Изучение структурных аномалий и точковых мутаций генов ЕХТ1 и ЕХТ2 при множественной экзостозной хондродисплазии и спорадических злокачественных новообразованиях

• Автор: Чеснокова, Галина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список используемых сокращений

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Клиническая характеристика заболевания

1.2 Картирование и клонирование генов X

1.2.1. Синдром ЛангераГидиона СЛГ

1.2.2. Синдром

1.2.3. Генетическое картирование МЭХД.

1.2.4. Клонирование гена ЕХТ1.

1.2.5. Клонирование гена ЕХТ2.

1.3. Возможная роль генов X в процессе формирования скелета позвоночных
1.3.1. белки как регуляторы эмбрионального развития.
1.3.2. Молекулярная регуляция дифференцировки хряща.
1.3.3. Предполагаемые функции и свойства X белков.
1.4. Поиск причин, приводящих к озлокачествлению
1.5. Поиск и характеристика мутаций.
1.5.1. Типы и номенклатура мутаций
1.5.2. Методы идентификации мутаций.
1.5.3. Детекция мутаций в генах ЕХТ1 и ЕХТ2.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Обследование больных.
2.2. Забор венозной крови.
2.3. Выделение геномной ДК
2.4. Рестрикция и электрофорез при проведении блотинггибридизации
2.5. Гибридизация с радиоактивно меченым зондом.
2.6. Полимеразная цепная реакция ПЦР
2.7. Радиоактивная нерадиоактивная детекция точковых мутаций методом
2.8. Анализ гетеродуплексов.
2.9. Определение нуклеотидной последовательности
2 Программное обеспечение компьютерного анализа ДНК
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
3.1. Характеристика больных.
3.2. Стратегия поиска мутаций в генах ЕХТ1 и ЕХТ2 в различных группах больных.
3.3. Исследование больных с наследственной формой МЭХД
3.3.1. Анализ полиморфных ДКмаркеров в семьях с МЭХД.
3.3.2. Поиск мутаций в генах ЕХТу больных с наследственной формой заболевания
3.4. Исследование больных со спорадической формой заболевания.
3.4.1. Точковые мутации в гене ЕХТ1.
3.4.2. Точковые мутации в гене ЕХТ2.
3.4.3. Структурные изменения в генах ЕХТ1 и ЕХТ2
3.5. Исследование больных МЭХД с экзостозами, претерпевшими злокачественную
трансформацию и больных со спорадическими формами злокачественных новообразований.
3.6. Характеристика полиморфных аллелей в гене ЕХТ1.
3.7. Анализ метилирования промоторной области генов ЕХТ1 и ЕХТ2 в
3.8. экзостозах, хондро и остеогенных саркомах
3.9. Частота и структура мутаций в генах ЕХТ1 и ЕХТ2 среди исследованных
больных
3.8.1. Спектр выявленных мутаций.
3 Причины, приводящие к озлокачсствлению
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Положения, выносимые на защиту. Определены частота и спектр молекулярной патологии генов X при МЭХД. Описаны новые мутации и полиморфизмы в генах АТпри МЭХД. Районы локализации генов X в ряде случаев повреждаются у больных со спорадическими остеогенными и хондросаркомами. Аномалии метилирования промоторных районов генов X не характерны при спорадических злокачественных новообразованиях и экзостозах, претерпевших злокачественную трансформацию. Разработаны подходы для лабораторной ДНКдиагностики МЭХД. Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Клиническая характеристика заболевания. Множественная экзостозная хондродиснлазия МЭХД относится к числу достаточно распространенных наследственных заболеваний. Частота заболевания в разных популяциях составляет от 10 до 10 или 1 на ортопедических больных, на его долю приходится ,4 всех доброкачественных опухолей, опухолеподобных и дисиластичсских поражений скелета. Заболевание имеет аутосомнодоминантный тип наследования, очень велика доля семейных случаев до . Пенетрантность составляет 0. Отмечается некоторое преобладание в популяции пораженных мужчин i . i . Этиология заболевания оставалась неясной до последнего времени, хотя в качестве причины предполагалась генная мутация, приводящая к пороку развития эпифизарной ростковой зоны хряща Раззоков, . МЭХД относится к числу наследственных системных заболеваний скелета, проявляется до 4 лет, начиная с бессимптомных форм и заканчивая генерализованными формами поражения скелета с многочисленными прогрессирующими деформациями костей и суставов, укорочением и вторичными изменениями костей, вторичными изменениями в мышечной системе, что вызывает нарушение функции опорнодвигательного аппарата. Как правило, к годам рост множественных экзостозов МЭ прекращается. Серьезным осложнением является трансформация отдельных экзостозов во вторичную хондрому иили хондросаркому, кроме того описаны отдельные случаи трансформации в остеогенную саркому , . По данным литературы до 5 случаев МЭХД претерпевают подобную трансформацию, из них около 5 приходится на хондросаркому Волков и др. Берглезов, Раззоков, . iii . Частота трансформации экзостозов за последние годы возросла и составляет около . Умственной отсталости при МЭХД, как правило, не наблюдается. Картирование и клонирование генов X. Клонирование генов, ответственных за МЭХД, названных генами X, является классическим примером клонирования генов с применением стратегии позиционного клонирования, поскольку этиология этого заболевания на уровне биохимических процессов остается до конца не выясненной. Только в этом году появились работы, авторы которых пытаются обосновать процессы, приводящие к образованию экзостозов, и выявить роль в этих процессах белков ЕХТ1 и ЕХТ2. Изменения в этих белках на данный момент принято считать причиной развития МЭХД i . Стратегия позиционного клонирования основана на информации о локализации заболевания на определенной хромосоме или в конкретном сегменте хромосомы. Первоначальный район локализации генакандидата может составлять до м. Наиболее широко распространен анализ сцепления между локусом болезни и полиморфными ДНКмарксрами в семьях с использованием различных статистических программ, основанных на вычислении вероятности сцепления или несцепления двух и более локусов с известной долей рекомбинантов в выборке семей или при анализе родословных vi, . i, . Второй подход основан на выявлении хромосомных аномалий, сопровождающих заболевание. Наличие цитогенетических аномалий значительно облегчает локализацию гена болезни в определенном районе хромосомы, которая сводится к поиску наименьшего участка перекрывания всех дслеций, клонированию точек разрыва при структурных перестройках и поиску потери гетерозиготности хромосомных районов, повреждаемых в опухолях , . , . , . Оба этих подхода были использованы при клонировании генов, ответственных за МЭХД.