Позиционное клонирование локусов количественных признаков домашней курицы

• Автор: Стекольникова, Виктория Александровна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 127 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Организация генома домашней курицы

1.1.1. Особенности молекулярной организации генома

1.1.2. Особенности кариотипа

1.2. Генетические карты хромосом.

1.3. Физические карты хромосом.

1.4. Гибридизация ДНКДНК i i как метод прямого физического картирования

1.5. Картирование хромосом домашней курицы методом гибридизации ДНКДНК i i.

1.6. Картирование , влияющих на качество яиц
1.7. Геномные библиотеки и их использование для позиционного клонирования
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.
2.1. Материал
2.2. Полимеразная цепная реакция.
2.3. Скринирование геномных библиотек
2.3.1. Олигонуклетидное мечение ДНКзондов
2.3.2. Гибридизация меченых ДНКзондов с геномными клонами
2.3.3. Верификация аутентичности ВАСклонов.
2.4. Трансформация клеток Е. i и выделение плазмидной ДНК
2.4.1. Трансформация клеток . i.
2.4.2. Выделение плазмидной ДНК.
2.4.3. Очистка плазмидной ДНК.
2.5. Приготовление препаратов митотических хромосом курицы.
2.6. Мечение ДНКзондов с помощью никтрансляции.
2.7. Преципитация ДНКзондов в присутствии конкурирующей ДНК и супрессия неспецифической гибридизации
2.8. Флуоресцентная гибридизация ДНКДНК i i.
2.8.1. Гибридизация меченых ДНКзондов с ДНК митотических хромосом курицы
2.8.2. Детекция гибридизационных сигналов с использованием флуоресцентных красителей
2.8.3. Анализ результатов гибридизации
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Выявление протяженных геномных клонов, содержащих микросателлитные последовательности ДНК, ограничивающие локусы и .
4.2. Установление локализации и
4.3. Выявление критического интервала для .
4.4. Выявление критического интервала для .
4.5. Геныкандидаты для .
4.6. Геныкандидаты для .
4.7. Перспективы и практическое применение результатов исследования ОТЬ БТ и АУЗЗ
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Позиционное клонирование это получение совокупности перекрывающихся протяженных геномных клонов контига района хромосомы, оказавшего наибольшее влияние на количественные признаки. В настоящее время известно несколько случаев успешного позиционного клонирования у человека и мыши . , , . i . В последнем исследовании был клонирован район величиной 3 сМ, обладающий наибольшим влиянием на жирность молока. В указанном исследовании был выявлен генкандидат для этого признака 1, показаны различия в его нуклеотидной последовательности у особей с различающимся фенотипом i . Несмотря на то, что у домашней курицы пока не известно случаев успешного позиционного клонирования , такие работы финансируются рядом государственных проектов и проводятся в нескольких ведущих лабораториях Европы и США vvvvvv. Существующие в настоящее время генетические карты домашней курицы сравнительно плотно насыщены молекулярными маркерами vvvvv. Геномные библиотеки высокой плотности филированные геномные библиотеки позволяют получать протяженные фрагменты ДНК, содержащие интересующую исследователей последовательность, и широко используются для анализа генома с использованием различных подходов i . Представленная работа посвящена позиционному клонированию двух районов хромосомы 4 домашней курицы, содержащих толщины скорлупы на неделе жизни и массы белка в яйце на неделе . Указанные признаки различаются у двух линий кур польская зеленоногая и родайленд на 3. Цели и задачи исследования. Целью данной работы является позиционное клонирование двух локусов количественных признаков домашней курицы масса белка в яйце на й неделе жизни курицынесушки и толщина скорлупы яйца на й неделе жизни курицынесушки . ТЬ А Научная новизна работы. Продемонстрирована эффективность использования филированных геномных библиотек для позиционного клонирования локусов количественных признаков птиц. Путем позиционного клонирования локусов количественных признаков толщины скорлупы на й неделе жизни 8Т и массы белка в яйце на й неделе АУЗЗ выявлено протяженных геномных клонов, содержащих микросателлитные последовательности ДНК, офаничивающие локусы количественных признаков А Т и установлена их локализация в районах ССА4я и ССА4я, соответственно. Выявлены интервалы полного сиквенса генома вСА4 . ОСА4 . А Т, соответственно. Теоретическая и практическая ценность работы. Результаты представленной к защите работы использованы при составлении баз данных по генетическим и физическим картам хромосом курицы и сравнительным картам человека, мыши и курицы vvvv. Интернет. СанктПетербургского государственного университета в рамках магистерской программы Эволюционная цитогенетика. Апробация работы. Материалы работы были представлены на конференции Актуальные проблемы генетики Московского общества генетиков и селекционеров Москва, , III Съезде Всероссийского общества генетиков и селекционеров Москва, , а также за рубежом на X Международной конференции по геномам животных, растений и микроорганизмов СанДиего, США, 4й Европейской цитогенетической конференции Болонья, Италия, й Европейской конференции по цитогенетике животных и генному картированию Жойе ен Жосас, Франция, XII Международной конференции по геномам животных, растений и микроорганизмов СанДиего, США, XIII Международной конференции по геномам животных, растений и микроорганизмов СанДиего, США, . Результаты периодически докладывались на семинарах отдела молекулярной генетики и биотехнологии ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН. Исследования проводили в соответствии с планом научноисследовательской работы ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН по теме Разработать систему молекулярногенетических маркеров, обеспечивающих повышение эффективности селекции сельскохозяйственных животных номер государственной регистрации . Публикация результатов. Материалы, представленные в диссертации были опубликованы в научных журналах i i, , i. Всего по теме работы опубликовано печатных работ, из них 7 статей и 9 тезисов.