Линейные и разветвленные поли- и олигопептиды на основе лизинга как средства доставки генных конструкций в клетки млекопитающих

• Автор: Егорова, Анна Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 179 с. : ил.

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Генная терапия. Успехи и тенденции развития

2. Генетические конструкции и способы их доставки.

2.1 Генетические конструкции

2.2 Способы доставки генетических конструкций.

2.3. Общие требования к носителям генетических конструкций

3. Вне и внутриклеточные барьеры транспорта генных конструкций с использованием невирусных носителей.

3.1. Стабильность во внеклеточной среде.

3.2. Проникновение в клетку.
3.3. Выход из эндосом и проникновение в ядро
4. НЕВИРУО 1ЫЕ носители.
4.1 Катионные липиды
4.2. Природные и рекомбинантные белки.
4.3. Полимеры.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.
1. Материал.
2. Методы.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Изучение гиперразветвленных полиЬлизинов .
2. Изучение самосшивающихся цистеинбогатых пептидов .
3. Изучение сигнальных пептидов .
ОБСУЖДЕНИЕИ
1. ГИПЕРРАЗВЕТВЛЕННЫЕ НОЛИЬЛИЗИНЫ . 1
2. Самосшивающиеся цистеинбогагые пептиды
3. Сигнальные пептиды .
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Несмотря на значительное количество проектов, допущенных к клиническим испытаниям, большинство из них на данный момент находятся только на I стадии ,4. Ведущая роль в клинических испытаниях принадлежит США, там сосредоточены ,4 всех клинических исследований по генной терапии. Клинические испытания по генной терапии в России ограничены лишь несколькими проектами. Один из них проводится совместно Институтом молекулярной биологии гена РАИ Москва и институтом онкологии им. И.И. Петрова М3 РФ СанктПетербург и посвящен изучению противоопухолевой активности гена 7 i . Клинические исследования начаты и в отношении таких заболеваний как облитерирующий эидотсриит, инфаркт миокарда, боковой амиотрофический склероз, спинальная мышечная атрофия. К сожалению, такие исследования до сих пор основаны только на энтузиазме отдельных ученых и пока не обрели официальною государственного статуса. Под термином генетическая конструкция в его широком смысле понимают любые рекомбинантные молекулы нуклеиновых кислот, экспрессионные векторы, рекомбинантные вирусы и генные конструкции. Комбинирование различных структурнофункциональных элементов позволяет моделировать генетические конструкции, максимально соответствующие способу их доставки, условиям трансфекции и конкретному заболеванию. Генетические конструкции на основе плазмидной ДНК включают 5рсгуляторную область промоторэнхансср, терапевтический, маркерный или селективный ген, а также добавочные регуляторные элементы. Особенностью данных конструкций является то, что они не способны долгое время сохраняться в клетке. Инъекции конструкций голой плазмидной ДНК были одним из первых подходов при разработке стратегии генотерапевтического лечения. В начале х годов Вульфом с соавторами . , в мышцу мыши приводит к проникновению плазмиды в клетку и экспрессии гена ргалактозидазы в миофибриллах. . Симович с соавторами ivi . ДНК, содержащей ген фактора роста эндотелия сосудов, наблюдались значительные улучшения в клинических показаниях больных. В работах других авторов проводили терапию рака у крыс при помощи внутриопухолевого введения плазмидной ДНК, содержащей ген цитозиндезаминазы . Механизм проникновения голой ДНК в клетку на данный момент не полностью ясен, но согласно одной из гипотез этот процесс происходи На поверхности клеток существуют различные мембранные белки, которые способны связывать последовательности ДНК . В первую очередь, это рецепторы гепарина vv . . Основными недостатками введения голой плазмидной ДНК являются низкая эффективность проникновения в клетки и краткосрочность экспрессии введенных конструкций в большинстве органов и тканей i . Следует отметить, что, несмотря на это, незащищенную ДНК используют в ,9 клинических испытаний по генной терапии в мире . ii. Эффективность экспрессии незащищенной ДНК достаточна для ее использования с целью вакцинации. ДНКвакцины, в составе которых присутствуют гены, кодирующие вирусные антигены, индуцируют иммунную реакцию и способствуют защите организма от инфекций . Кроме того, плазмидная ДНК стимулирует иммунный ответ, благодаря наличию нсметилированных последовательностей , присутствующих в составе бактериальных плазмид i, , . Различия в статусе метилирования бактериальных плазмид и ДНК млекопитающих провоцирует воспаление с активацией Вклеток, моноцитов, макрофагов, натуральных киллеров. В случае генной вакцинации данный факт является преимуществом, но при гемотерапии хронических заболеваний существенным недостатком. Удаление последовательностей из состава плазмидной ДНК уменьшает воспаление в ответ на введение генетической конструкции . Олигонуклеотиды для генотерапии представляют собой последовательности ДНК или РНК небольшого размера, комплементарные специфической последовательности в составе гена или мРНК . i, , .