Полиморфизм TG-обогащенной микросателлитной ДНК домашней курицы Gallus domesticus

• Автор: Чуркина, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 137 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Полиморфные ДНКмарксры эукариот.

Мини и микросатсллиты.

1.2. Способы детекции ДНКполнморфизма. ДНКфингерпринтиш

1.3. Мини и микросатсллитныс зонды, используемые в ДНКфингерпринпшге птиц.

1.4. Задачи, решаемые с помощью технологии ДНКфингерпринтинга

в исследованиях на курах и других видах птиц

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Использованные материалы.

2.2. Выделение ДНК из крови и тканей
2.3. Рестрикция ДНК
2.4. Электрофоретическое фракционирование гидролизованных фрагментов ДНК
2.5. Перенос ДНК из геля на фильтр
2.6. Амплификация и выделение плазмиды рОВ5.
2.7. Радиоактивное мечение плазмидызонда.
2.8. Прсдгибридизацня и гибридизация фильтра с меченным
2.9. Математическая обработка результатов.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Оценка информативности микросателлитного зонда рОВ5, используемого в ДНКфингерпринтинге домашних кур
3.1.1. Оптимизация технологии ДНКфингерпринтинга на основе
зонда рОВ5 у домашних кур.
3.1.2. Анализ картин гибридизации с зондом рОВ5 в группах неродственных кур.
3.1.3. Анализ гибридизационных картин в семьях
3.2. Изучение закономерностей оплодотворения при
искусственном осеменении кур смешанной спермой
3.3. Поиск лниийспсцифичсских ДНКмарксров у кур, подвергшихся длительной разнонаправленной селекции.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ЛИТЕРАТУРА


Такие полиморфные ДНКмаркеры встречаются в геночгах всех высших эукариот и представляют собой вариабельные по размеру блоки простых нуклеотидных повторов. Первый такой гнпервариабсльнын локус был выявлен при анализе полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ПДРФ. Большинство ПДРФмарксров диморфны и демонстрируют только два аллельных варианта наличие или отсутствие сайта рестрикции, и, следовательно, их гетерозиготность никогда не превышает . При анализе геномной ДНК человека случайно был обнаружен район, дающий свыше аллельных вариантов длины рестрикционных фрагментов i, . Коэффициент гетерозиготное Вслед за этим открытием так же случайно были обнаружены высоковариабельные районы в инсулиновом гене человека , в псевдогене зетаглобина i . . В каждом случае вариабельный район состоял из тандемных повторов коротких последовательностей названных Джеффрисом и соавторами минисателлитами . Такой полиморфизм длин минисателлитов может быть выявлен при использовании соответствующей рестриктазы, которая производит разрывы ДНК но краям повторов не нарушая целостности локуса. Исследовательская группа Джеффриса . Миоглобиновый минисателлит был фланкирован прямыми повторами длиной 9 и. Минисателлитная последовательность была выделена и клонирована в плазмиде . Один из полученных рекомбинантов V,7. В результате были отобраны 8 последовательностей, содержащих от 3 до тандемных копий мотивов, величина которых от п. Анализ этих повторяющихся мотивов показал, что вес они имеют одинаковые сердцевинные последовательности согепослсдоватслыюсти рис. I. Выделенные 8 минисатсллитов были использованы в качестве проб для гибридизации с рсстрицированой i и фракционированной геномной ДНК человека. Рис. Структура минисатсллитных последовательностей, выделенных из геномной клонотеки человека . В результате гибридизации миннсателлитной пробы . ДНК человека была получена гиперполнморфная картина, состоящая из большого числа фрагментов в диапазоне от 4 до т. Рисунок полос был до такой степени идивндуально специфичен что получил название фингерпринт ДНК ii отпечатки пальцев ДИК . ДНК фингерпринтинг iii или геномная дактилоскопия. Анализ согепоследовательностей миоглобинового минисателлита и выделенных с его помощью восьми минисатсллитов человека показал их сходство с сЫпослсдоватсльностью у . рис. I, являющейся сигналом для рекомбинации. Из этого наблюдения был сделан вывод, что минисатеялиты могут инициировать рекомбинацию. С другой стороны, подсчитано, что д. . Сравнение полученного результата с уровнем мсйотичсской рекомбинации 5 на гамету на 1 т. Джеффрис и соавторы предложили механизм дупликации, в соответствии с которым может происходить образование минисателлитов. Предполагается, что белок типа гесВС связывается с iподобиой последовательностью, локально раскручивает ДНК и вносит разрыв в одну из цепей, в результате чего образуется выступающий одноцепочечный участок ДНК, необходимый для образования гстсродуплскса. Если образовавшийся одноцепочечный участок не образует гетеро дуплекса, го мосле репарационного синтеза ДНК он может лигироваться с 3концом вновь синтезированной цени, что приведет к образованию двух коротких фрагментов, каждый из которых содержит iгомологичный участок, способствуюшнй неэквивалентному обмену и амплификации дуплицированного фрагмента с образованием мннисатсллита. . , . В результате дальнейших исследований накапливались факты, не соответствующие предложенной Джеффрисом гипотезе. , , . Анализ новообразованных аллелей мнннсатсллитов показал, что изменение длины мнннсатсллитов происходило за счет делеции мономеров, которая не сопровождалась обменом фланкирующими участками . . Следовательно, если деления и возникла в результате рекомбинации, то только между сестринскими хроматидами. Блисковскнн В. В. на основе обновленных представлений о механизмах рекомбинации .