Структурная обусловленность физиологических функций альфа-тромбина и его аналогов

• Автор: Струкова, Светлана Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 374 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ стр.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМАХ ОБРАЗОВАНИЯ ТРОМБИНА

I. Молекулярные основы превращения протромбина

2. Внутренний и внешний пути образования тромбина

3.Ранние стадии образования тромбина. Роль тромбоцитов в тромбинообразовании

ГЛАВА 2. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ТРОМБИНА.

I. Структурные особенности тромбина в сравнении

со структурами гомологичных сериновых прогеиназ.

2. Специфичность каталитического действия тромбина

3. Природа и локализация центра узнавания высокомолекулярных субстратов
4. Взаимодействие остромбина с клеточными рецепторами.
1. .Полифункциональность тромбина
2. Связывание атромбина с рецепторами тромбоцитов
3. Действие отромбина на рецепторы клеток
стенки сосуда.
5. Возбуждение тромбином реакции прогивосвергывающей
системы.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ПОЛУЧЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ
аТРОМБИНА И ЕГО ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ
стр.
I. Выделение и очистка протромбина. Модификация
его гепарином.
2. Способы получения предшественников тромбина
прегромбина I и прегромбина 2.
3. Получение и свойства остромбина и его форм 6 ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНОУНКЦШНАЛЬНЫХ
ОСОБЕННОСТЕЙ а ТРОМБИНА
Механизмы взаимодействия и тромби
нов с низкомолекуляшыми синтетическими субстратами
1. Кинетика гидролиза синтетических эфиров аргинина
2. Роль гидрофобных участков связывания в катализе а и тромбинами.
3. Эффективность катализа ои тромбинами метиловых эфиров Пг арилсульфониларгинина
и арилсульфонилвалиларгинина. 7.
4. Значение вторичных взаимодействий при гидролизе амидных трипепгидных субстратов
2. Механизмы взаимодействия о и громби
нов с белками крови и гепарином
1. Протеолиз протромбина о и р тромбина
2. Активация и Р тромбинами фактораХШ
3. Действие Хи Р тромбинов на фактор У
4. Взаимодействие оС и р тромбинов с кининогенами.
5. Ингибирование гепарином каталитической активности X и р тромбинов.
стр.
ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНЫХ ОСНОВ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ ТРОМБИНА. РОЛЬ ЦЕНТРА УЗНАВАНИЯ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СУБСТРАТОВ В
ВОЗБУЖДЕНИИ ПРОТИВОСВЕРТЫВАЮЩЕЙ СИСТЕМЫ
I. Исследование механизмов влияния тромбина.
его форм и аналогов на состояние свертывающей и
противосвергывающей систем организма
1. Влияние тромбина, коммерческого препарата тромбина и Рд тромбина на состояние свертывающей и прогивосвертывающей систем организма.
2. Влияние фактора Ха на состояние противосвертывающей системы
3. Влияние трипсина на состояние свертывающей
и прогивосвертывающей систем.
4. Влияние ДЙФ тромбина на состояние противосвертывающей системы
2. Значение предшественников тромбина в возбуждении противосвергыващей системы
1. Конкуренция прегромбина I с тромбином за участки связывания на поверхности тромбоцитов.
2. Активация прогивосвертывающей системы при внутривенном введении крысам прегромбина I
3. Возбуждение протромбином I противосвертывающей системы холоднокровных животных.
4. Возбуждение протромбином I противосвертывающей системы теплокровных животных.
стр.
5. Активация прогивосвертывающей системы протромбином 2.
3. Анализ состояния популяции тучных клеток при возбуждении и блокаде противосвертывавдей системы.
1. Секреция гепарина тучными клетками как показатель состояния противосвертывающей системы
2. Состояние популяции тучных клеток при внутривенном введении животным ДИФтромбина, протромбина I или трипсина.
ГЛАВА 7. ЗНАЧЕНИЕ ЦЕНТРА УЗНАВАНИЯ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СУБСТРАТОВ В ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЯХ
