Молекулярно-цитогенетические исследования мозаичных форм численных хромосомных аномалий в постнатальном и эмбриональном развитии

• Автор: Колотий, Алексей Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Б.м.
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ4.

1. ВВЕДЕНИЕ.5.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Хромосомные аномалии и клеточный мозаицизм.

2.1.1. Классификация хромосомных аномалий

2.1.2. Клеточный мозаицизм по аномалиям хромосом, общая характеристика .

2.1.3. Мозаичные формы аиеуплоидий.

2.1.4. Современные подходы к исследованию мозаичных форм хромосомных аномалий

2.2. Мозаичные формы хромосомных аномалий в эмбриональном развитии .

2.2.1. Хромосомные аномалии у спонтанных абортусов.

2.2.1.1. Хромосомные аномалии в материале спонтанных абортусов, выявляемые цитогенетическими методами.
2.2.1.2. Хромосомные аномалии в материале спонтанных абортусов, выявляемые,
с помощью молекулярноцитогенетических методов
2.2.1.3. Хромосомные аномалии у повторных спонтанных абортусов.
2.2.1.4. Хромосомные аномалии у супружеских пар с повторными спонтанными абортами.
2.2.2. Летальность эмбрионов при хромосомных аномалиях.
2.3. Мозаичные формы различных хромосомных аномалий в постнатальном
развитии.
2.3.1. Мозаичные формы численных аномалий плюсом хромосомы X и У .
2.3.1.1. Хромосома X.
2.3.1.2. Хромосома У.
2.3.2. Численные аномалии аутосом, их мозаичные формы
2.3.2.1. Трисомия хромосомы
2.3.2.2. Трисомия хромосомы
2.3.2.3. Трисомия хромосомы синдром Патау.
2.3.2.4. Трисомия хромосомы синдром Эдвардса
2.3.2.5. Трисомия хромосомы синдром Дауна.
2.3.2.6. Трисомия хромосомы синдром кошачьего глаза.
2.4. Заключение.
3. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Объект исследования.
3.2 Методы исследования
3.2.1. Цитогенетический метод
3.2.1.1. Культивирование лимфоцитов периферической крови.
3.2.1.2. Приготовление препаратов метафазных хромосом и интерфазных ядер .
3.2.1.3. окрашивание хромосом
3.2.1.4. Сокрашиваиие хромосом
3.2.1.5. Принцип анализа хромосомных препаратов
3.2.2. Метод получения препаратов интерфазных ядер из материала спонтанных абортусов
3.2.3. Молекулярноцитогенетические методы.
3.2.3.1. ДНКполимсразная реакция замещения никтрансляция.
3.2.3.2 Флюоресцентная гибридизация i i I на препаратах клеток
с использованием проб, меченых различными флюорофорами.
3.2.3.3. Принцип анализа флюоресцентных сигналов после проведения гибридизации i i.
3.3. Статистическая обработка полученных результатов.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4.1. Численные хромосомные аномалии спонтанных абортусов, выявляемые методом I группа I .
4.1.1. Структура и частота хромосомных аномалий
4.1.1.1. Анеунлоидия аутосом.
4.1.1.2. Анеунлоидия гоносом хромосомы X и .
4.1.1.3. Полиплоидия.
4.1.1.4. Случаи выявления нескольких хромосомных аномалий в одном образце спонтанного абортуса.
4.1.2. Анализ материнского возраста при спонтанных аборгусах с различными хромосомными аномалиями
4.1.3. Сроки беременности при спонтанных аборгусах с различными хромосомными аномалиями.
4.1.4. Соотношение полов.
4.1.5. Обсуждение результатов исследования.
4.2. Обследование детей с недифференцированными формами задержки психомоторного или психоречевого развития, пороками иили микроаномалиями развития группа II
4.2.1. Анализ хромосомных аномалий, выявляемых цитогенетическими исследованиями
4.2.2. Анализ хромосомных аномалий, выявляемых молекулярноцигогенетическими исследованиями
4.2.2.1. I исследования случаев мозаицизма, определенного цитогенетическим методом
4.2.2.2. I исследования при незначительной доле аномальных клеток, выявленных цитогенетическим методом.1.
4.2.2.3. I обследование детей со стертой клинической картиной и регулярным кариотипом, определенным цитогенетически.3.
4.2.3. Анализ соотношения полов.6.
4.2.4. Обсуждение результатов исследования8.
4.3. Сравнение результатов исследования, полученных в двух анализируемых
группах.0.
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.ИЗ.
6. ВЫВОДЫ6.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.9.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВПР врожденные пороки развития ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота ЗГРР задержка психоречевого развития ЗПМР задержка психомоторного развития МАР малые аномалии развития МФ мозаичные формы
МВПР множественные врожденные пороки развития
СА спонтанные абортусы
СД синдром Дауна
СШТ синдром ШсрешевскогоТсрнсра
ФГА фитогемагглютинин ХА хромосомные аномалии дУТФ дезоксиурилин 5трифосфаг дЦТФ дезоксицитидин 5трифосфат 1,4диазабицикло2.2.2октан I 4,6диамидино2фенилиндол
I флюоресцентная гибридизация на препарате i i iii I многоцветовая флюоресцентная гибридизация на препарате i i i iii
фосфатносолевой буфер i
натрий нитратный солевой буфер ii i
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


