Изучение репаративной активности в клетках человека, инфицированных вирусом

• Автор: Колонина, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 c. : ил

Оглавление
Введение .

Часть I. Обзор литературы Глава I. Общие представления о процессах репарации ДНК

в клетках человека и млекопитающих II

1.1. Виды репаративных систем и основные этапы репарации повреждений ДНК. II

1.1.1. Дорепликативная репарация ДНК .

1.1.2. Пострепликативкая репарация ДНК

1.1.3. Репарация повреждений, затрагивающих обе нити

ДНК в одной области

1.2. Роль структурной организации ДНК в процессах

репарации
Глава 2. Генетический контроль и регуляция процесса репарации ДНК в клетках человека.
2.1. Клетки людей с наследственными заболеваниями, характеризующимися нарушениями процесса репарации ДНК.
2.2. Специфические ингибиторы репарации ДНК химической природы .
2.3. Биологические факторы, влияющие ка репарацию
2.3.1. Модифицирующее действие вирусов на репаратив
ные механизмы клеток
2.3.2. Стимуляция процессов репарации в клетках с помощью интерферонов
Глава 3. Краткая характеристика систем вирус клетка,
культивируемых i vi при хронической вирусной
инфекции
Заключение по обзору литературы
Часть II. Собственные исследования Глава 4. Материалы к методы.
4.1. Вирусы.
4.2. Клеточные культуры .
4.3. Получение клеточных культур, первично инфицированных вирусами.
4.4. Мутагены.
4.5. Обработка клеток мутагенами
4.6. Определение выживаемости клеток
4.7. Радиоактивное мечение культуры клеток
4.8. Определение репаративной активности клеток методом хроматографии клеточных лизатов на колонках
с гидроксиапатитом.
4.9. Определение репаративной активности клеток методом щелочного градиентного центрифугирования . .
4 Калибровка градиентов.
4 Математическая обработка результатов
Глава 5. Ингибирование эксцпзионной репарации повреждений
ДНК, индуцированных 4китрохинолин1оксидом, в клетках человека, хронически инфицированных вирусами
5.1. Клетки человека НВр2, хронически инфицированные
вирусом краснухи.
5.1.1. Подбор рабочей дозы и времени экспозиции 4нитрохинолин1оксида .
5.1.2. Репарация индуцированных 4китрохинолин1оксвдом однонитеЕЫХ разрывов ДНК в культурах клеток НЕр2 и НЕр2БКр.
5.2. Клетки человека НЕр2, хронически инфицированные вирусом бешенства .
5.3. Клетки человека 1, хронически инфицированные вирусом паротита
5.4. Клетки человека НЕр2, хронически инфицированные вирусом кори
5.5. Заключение.
Глава 6. Различия в репарации индуцированных гаммаизлучением, митомищшом С и блеомицином повреждений ДНК
в хронически инфицированных вирусами клетках человека
6.1. Репарация поперечных сшивок ДНК, индуцированных митомицином С, в клетках НЕр2 и НЕр2ВКр . .
6.2. Репарация однонитевых разрывов ДНК, индуцированных гаммаизлучением, в клетках НЕр2 и
л, а также НЕр2ВКр, НЕр2ВБ, ЛЕП . .
6.3. Репарация повреждений ДНК, индуцированных блеомицином, в культурах клеток человека НЕр2 и НЕр2ВКр
6.4. Заключение.
Глава 7. Изучение влияния первичной вирусной инфекции на
репаративную активность клеток .
7.1. Репарация индуцированных 4нитрохинолин1оксидогл повреждений ДНК в клетках человека Л, первично инфицированных вирусом паротита
7.2. Репарация поврежденной 4нитрохинолин1оксидом ДНК в клетках человека НЕр2, первично инфицированных исходным штаммом п персистирующим мутан.
том вируса бешенстьа
7.3. Репарация повреждений ДНК, индуцированных 4нитрохинолин1оксидом, в клетках человека НЕр2, первично инфшцированных исходныгл штаммом и персистирующим мутантом вируса краснухи.
7.4. Заключение
Глава 8. Обсуждение результатов .
Выводы.
Список литературы


