Цитогенетический и биохимический анализ одиннадцати клеточных линий лимфом Бёркитта

• Автор: Карпова, Мария Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 164 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ЛИМФОМЫ БРКИТТЛ.

1.1.1. История открытия лимфом Бркитта.

1.1.2. Патоморфологическая характеристика лимфом Бркитта

1.1.3. Клеточные линии лимфом Бркитта.

1.2. Апоптоз ПРОЦЕСС ЕСТЕСТВЕННОЙ гибели клеток.

1.2.1. История открытия клеточной гибели.

1.2.2. Морфология клеточной гибели.

1.2.3. Молекулярные механизмы апоптоза.
1.2.4. Удаление клеточных остатков.
1.2.5. Типы клеточной гибели.
1.2.6. Программируемая клеточная гибель в эволюционном аспекте
1.3. Апоптоз и Рак.
1.3.1. Апоптотический парадокс раковых клеток
1.3.2. Устойчивость к апоптозу.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Клеточные линии.
2.2. МолекулярноЦитогенетические Методы.
2.2.1. Мультиплексная Количественная Флуоресцентная Полимеразная Цепная Реакция.
2.2.2. Приготовление препаратов митотических хромосом из опухолевых клеток.
2.2.3. Спектральное Кариотипирование.
2.2.4. Сравнительная Геномная Гибридизация.
2.2.5. Флуоресцентная гибридизация i i.
2.2.6. Анализ конденсации клеточных ядер.
2.3. УСЛОВИЯ ИНДУКЦИИ АПОПТОЗЛ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК.
2.4. Методы проточной цитометрии.
2.4.1. Анализ содержания ДНК.
2.4.2. Анапа активации каспазы 3
2.4.3. Анапа презентации фосфатидилсерина на поверхности клеток.
2.4.4. Аналш фронтального светорассеяния клеток
2.5. Методы работы с белками.
2.5.1. Анайа энзиматической активности каспаз 3 и 7
2.5.2. Иммупоблоттинг Вестернблот анализ
2.6. Методы статистической обработки.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Анализ полиморфных маркеров с помощью метода мультиплексной количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции ПЦР.
3.2. Получение полных кариотипов одиннадцати Вклеточных линий
3.2.1. Спектральное кариотипирование.
3.2.2. Сравнительная геномная гибридизация.
3.2.3. Флуоресцентная гибридизация i i.
3.3. Определение степени химиочувствительности одиннадцати Вклеточных линий
3.4. Определение характера воздействия на клетки экспериментального противоракового соединения Бетулиновой Кислоты БК
3.4.1. Аналш презентации фосфатидилсерина на поверхности клеток одиннадцати Вклеточных линий
3.4.2. Анапа фронтального светорассеяния клеток одиннадцати Вклеточных линий
3.4.3. Аналш энзиматической активности каспаз 3 и 7 в клеточных
щ лшатах одиннадцати Вклеточных линий.
3.4.4. Анализ морфологических изменений клеточных ядер в одиннадцати
Вклеточных линиях.
3.5. Определение уровня экспрессии белковингибиторов апоптоза в
ОДИННАДЦАТИ ВКЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Молекулярноцитогенетические особенности одиннадцати Вклеточных линий
4.2. Устойчивость к апоптозу в одиннадцати Вклеточных линий
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


По началу перспективы для установления клеточных линий из лимфоидных опухолей казались учным весьма туманными, поскольку на тот момент ни одна из многочисленных попыток культивировать клетки гематопоэтического ряда не увенчалась успехом i, . И встаки, первые клеточные линии гематопоэтического ряда позднее были получены v, . Вскоре было показано, что пациентов с лимфомами Бркитта являются носителями вируса ЭпштейнаБарр, что подтолкнуло к выдвижению гипотезы, объясняющей характерное географическое распределение лимфомы Бркитта в Африке , . Эта гипотеза заключается в том, что опухоли встречаются в районах с интенсивной заболеваемостью малярией. ЭпштейнаБарр, что в таких условиях может обуславливать злокачественный рост лимфоцитов и вызывать развитие лимфомы Бркитта i, i, . С тех пор вирус ЭпштейнаБарр являлся одним из немногих общепризнанных онкоассоциированных вирусов человека, и первым доказательством полученным в пользу вирусной теории рака для человека i, . Кроме проблемы этиологии лимфомы Дениса Бркитта интересовал и поиск наджного и удобного способа лечения этого чрезвычайно быстрорастущего и агрессивного типа опухолей. Радиация больных была невозможна изза удалнности Уганды, поэтому Бсркитт решил искать подходящую химиотерапию. Он смог убедить производителей предоставлять ему необходимое количество различных препаратов с целью их апробации в использовании отдельно от радиации. В распоряжении Бркитта были такие препараты как метатрексат, циклофосфамид, винкристин. Он использовал меньшие дозы препаратов, чтобы снизить токсический эффект и добился выдающихся результатов многие из пациентов после курса терапии показывали полную ремиссию опухоли без последующих рецидивов опухолевого роста i, . Таким образом, Денис Бркитг совершил переворот во всей противораковой терапии и лимфома Бркитта стала единственной на тот момент формой рака кроме чрезвычайно редкого заболевания хорионкарциномы, которая поддавалась лечению одной химиотерапией i, , . В году в Париже состоялась первая международная конференция, посвящнная африканским опухолям, именно на этой конференции было предложено называть эти новообразования опухолями Бркитта. В тот момент учные ещ не определились с гистологическим типом этих неоплазий и позднее слово опухоли заменилось на лимфомы i, . Советом по Медицинским Исследованиям Великобритании i, . В , после двадцати лет работы в Африке он переехал в Лондон, где продолжал свою научную деятельность. С года Бркитт не менее успешно занимался проблемой диетологии в развитии хронических заболеваний. В году Денис Парсонс Беркитт скончался в возрасте лет. Он оставался активным учным до последнего момента и успел прочитать в тот день свою последнюю лекцию i, i, , iv, . По классификации Всемирной Организации Здравоохранения лимфома Бркитта БЛ это высоко агрессивная зрелая Вклеточная неоплазия, состоящая из эндемической эБЛ, спорадической сБЛ и ассоциированной с вирусом иммунодефицита человека IVБЛ форм. Все эти варианты лимфомы Бркитта схожи по многим морфологическим и иммунологическим характеристикам, их различия состоят в клинических и географических проявлениях i, . Так, эндемическая форма превалирует у детей экваториальной Африки и наиболее часто затрагивает челюсти и почки спорадическая форма составляет 12 от всех лимфом в Восточной Европе и Америке и затрагивает в основном брюшную полость. Лимфома Бркитта, ассоциированная с иммунодефицитом, возникает у больных ВИЧ в тех случаях, когда у них насчитывается достаточное количество 0 клетокмкл 4 положительных лимфоцитов и так же затрагивает брюшную полость. По гистологическим параметрам выделяют классическую и атипическую, или Бркиттподобную, формы лимфом Бркитта. Для классической формы характерна монотонная пролиферация примитивных клеток мкм в диаметре, которые имеют круглую или овальную форму ядер и от двух до пяти хорошо заметных базофильных нуклеолей. При небольшом увеличении микроскопа опухоли чрезвычайно мономорфны и демонстрируют характерную морфологию звздного неба.