Разработка метода трансформации дрожжей Pichia methanolica и изучение судьбы трансформирующей ДНК в клетках

• Автор: Тарутина, Марина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с.

С символы перед обозначением генов указывают виды дрожжей, соответственно . Р i, . Рис. Структура центромеры дрожжей . Рис. Строение ов дрожжей . II. Рис. Модели репарации ДЫР за счет лигирования. Рис. Модели рекомбинации. Рис. Рис. Рис. МН4, плазмида . Рис. Рис. Рис 3. Зависимость частоты трансформации клеток дрожжей Р. ДНК. Рис. Рис. МН4 по кольцевой и линеаризованной плазмиде р1Т1. Рис. Саузернгибридизации ДНК трансформантов штамма МН. Рис. Саузернгибридизации ДНК трансформантов штамма I 1, полученных при использовании 3. Рис. Рис. МН по плазмиде рМТЮ и секторов белого цвета. Рис. Рис. Рис. Ара. Табл. Табл. Табл. Свойства челночных векторов дрожжей . Табл. Штаммы дрожжей . Табл. Табл. Перечень и свойства проанализированных трансформантов. Табл. Табл. Трансформация реципиентов . Табл. Эффективность трансформации реципиентов . Табл. МТ7. Табл. Табл. Табл. Табл. Анализ случайной выборки спор гибридов 1
Табл. Табл. Впервые о способности некоторых видов дрожжей утилизировать метанол в качестве источника углерода и энергии сообщили в году . Эю сразу же привлекло внимание специалистов в области биотехнологии и вскоре крупная американская нефтяная корпорация ii Со запустила проект создания производства белка одноклеточных из метанола с использованием в качестве продуцента дрожжей . Аналогичные исследования с дрожжами Я. ФРГ и Голландии при финансовой поддержке компании iv. В течение десяти лет гг. ВНИИгенетике. Впоследствии стало ясно, что при существующем соотношении мировых цен на энергоносители, продукты питания и корма для сх животных микробиологическое получение дрожжевою белка неконкурентоспособно. Тем нс менее задел, созданный благодаря вложенным в проекты материальным и интеллектуальным ресурсам послужил основой для развития тонкой биотехнологии данной труппы дрожжей, использующей уже выявленные к тому времени преимущества метнлотрофои для экспрессии гетерологичпых генов. Одновременно, дрожжи Я. Р i стали популярными объектами не только биотехнологии, но и генетики и молекулярной биологии, наряду с традиционными модельными видами . Ье. Эффективность конструирования микроорганизмовпродуцентов как основы для современных биотехнологических процессов с одной стороны зависит от разработанности генной инженерии базового объекта, а с другой определяется уровнем его генетической изученности. В большой степени это справедливо и в отношении мстилотрофных дрожжей, проявивших свой высокий биотехнологический потенциал относительно недавно. Как известно, методы классической генетики мато применимы к аспорогенным дрожжам, к которым относится одни из достаточно хорошо изученных биохимически видов мстнлотрофов С. Спорообразующис . Р. i более удобны для генетических манипуляций. Тем нс мснсс. Так, у одного из самых популярных органнзмовхозяев для гетерологичной экспрессии генов. I . Более продвинуты в этом отношении дрожжи Н. М.Глисона созданы генетические линии и разработаны все необходимые приемы классической генетики , , , . Однако наиболее изученным с генетической точки зрения, безусловно, является вил . Р i МН4. Толсторуков, , основы частной генетики которого заложены в нашем институте. Толсторуков и др. Толсторуков, Беневоленский, , , Беневоленский. Толсторуков. Толсторуков. Гфрсмов, . Развитие молекулярной генетики и биотехнологии этого вида дрожжей до начала нашей работы заменю сдерживалось отсутствием эффективных методов трансформации и удовлетворительной системы векторхозяни. Продемонстрированная в свое время Нсйстатом Нейстат и др. I и 2 не получила дальнейшего развития изза крайне низких частот и неясности механизмов, что делало ее методически неприемлемой для практической работы. Таким образом, для наиболее генетически изученного представителя данной группы микроорганизмов, дрожжей . В этой связи данное исследование было направлено на разработку более эффективных методов трансформации дрожжей . МН4 кольцевыми и линейными молекулами ДНК, в т. Усовершенствование методов трансформации резко увеличило биотехнологический потенциал дрожжей .