На основании оценки частоты мозаицизма но отдельным хромосомам, включая скрытые формы, и анализа фенотипа детей с мозаичными формами хромосомных синдромов определены следующие показания для проведения молекулярноцитогенетической диагностики стертая клиническая картина таких хромосомных синдромов у детей, как синдромы Дауна, Эдвардса, трисомии хромосомы X, ШсрсшевскогоТернера дисгенезия гонад при нормальном кариотипе, определенном цитогенетическим методом. Эффективность выявления скрытых мозаичных форм численных ХА молекулярноцитогенетическим методом на интерфазных клетках показывает целесообразность использования I метода для выявления хромосомной патологии, включая мозаичные формы, в пренатальной и постнатальной диагностике. Разработан метод приготовления цитологических препаратов клеток эмбриональных тканей для проведения интерфазной многоцветовой молекулярноцитогенетической диагностики. Оптимизированы условия проведения метода I на интерфазных клетках. При исследовании хромосомного набора спонтанных абортусов рекомендовано применение молекулярноцитогенетического метода I с использованием ДНК проб на хромосомы, наиболее часто вовлеченные в анеуплоидию для выявления скрытых мозаичных форм численных хромосомных аномалий. Для более эффективного выявления хромосомного мозаицизма рекомендовано проведение интерфазной многоцветовой I с анализом большого числа клеток 0. Рекомендуется приготовление препаратов иитерфазных клеток ворсин хориона па основе выделения и фиксации клеток в пробирке, а не на стекле, как принято для цитогенетической диагностики. При проведении интерфазного молекулярноцитогенетического анализа следует учитывать как сроки приготовления препаратов, так и условия их последующей обработки. Результат, диссертационной работы использованы для диагностики хромосомных аномалий у детей с задержкой психомоторного или психоречевого развития, пороками иили микроаномалиями развития в лаборатории молекулярной цитогенетики нервнопсихических заболеваний ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий при медикогенетичсском консультировании супружеских пар с нарушением репродуктивной функции в клинике акушерства и гинекологии Московской медицинской академии им. И.М. Ссченова, консультативном отделении МНИИ педиатрии и детской хирургии Росмедтехнологий, лаборатории цитогенетики Научного центра психического здоровья РАМН. Определена частота мозаичных форм численных аномалий в эмбриональном развитии на большой выборке спонтанных абортусов ранних сроков беременности по хромосомам 9, , , , , , X и и полиплоидии, которая составила ,6. Определена частота мозаичных форм хромосомных аномалий в раннем постнатальном развитии, которая составила 5,9 в группе детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками иили микроаномалнями развития. Показано, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий наблюдаются в материале спонтанных абортусов в четыре раза чаще, чем у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками иили
микроаномалиями развития. Таким образом, значительная часть плодов с мозаичными формами численных хромосомных аномалий погибает на ранних стадиях эмбриогенеза. I с целью выявления скрытого мозаицизма у детей с задержкой психомоторного и психоречевого развития, пороками иили микроаномалиями развития. Хромосомные аномалии и клеточный мозанцизм. Согласно международной номенклатуре по цитогенетике человека I, , аномалии хромосом, выявляемые в медицинской цитогенетике, имеют сгрогую классификацию. Классификация хромосомных аномалиГ. К численным ХА относятся полиплоидия и анеуплоидия. ХХХХХУ или ХУУ и в 4 раза тстранлоидия кариотип ,ХХХХХХУУ. Популяционная частота тринлоидии и тетраплоидни среди живорожденных не установлена Ворсанова и др. Ввиду грубых врожденных пороков развития ВИР, затрагивающих основные органы и системы, продолжительность жизни детей с полиплоидией составляет несколько дней. Большая часть полиплоидных эмбрионов погибает в первом и втором триместрах беременности. Анеуплоидия увеличение или уменьшение числа отдельных хромосом, не кратное гаплоидному. Наиболее частыми проявлениями анеуилоидии являются трисомии, когда в кариотипе имеются три гомологичыс хромосомы и моносомии, возникающие в результате отсутствия одной из двух гомологичных хромосом. Как трисомии, так и моносомии могут проявляться с вовлечением хромосомы но всей ее длине полные трисомии и моносомии и по части хромосомы частичные трисомии и моносомии.