который быстро дегенерирует. Различают генную несовместимость реакция несовместимости наблюдается при сочетании в гетерокарионе некоторых неподходящих аллелей разных генов и аллельную несовместимость когда невозможно сочетание двух разных аллелей одного гена. Оба типа несовместимости описаны у Ройоврога апзег1па 4, . При расположении рядом мицелиев, несущих несовместимые аллели, иногда наблюдают появление так называемой барражной зоны, которая образуется в результате отмирания слившихся гиф 4, . При анализе природных изолятов было идентифицировано 9 локусов несовместимости. Из них 4 были определены по реакции несовместимости с другими локусами, а другие 4 по несовместимости пар аллелей в том же гене аллельная несовместимость. Один локус проявлял оба типа взаимодействий. У Р. Аллельная несовместимость описана у и i ii ii выявлены группы несовместимости в гетерокарионе Нс при скрещивании на неселективной среде штаммов, различающихся по цвету конидиоспор 4, . В этих опытах образование гетерокарионов легко учитывать по появлению полосатыхконидиаяьных головок. Вегетативная несовместимость у . Жизнеспособный гетерокарион образуется лишь при сочетании идентичных аллелей этих генов. Аллельные различия только по одному из них приводят к отсутствию образования гетерокариона или образованию временного дегенерирующего гетерокариона. На способность к сексуальному скрещиванию эти гены не оказывают значительного влияния. Генетический анализ признака вегетативной несовместимости осуществлн при изучении мейотического потомства диплоида, образовавшегося при скрещивании природных кзолятов, относящихся к разным группам совместимости, и показан полигенный характер его наследования. В работе Далеса с соавторами при скрещивании штаммов и i гетерокарион не образовывался, но были выделены единичные диплоиды, что свидетельствует о существовании временного гетерокариона. При слиянии протопластов штаммов, несущих различные мутации, были получены гетерокарионы и, соответственно, вегетативные диплоиды. Последние морфологически отличались от типичных дипловдов. Появление нормальных по морфологии диплоидных секторов свидетельствует о гомозиготизации по гену. Изучение парасексуального потомства таких дишюидов позволило определить группы сцепления дяя ряда генов несовместимости .