Структурный анализ клонированных молекулярных маркеров хромосом человека

• Автор: Зайцев, Игорь Закванович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДШИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Сателлитные ДОС генома человека II

2. Альфоидные повтори генома человека и приматов 3. Повторяющиеся последовательности ДОС человека

с дисперсным распределением в хромосомах .

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Объекты исследования

2. Выделение и очистка ферментов.

3. Выделение и очистка ДОС.

4. Энзиматические реакции
5. Электрофорез ДНК и методы гибридизации ДНКДНК .
6. Методы определения первичной структуры ДНК .
7. Машинный анализ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 3. АНАЛИЗ КЛАСТЕРИЗОВАННЫХ ПРИЦЕНТРОМЕРНЫХ ПОВТОРОВ ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА 1. Конструирование и анализ кластеризованного, молекулярногенетического маркера МГМ
3Й хромосомы СрЫ0
2. Определение первичной структуры кластеризованного молекулярного маркера й хромосомы
3. Определение первичной структуры последовательностей ЕсоМ 0семейства альфоидной ДНК .
4. Общая и физическая гетерогенность нуклеотидных
последовательностей альфоидной ДНК человека
5. Анализ происхожденш альфоидной ДНК приматов и
человека .
Глава 4. АНАЛИЗ ПОВТОРОВ С ДИСПЕРСНЫМ РАСПРЕДЕЛЕНИИ
В ХРОМОСОМАХ ЧЕЛОВЕКА 1. Определение первичной структуры клонированной
последовательности
2. Селективность клонирования некоторых типов
последовательностей ДНК человека .
3. Анализ хромосомного распределения специального
типа последовательностей
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В то же время, в геноме человека и приматов существует так называемая альфоидная ДОС Мао, класс сложных тандмно организованных повторяюцихся последовательностей с длиной мономера в 92 п. ДНК локализуется в районах прицентромерного гетерохроматина хромосом I, 3, 5, 6, 7, и МапиеШз, Ь . Судя по широкому хромосомному спектру, этот вид повторов должен быть перспективным источником клонирования кластеризованных прицентромерных 1 хромосом. Однако, до недавнего времени общепринятым было мнение о высокой однородности нуклеотидных последовательностей основных семейств альфоидной ДОС человека маписШз. Ии. ММ. К настоящему времени более обнадеживанцие результаты, в отличие от ранее опубликованных, получены в нашей лаборатории. Так, показано, что некоторые клонированные последовательности, содержащие повторы альфоидной ДНК, характеризуются разнообразной и специфической гибридизацией в районах прицентромерного гетерохроматина хромосом человека, а также полиморфизмом локальной повторенности. Последовательности другого типа характеризуются дисперсным распределением в хромосомах см. Материалы и методы, 1. В то же время, отсутствие сведений о первичной структуре данных последовательностей затрудняло дальнейшую работу по поиску МШ. ДЖ в геноме и наметить конкретные способы целенаправленного поиска и конструирования М1М хромосом человека. Научная новизна результатов. Обнаружен новый тип последовательностей А1и семейства, тлеющий специфическую картину распределения в хромосомах человека. Впервые определена первичная структура крупного фрагмента альфоидной ДЖ человека 2,5 т. Впервые установлена нуклеотидная последовательность кластеризованного молекулярногенетического маркера 3й хромосомы и показано, что структурный полиморфизм в данном случае определяется особым типом альфоидной ДЖ. ДЖ человека длиной 71 п. I хромосом человека для дальнейшего их применения в цитогенетическом картировании генома и медикогенетическом консультировании. Разработаны также новый экспрессметод выделения высокоочищенной лимфоцитарной ДНК Шапиро,Зайцев и соавт. Зайцев,Яковлев,, пригодные для массового популяционного исследования. ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Вариации строения хромосом человека известны с х годов. Сначала их в основном связывали с врожденными фенотипическими аномалиями , i , , . Впоследствии, однако, хромосомный полиморфизм был обнаружен во многих случаях и у здоровых людей Подугольникова,Батиенко, ,, , . ПрокофьеваБельговская, . Открытие методов дифференциального окрашивания хромосом привело к значительному уточнению сведений о хромосомном полиморфизме и к обнаружению популяционно стабильных вариантов гетерохроматиновых районов ГХР. Для гетерохроматина Стипа также был обнаружен полиморфизм В прицентромерных районах хромосом 1, 9 И i, , . Этот тип полиморфизма регистрируется как наличие популяционных вариантов Сблока по его размерам и плотности окрашивания. Самый важный генетический вывод, который следует из совокупности исследований С и полиморфизма, заключается в том, что полиморфные варианты гетерохроматиновых районов хромосом являются относительно стабильными для каждого индивида и наследуются как кодоминантные менделевские признаки Микельсаар, Петрин, i, , 7 , i, . Микельсаар,, i, . Однако при переходе к рутинному использованию полиморфизма ГХР на основе дифференциального окрашивания, исследователи сталкивались с различными затруднениями в его анализе. Эти трудности можно разбить на две группы а объективные, связанные с тем, что на регистрацию Сполиморфизма сильное вляиние оказывает общая и дифференциальная степень компактизации хромосом Гиндилис, Дерягин и соавт. Иорданский и соавт. Дерягин, . Использование методов дифференциального окрашивания хромосом для выявления цитогенетических маркеров ограничено и тем, что для большинства хромосом человека достоверный полиморфизм до настоящего времени не обнаружен.