Изучение конъюгативных свойств плазмиды p19 из почвенного штамма Bacillus subtilis 19

• Автор: Шиловский, Игорь Петрович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Бактериальная конъюгация

1.1.1. Основные закономерности конъюгации на примере фактора . i.

1.1.1.1. Общая характеристика конъюгации.

1.1.1.2. Этапы конъюгации

1.1.1.3. Г сны и белки конъюгации

1.1.1.4. Регуляция процесса конъюгации.

1.1.2. Сходство элементов коныогативного аппарата с компонентами системы секреции IV типа 4.
1.1.3. Конъюгативиая мобилизация плазмид
1.1.4. Ретроконъюгация у бактерий.
1.1.5. Конъюгатинные транспозоны
1.1.6. Особенности конъюгации грамположителышх микроорганизмов.
1.1.7. Конъюгация у бацилл
1.1.7.1. Группа В. .
1.1.7.2. Группа В. ii.
1.2. Плазмиды бацилл
1.2.1. Общая характеристика плазмид бацилл
1.2.2. Строение крупных плазмид бацилл и свойства, определяемые их генами
1.2.3. Механизмы репликации крупных плазмид бацилл
1.2.4. Характеристика отдельных крупных конъюгативных плазмид бацилл
1.2.4.1. В. ii
1.2.4.1.1.
1.2.4.1.2. i73 и другие плазмиды из московской коллекции
1.2.4.1.3. , р и другие плазмиды из белорусской коллекции
1.2.4.2. В. iii.
1.2.4.2 ..X .
1.2.4.2.2.V6 3.
1.2.4.2.3. рВМВ.
1.2.4.3. В. i.
1.2.4.3.1. X.
1.2.4.3.2. рХ.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Клонирование фрагментов ДНК плазмиды р , предположительно несущих гены конъюгации.
3.2. Определение нуклеотидной последовательности клонированных фрагментов ДНК плазмиды р.
3.3. Анализ нуклеотидных последовательностей плазмиды р.
3.4. Инактивация предполагаемых конъюгативных генов плазмиды р .
3.5. Изучение явления ретроконыогации у i ii.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
выводано
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Хеликазная активность белка связана с Сконцом и АТФзависима. СРбелок фактора имеет величину 7 аа, локализован во внутренней мембране 2 трансмембранных района, способен связывать и гидролизовать АТФ. Функции ряда генов фактора не установлены. Возможно, в конъюгации участвуют и белковые продукты генов т. фактора, отличного от района. Возможно, в конъюгации участвует белок, чей ген расположен в лидерном районе. Два гена фактора обуславливают т. фактор, т. фактор, быть реципиентом. Это гены ТгаТ и . Действуют они на разных этапах конъюгации независимо друг от друга. ТгаТ липопротсин, локализован во внешней мембране, препятствует образованию контакта между донором и реципиентом. , белок внутренней мембраны, препятствует вхождению ДНК донора после образования конъюгационной пары. Регуляция процесса конъюгации. Вероятно, постоянная экспрессия генов конъюгации клетке не выгодна процесс этот энергозатратный клетки гибнут в присутствии мужских фагов. Вероятно поэтому у фактора существует многоуровневая система регуляции активности генов конъюгации Из 9 промоторов района один, Р1шу , служит для считывания полицистронной РНК, соответствующей генам. Активност этого промотора в наибольшей степени повержена регуляции со стороны как белков плазмиды, так клеткихозяина. Главным регулятором является его активатор, белок . Активность в свою очередь регулируется белками плазмиды , и белками хромосомы xx и АгсААгсВ, а также i системой плазмиды. Ген кодирует нетранслируемую РНК н, которая конститутивно синтезируется с участка ДНК, соответствующего лидериой последовательности гена , но с противоположной нити ДНК. Гомологичное спаривание i и РНК отчасти подавляет трансляцию белка. Белок i РНКсвязывающий белок, взаимодействует с i РНК и увеличивает время се полужизни с 2 до более чем мин. У фактора ген i не работает, т. I3. Поэтому ,i фактора дерепрессирован. На экспрессию генов района фактора влияют многие внешние факторы температура, стадия роста клеток, концентрация цАМФ. Сходство элементов конъюгативного аппарата с компонентами системы секреции IV типа 4. IV типа. Существует пять типов систем секреции макромолекул у микроорганизмов. Особенностью 4 является то, что эта система способна осуществлять межклеточный транспорт не только белков, но и нуклсопротеиновых компонентов. К 4 относятся секреция токсина у В. токсина у Н. i. Наиболее изучена 4 i плазмид . ViViсисгема, осуществляющая перенос фрагментов бактериальной ДНК в клетки растений. Белки этой системы стали модельными при изучении 4, а также комплекса конъюгации. Основных белков этой системы белков ViVi 1 и СРбелок Vi . , i, ii , ii, , ii . , , рис. фактора . Ниже приведена краткая характеристика этих белков , , . Vi лизоцимподобная гликозилаза. Vi2 структурная субъединица нилей. Vi3 белок внешней мембраны. Vi4 белок внутренней мембраны. Имеет АТФсвязывающую и АТФазную активности. Вместе с Vi 1 и Vi4 является энергетическим мотором секреции. Одновременно является структурным компонентом канала, по которому осуществляется транспорт ДНК. Vi5 локализован на пилях, есть в цитоплазме и на внутренней мембране. Возможно, выполняет адгезинподобные функции и участвует в соединении бактериальных клеток. Vi6 белок внутренней мембраны, главный компонент конъюгационного канала. Необходим для биогенеза и элонгации пилей. Vi7 маленький липопротеин, локализован на пилях и на периплазматической стороне внешней мембраны. Vi8 локализован на периплазматической стороне внешней мембраны, вместе с белками Vi9 и Vi 0 образует комплекс, формирующий пору. Vi9 возможно, заякориваст комплекс белков, образующих пору Vi8Vi. Vi0 возможно, способен открывать или закрывать канал, по которому движется ДНК.