Закономерности политенизации гетерохроматиновых районов хромосом у Drosophila melanogaster

• Автор: Алексеенко, Артем Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 117 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Струстурно функциональная организация гетерохроматина Обзор литературы

1.1. Характеристики гетерохроматина в метафазных хромосомах i

1.1.1. Цитологические характеристики

1.1.2. Поздняя репликация ДНК в клеточном цикле

1.1.3. Молекулярный состав гетерохроматина

1.1.4. Г енетическое содержание гетерохроматина

1.1.5. Гстерохроматин в аметоенезе и эмбриогенезе

1.2. Гетсрохроматии в политенных хромосомах i

1.2.1. Прицентромерный гетерохроматин ПГХ

1.2.1.1. Цитологические харакгеристики ГХ
1.2.1.2. Молекулярный состав а и ПГХ
1.2.1.3. Неполная лолитеиизация последовательностей ДНК нсдорелликация
1.2.2 Белки гетерохроматина
1.2.3. Эффект положения гена и нсдорелликация ДНК
1.3. Интеркалярный гетерохро.матин ИГХ
1.3.1. Цитологические характеристики
1.3.2. Генетический состав интеркалярного гетерохроматина
1.3.3. Репликация ДНК в клеточном цикле
1.4. Эпигенетически наследуемая инактивация гетерохроматиновых генов
1.5 Генетические факторы, влияющие на проявление свойств ИГХ и ПГХ
1.6 Заключение и постановка задачи исследования Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Линии i
2.2. Клоны ДНК и штаммы
2.3. Выделение илазмидной ДНК
2.4. Выделение геномной ДНК из тканей i
2.5. Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции
2.6. Электрофорез ДНК в агарозных гелях
2.7. Мечение ДИК
2.8. Определение относительной копийности сатсллитных последовательностей
2.9. Определение степени политснизации ДНК слюнных желез с помощью Саузернблот гибридизации
2 Приготовление препаратов для гибридизации i i
2 Гибридизация i i на политенных хромосомах
2 Иммуцоокраишвание политенных хромосом
2 Препараты политенных хромосом для цитологического анализа Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Нолитснизация последовательностей из районов ИГХ и ПГХ в клетках слюнных желез личинок генотипа
3.2 Определение участка недорепликации ДНК на физической карте района ИГХ Е12 в клетках слюнных желез линий
с разными дозами
3.3 Проявление свойств ИГХ и явление дозовой компенсации
3.3.1 Поиск последовательностей из района ИГХ А69 Ххромосомы
3.3.2 Анализ политенизации последовательностей ДНК из района
А69 Ххромосомы самок и самцов в разных политенных тканях
3.3.3 Генетические факторы, влияющие на проявление свойств
районов ИГХ Ххромосомы
3.4 Политенизация отдельных последовательностей гетерохроматина в различных тканях у мутантов
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 Ткансспсцифичность политенизации у мутантов оии
4.2 ииКЕ генетический фактор, супрессирующий недорепликацию ДНК в политенных тканях
4.3 Недорспликация в районе ВХС
4.4 Формирование комплекса ДК на Xхромосоме и супрессии недорепликации в районах ИГХ
4.5 Структура хроматина и недорепликация ДНК в районах ИГХ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Определить степень представленности последовательностей ДНК из района А69 Ххромосомы у самок и самцов в разных тканях. Выяснить, влияет ли декомнактизация хроматина, опосредованная дозовой компенсацией, на степень недорепликации ДНК в районе А69, а также на морфологические характеристики районов ИГХ Ххромосомы. Сравнить степень политенизации ДНК гетерохроматиновых районов лолитенных хромосом в слюнных железах и псевдопитающих клетках ооцитов у мутантов оШп. ИГХ и частичной политенизации в районах ПГХ. Па примере района Е12 была впервые определена зона нсдорспликации ДНК в районе ИГХ. Выявлена последовательность из зоны недорепликадии района ИГХ А69 X хромосомы, впервые показано, что наличие комплекса дозовой компенсации супрессируег недорепликацию ДНК, а таюкс частоты разломов в районах ИГХ X хромосомы. В работе проведены первые прямые эксперименты по определению последовательностей ДНК, недореплицирующихся в районах ИГХ. Показано, что процесс дозовой компенсации, приводящий к гипертрасикрипции генов Xхромосомы, также приводит к супрессии недорепликации. Результаты этих экспериментов являются базой для дальнейшего легального анализа причин нсдорспликации гетерохроматина в политенных тканях. В стендовом сообщении на XII Всероссийском симпозиуме по структуре и функциям клеточного ядра, октября г. Сашст Петербург, Россия. В стендовом сообщении на генетическом конгрессе, августа . Бейджинг, КНР. В стендовом сообщении на XVI на Европейской конференции по исследованию i, сентября 2 октября г. Цюрих, Швейцария. В стендовом сообщении на Всероссийском симпозиуме по структуре и функциям клеточного ядра, октября г. Санкт Петербург, Россия. В стендовом сообщении на Международном симпозиуме по исследованию инактивации Ххромосомы у млекопитающих, 6 сентября г. Новосибирск, Россия. v . , v . ., . , iv I. . i i i . V. . 09. Коряков Д. Е., Алексеенко . ., Беляева . ., Жимулев И. Ф. Модель динамичной организации гетерохроматина в политенных хромосомах дрозофилы Цитология. Т. . С. . Беляева Е. С., Алексеенко . ., Мошкин Ю. М., Коряков Д. ., Жимулев И. Ф. Генетический фактор, супрессирующий недорепликацию ДНК в политенных хормосомах i Н Генетика. . . . 20. v . ., iv I. , Vv . I., . ., i . ., v . . i ii i i ii i i . . . i. . V. . . v . ., . ., iv I. . i ii i X . . . V. . 3 9. . ., v . ., v . V., iv I. V., i . iv I. . i ii i i ii i i Ii i X Iivi i vii. . . Алексеенко . ., Беляева . ., Демакова О. В., Котликова И. В., Жимулев И. i Цитология. Т. . . 67. Основные результаты получены автором самостоятельно. Определение зоны недорепликации ДНК в районе Е12 проводилось совместно с Ю. М. Мошкиным и Г. Ф. Макаревичем. Иммуноокрашивание и анализ частот разломов хромосом совместно с к. О.В. Демаковой и д. Е.С. Беляевой. Автор выражает глубокую признательность и уважение членкорр. РАН И. Ф. Жимулеву, д. Е.С. Беляевой, к. О.В. Демаковой и к. Д.Е. Е.С. Беляеву, к. О.В. Дсмакову и Г. Ф. Макаревича за участие в работе и обсуждение результатов. . , В. i, . i, М. , Т. i, . и . . Чурикова за любезно предоставленные клоны ДI и линии мух. Автор благодарит к. С.А. Демакова, к. И.В. Макунина, к. Е.Б. Кокоза, к. С.А. Шестопал, к. Н.И Мальцеву, к. Ю.Б. Шварца за участие в освоении новых методов.