Изучение взаимоотношений фага pf16 с бактериями Pseudomonas Putida

• Автор: Арутюнян, Джульетта Гайковна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Ереван
• Количество страниц: 119 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОРГАНИЗАЦИИ I

1.1. Генетическая структура i

1.1.1. Особенности расположения генов, детерминирующих биосинтетические и катаболические функции на хромосоме i

1.2. Половые факторы i

1.3. Плазмиды биодеградации .i

1.3.1. Плазмида САМ

1.3.2. Плазмида ОСТ

1.3.3. Катаболизм ароматических углеводородов

1.3.4. Плазмиды и X
1.3.5. Плазмида
1.3.6. Плазмиды, детерминирующие утилизацию нафталина
1.3.7. Плазмида I
1.4. Трансдуцирующие фаги .i
1.4.1. Фаг I
1.4.2. Фаг 6
1.4.3. Фаг
1.4.4. Фаги , , РРЛР, специфичные к
.i РрС1
1.4.5. Дефектный фаг ГЛАВА II. НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ УМЕРЕННЫХ
ФАГОВ С БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКОЙ
2.1. Интеграция сагового генома с бактериальной хромосомой
2.2. Щподобные шаги, специфичные в отношении бактерий i
2.3. Супериммунятет. Лизогенная конверсия
ЭКСПЕРШЕНТАЛЪНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 2У. ТРАНСДУдаУЩАЯ СПОСОБНОСТЬ ФАГА РГ
4.1. Получение ауксотрофных мутантов у штамма
4.2. Трансдукционнын перенос хромосомных генов и плазмид о помощью фага 6
4.3. Изучение устойчивых к 6 трансдуктантов
4.4. Способность i г и v 6
трансдуктантов адсорбировать саг 6
4.5. Обработка устойчивых к 6 i и Iv трансдуктантов митомицином С
ГЛАВА У. МУТАНТЫ БАКТЕРИЙ, ОТОБРАННЫЕ ПРЯМОЙ СЕЛЕКЦИЕЙ
НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФАГУ 6
5.1. Отбор я изучение устойчивых к 6 мутантов
5.2. Способность фагоустойчивых штаммов адсорбировать фаг 6
5.3. Вторичная адсорбция фага i6 на клетках штамма инфицированных фагом i6
5.4. Обработка фагоустойчивых штаммов
митомицином С
ГЛАВА У1. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФАГА 6 И ФАГОВ,
ВЬЩЕЛЕННЫХ ИЗ ШТАММОВ ДА И ДАЗО
6.1. Определение спектра логического действия
6.2. Серологический анализ фагов
6.3. Морфология негативных колоний
6.4. Определение ОЦР фагов
6.5. Трансдуцирукяцая способность фагов
6.6. Электронномикроскопические наблюдения
ГЛАВА У. ЭЛЖТРОННОЖРОСКОПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ФАГА Р И ЕГО ДНК
ОБСУВДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Показано, что генетические детерминанты, которые контролируют пути диссимиляций органических соединений, используемых в качестве источника углерода, локализованы на плазмидах, названных плазмидами биодеградации i, , . У . Учитывая проблему фаголизиса в микробиологическом производстве, большую актуальность представляет изучение взаимодействия фагов с промышленными микроорганизмами, в том числе фага 6 с бакт ериями Р. Для изучения взаимодействия фага и бактериальной метки особый интерес представляют умеренные фаги. Однако, до настояще ге времени умеренные фаги . Литературные данные относительно природы фага 6 противоречивы. Так, некоторые авторы считают вирулентным фагом i . iii, ИЛИ вирулентный i, мутант умеренного шага. Отсутствие умеренных фагов у вида . .i не способны находиться в лизогенном состоянии. Таким образом, изучение взаимоотношений фага с бактериями . Цель настоящей работы заключалась в изучении некоторых аспектов взаимодействия фага 6 с бактериями . Соответственно были поставлены следующие основные задачи. У штаммов . Проверить способность полученных фагоустойчизых вариантов продуцировать жизнеспособные фаговые частицы. Провести сравнительное изучение фага и фаговых частиц, продуцирующих фагоустойчивыми вариантами. Провести электронношшроскопическое исследование фага 6 и его ДНК. Научная новизна и практическое значение. Получены устойчивые к фагу 6 трансдуктанты, которые оказались нестабильными как по селектируемому признаку, так и по фагоустойчивости. При прямой селекции по устойчивости к фагу 6 были отобраны варианты штаммов . У штаммов, выщепляющих чувствительные к 6 варианты,выделены жизнеспособные фаги и . Установлено, что устойчивость к фагу рПб у отобранных фагорезистентных производных штаммов . Такое же нарушение адсорбции суперинфицирующего гомологичного фага наблюдается при литическом цикле фага рП6. Полученные данные указывают на то, что фаг рП6 обладает мутагенным действием на бактерии Р. ЫИа, а также способен лизогергизировать их. В электронношшроскопических исследованиях определены длина и молекулярный вес ДНК фага рП6. Полученные данные о способности фага рИ6 при внутриклеточном развитии предотвращать адсорбцию суперинфицирующего гомологичного фага, а также возможность лизогенизацйи бактерий Р. ЫИа фагом рИ6, могут сыграть важную роль в выяснении генетической природы фага р Р.рииа. В связи с промышленным использованием штаммов . ГЛАВА. Аэробные псевдомонады бактерии большой научной и практической ценности. Они широко распространены в почве и в воде и являются активными участниками процесса минерализации органического материала в природе i, . Некоторые виды псевдомонад нашли широкое распространение в клинической практике, благодаря их резистентности к ряду агентов, включающему много антибиотиков , . Аэробные псевдомонады подробно описаны в работе Стейниера с соавторами i . Бактерии этого рода наделены следующими основными свойствами. Они являются одноклеточными организмами, имеющими форму прямой или изогнутой палочки длиной 1,5 4 мкм, шириной 0,5 1 мкм. Клетки способны передвигаться с помощью одной или более полярных жгутиков, однако, некоторые представители данного рода неподвижны. Бактерии рода грамотрицательны и не образуют эндоспор. Молекулярный кислород используется как конечный окислитель, но некоторые представители могут раоти в анаэробных условиях в среде, содержащей азот. Бактерии этого рода являются хемоорганотрофами, но встречаются также факультативные хемолитотрофы, способные использовать водород в качестве источника энергии. Под электронным микроскопом у 8 из проверенных видов псевдомонад были обнаружены пили , . Характерной чертой представителей данного рода является также пигментация i, . Среди видов рода наиболее детально изучены i И i ДЛЯ ОбОЙХ ВИДОВ были разработаны системы рекомбинационного анализа трансдукция конъюгация, трансформация, а также методы выделения мутантов.