Кроме того, возрастающее загрязнение окружающей среды может приводить к ингибированию специфических и неспецифических механизмов иммунитета, что будет отражаться на пониженной общей реактивности организма и высокой вероятности развития хронической вирусной инфекции. Поэтому выявление роли вирусного компонента в регуляции процессов репарации клетки и особенно молекулярных механизмов взаимодействия вирус метка представляет не только теоретический, но и большой практический интерес. В связи с изложенным целью настоящей работы явилось изучение процессов репарации индуцированных мутагенами повреждений ДНК в клетках человека, инфицированных неонкогенными РНКсодеркащими вирусами, при различных типах течения инфекционного процесса. Изучение закономерностей процесса репарации повреждений ДНК, индуцированных 4нитрохинолин1оксидом классическим представителем мутагенов УФтипа в клетках человека линии НЕр2 и Л, хронически инфицированных вирусами краснухи штамм С, выделенный от больного, бешества штамм МНИИШ, используемый для профилактики заболевания бешенством, кори штамм Л, используемый для вакцинации детей в СССР, паротита штамм Л3, такие используемый . СССР. Изучение особенностей репарации в клетках человека, хронически инфицированных вирусами краснухи, бешенства, кори и паротита при воздействии мутагенов с различным механизмом взаимодействия с ДНК митомицин С, блеомицин, гаммаизлучение. Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые вскрыта общность феномена ингибирования процессов репарации повреждений ДНК, индуцированных 4нитрохинолин1оксидом, для клеток человека, хронически инфицированных вирусами бешенства, краснухи, кори и паротита. Получены доказательства, что подавление репаративной активности клеток происходит при длительном сосуществовании вируса и клетки. Первичное инфицирование клеток человека как исходными штаммами, так и персистирующими мутантами исследуемых вирусов не влияло на восстановление поврежденной мутагеном клеточной ДНК. Получена новая модель клеток человека с ингибированной системой репарации перевиваемые линии клеток человека ПЕр2 и 1, хронически инфицированные неоккогенными РНКсодержащими вирусами. Часть I. Глава I. I.I. Функционирование репаративных систем живых организмов, обеспечивающих восстановление структуры молекулы ДНК после повреждающих воздействии раЗЛЧНОЙ природы, является одним из основных механизмов, поддерживающих стабильность генетической информации. Репарация ДНК была обнаружена в метках прокариотов и эукариотов, однако наиболее полно этот процесс изучен у бактерий v . У v, , v . К таким особенностям относятся сложная структурная организация генетического материала меток высокая тканевая и клеточная специфичность, влияющая на чувствительность клеток к различным повреждающим воздействия, и на эффективность работы клеточных репаративных систем невозможность однозначного перенесения результатов, получаемых i vi, на уровень целого организма и некоторые другие факторы. Механизмы репарации ДНК можно условно подразделить по их соотношению с процессами репликации ДНК на до и пострепликативные. I.I. Процессы дорепликативной репарации ДНК могут быть одно, двух и многоэтапными. Ферментативная фотореактивация ФФР. Она представляет собой одноэтапный ферментативный процесс, заключающийся в расщеплении УФиндуцированных циклобутановых димеров пиримидиновых основании при действии неионизирующей радиации с длиной волны, инок, чем у Уфизлучения , , , И др Осуществляется ФФР за счет функционирования единственного фотореактивирующего фермента фотолиазы, который может специфически связываться с пиримидиновыми димерами. Обнаружена ФФР как у прокариотов, так и в некоторых эукариотических клетках, включая культуры клеток лягушки i, , , рыбы i . Однако у исследователей нет единого мнения по поводу наличия системы ФФР в клетках млекопитающих и человека. Была обнаружена ФФР в клетках сумчатых млекопитающих , ii, . Существует мление, что эта система репарации отсутствует у плацентарных млекопитающих , . Сузерланд и соавторы считают, что система ФФР функционирует и в культурах клеток фибробластов человека , iv, .