Влияние гена SuUR на эффект положения и локализацию белков гетерохроматина в политенных хромосомах Drosophila melanogaster

• Автор: Болдырева, Лидия Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Гстсрохроматин и эффект положения мозаичного тина ЭПМ.

1.1 Общие представления о типах гетерохроматина и их организации у .

Состав ДНК прицентромерного гетерохроматина.

Эффект положения мозаичного типа ЭПМ

Распространение инактивации i

Неоднородность гстсрохроматина в отношении индукции ЭПМ.

Цитологический уровень проявления ЭПМ.

Модификаторы ЭПМ

Интеркапярный гетерохроматин

1.2 Молекулярные механизмы инактивации генетического материала при ЭПМ

Организация гетерохроматиновых доменов
Гетерохроматиновые белки модификаторы ЭПМ НР1, НР2, V, V3
Роль белкового комплекса НР1 и V в инактивации и е распространении Рсзависимая репрессия генов значение Рскомплексов для молчания эухроматиновых
Барьеры между эу и гетерохроматином
Регуляторные РНК
1.3 специфический белок гетерохроматина.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Линии i , их ведение
2.2 Экстракция красного глазного пигмента мух линий, содержащих Iv4.
2.3 Подсчет доли щетинок у мух, несущих минихромосому ,
вызывающую ЭПМ гена
2.4 Подсчет доли щетинок у мух, несущих ь.
2.5 Статистическая обработка результатов.
2.6. Приготовление препаратов для иммуноокрашивания политенных хромосом
2.7 Иммуноокрашивание политенных хромосом
2.8 Анализ препаратов
2.9 Вестсрнблот гибридизация
2. Саузернблот гибридизация.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1 Влияние гена на ЭПМ
3.1.1 Влияние мутации на репрессию гена i в инверсии I, гена в минихромосоме , мутации в транслокации 1 и гена в инверсии
3.1.2 Влияние овсрэкспрессии гена на ЭПМ гена i в инверсии 1п1х , в минихромосомс , мутации в
3.1.3 Корреляция локализации белка с изменением морфологии района, подверженного ЭПМ в перестройке 2.
3.1.4 Влияние мутации на степень политснизации последовательностей в районах, подверженных ЭПМ
3.2 Влияние гена на локализацию белков хроматина НР1, V, НР2 и
3.2.1 Связывание с хромосомами зависит от НР1.
3.2.2 Зависимость локализации НР1 от
3.2.3 Овсрэкспрессия и НР1 приводит к отсутствию локализации V в хромоцентре.
3.2.4 Оверэкспрессия не приводит к изменению паттерна локализации белка НР2
3.2.5 Распределения и не зависят друг от друга.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1 Белок является универсальным маркером гетерохроматиновых районов
4.2 Ген является модификатором ЭПМ.
4.2 Взаимодействие гена с другими модификаторами ЭПМ
Выводы.
Список литерату


Фенотип мутации подавление недорепликации в гетерохроматиновых районах политенных хромосом обусловлен тем, что все районы интеркалярного гетерохроматина и некоторые прицентромерные районы заканчивают репликацию существенно раньше, чем в норме. Механизмы влияния гена на репликацию ДНК пока неизвестны. Он может действовать на уровне упаковки хроматина, делая его менее доступным для репликативной машины, однако, возможно также влияние на саму систему репликации. ЭПМ возникает вследствие распространения репрессированного состояния гетерохроматина на перемещенные к нему гены. Поэтому об участии того или иного фактора в репрессии гегерохроматина судят, прежде всего, по его влиянию на степень проявления эффекта положения. Так, гены, кодирующие структурные белки гетерохроматина I и V, V, являются сильнейшими модификаторами эффекта положения . Из этих положений вытекают цели настоящей работы. Природа факторов, определяющих локализацию в гетерохроматиновых районах, до настоящего времени не ясна. Не известно, также, участвует ли в организации гетерохроматиновых доменов и взаимодействует ли он с другими гетерохроматиновыми белками, такими как и НР1. Выяснить, является ли ген модификатором эпигенетического сайленсинга, возникающего при мозаичном эффекте положения гена. Определить взаимоотношения с другими хорошо известными белками гетерохроматина. Изучить влияние гена БиШ на политенизацию ДНК в районах хромосом, подверженных эффекту положения. Впервые выявлена функция гена БиЦЯ как супрессора мозаичной экспрессии и недорспликации генетического материала при эффекте положения. Впервые показано, что белок ДЖ появляется в эухромати новых участках политенных хромосом, подверженных гетерохроматизации при эффекте положения. Открыта взаимозависимость хромосомной локализации белка ЛЖ с белком НР1 важнейшим компонентом репрессированных гетерохроматиновых доменов. Показано, что изменение в локализации и количестве этих белков приводят к сложной цепи нарушений в распределении белковых компонентов гетерохроматина. Обнаруженное в работе сложное взаимодействие между гетерохроматиновыми белками необходимо учитывать во всех исследованиях, где используются линии, мутантные по генам, кодирующим эти белки, и оверэкспрессия этих генов. ДНК. Результаты работы представлены на международных конференциях в докладах и стендовых сообщениях на 5ой международной конференции по гетерохроматину Кортона, Италия, , XIV Всероссийском симпозиуме Структура и функции клеточного ядра СанктПетербург, , III съезде ВОГиС Генетика в XXI веке современное состояние и перспективы развития Москва, , 7ой международной конференции по гетерохроматину Губбио, Италия, , 8ой международной конференции по гетерохроматину Губбио, Италия, . Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов, обсуждения, а также выводов и списка цитируемой литературы, в которые входит 7 ссылок. Работа изложена на 4 страницах машинописного текста, содержит таблиц и рисунков. I, v , i I. V., i V. Vv ЕЛ. V., v , v . X3. V. 6. I, v , i I. V., i V. Vv . I., v , v , v . I.V. V.3. V., Vv . I., v , , iv I. V. . V., v , iv I . V.9 . Нанаев . А., Болдырева I. В., Алексеенко . Жимулев И. Ф. Особенности политенизации района интеркалярного гетерохроматина Е политенных хромосом i Н Цитология. Т. 9 С. Л.В. Болдырева, Т. Д. Колесникова, Юрлова, Г. В. Похолкова, Е. С. Беляева, И. Ф. Жимулев. Белки НР1 и взаимодействуют в районах интеркалярного гетерохроматина политенных хромосом i Н Цитология. Т. 9. С. 5. Основные результаты получены автором самостоятельно. Работа по выявлению домена , необходимого для перераспределения белка НР1, выполнена совместно с Т. Д. Колесниковой. Картирование сайтов локализации белка на политенных хромосомах линии дикого типа проведено И. Ф. Жимулевым. Саузерн гибридизация фрагментов из интеркалярного гетерохроматина района Е выполнялась совместно с С. А. Демаковым. Автор выражает глубокую признательность д. Е. С. Беляевой, академику РАН И. Ф. Жимулеву, к. Д. Е. Корякову, к. В.В. Шломс, к. Т.Д. Колесниковой, Пиндюрину за помощь в работе и обсуждение результатов. Автор также благодарен всем сотрудникам отдела молекулярной цитогенетики за постоянную поддержку.