ТРОМБИНА обсуждение результатов.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ОСНОВНОЙ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Затем возможно расщепление связи 0 1 в Сконцевой части тяжелой цепи и образование другой формы фактора Ха мол. Потеря этого пептида не изменяет активности фактора Ха. Отщепляемый пептид содержит оставшиеся углеводы фактора X и 5 остатков пролина , . Отщепление этого пептида может произойти под действием фактора Ха от профермента и привести к появлению фактора X мол. Возможно образование других вариантов фактора Ха с меньшей молекулярной массой, но сохраняющих прокоагулянтнуго активность . X кинетическими и спектрофотометрическими методами с использованием титрангов активного центра, обнаружили аналогию этого процесса механизму активации панкреатических проферментов. Подобно трипсиногену у фактора X, найдена очень низкая каталитическая активность, что позволило предположить, что активация направлена на формирование субстрат связывающего участка, тогда как каталитический аппарат уже предобразован в проферменте. Вместе с тем, в отличие от трипсиногена и трипсина, не обнаружено гидрофобного участка связывания вблизи серина активного центра. Система переноса заряда в активном центре фактора Ха, видимо, аналогична таковой в других сериновых протеиназах. Механизм образования фактора Ха из фактора X во внешней системе образования тромбина не отличается от активации факто
ром Па во внутренней системе. Во внешнем механизме образования тромбина протеиназой является фактор УПа, который осуществляет активацию в комплексе с тканевым фактором тромбопластином в присутствии ионов Са2 рис. Фактор УП одноцепочечный гликопротеид с мол. Аминокислотный состав факторов УП человека и быка гомологичен. Оба фактора являются зависимыми от витамина К белками и содержат в аминоконцевой части 9 остатков гаммакарбоксиглутаминовой кислоты . Значительные трудности получения чистых препаратов фактора УП обусловлены следовым содержанием его в плазме 0,0, мг и быстрой деградацией до двухцепочечной формы в отсутствие ингибиторов протеолиза. Получение препаратов фактора УП, очищенного в раз, позволило определить частично первичную структуру фактора, особенности его активации и действия, определяющего эффективность внешнего пути образования тромбина. Особенностью фактора УП является его способность инактивироваться диизопропилфторфосфатом ДФФ известным ингибитором сериновых протеиназ. Очевидно, в структуре фактора УП уже сформирован активный центр, серии которого блокируется ДФФ. Хотя фермент, активирующий превращение фактора УП в фактор УПа, неидентифицирован, наиболее вероятным представляется участие в реакции фактора Ха, фактора ХПа и тромбина ii . I, причем последнего только в высоких концентрациях. Фактор Ха в присутствии ионов Са, а фактор ХПа без кофакторов увеличивают активность фактора УП в раз . СЮ ВадаЗ а. Кзе е а. Аыиноконцевая часть легкой цепи, локализованной в аминоконцевой части профермента, содержит остатки гаммакарбоксиглутаминовой кислоты и гомологична соответствующему участку других факторов протромбинового комплекса кб а. Эти данные, а также способность ДФФ блокировать активность фермента, указывают, что фактор оУПа типичная сериновая протеиназа. Однако, в отличие от других активных факторов свертывания, фактор оУПа не ингибируется ангигромбином Ш в отсутствие гепарина Вгоге, Мазегиэ , . При длительном действии фактора Ха происходит расщепление еще одной связи в молекуле фактора УП и образование р фактора УПа, который сохраняет эстеразную активность фактора с УПа, но Н имеет протеолИГИЧескОЙ йит, Иетегзоп , . Способность фактора УПа активировать фактор X увеличивается на несколько порядков тканевым фактором ВегЬегв а. Тканевой фактор присутствует в стенке сосудов, но особенно богаты им плацента, легкие, мозг. Тканевой фактор состоит из фосфолипидного компонента и белкового, который по данным Д. А. Зубаирова не обладает протеиназной активностью, а выполняет структурную функцию в образовании липопротеидной матрицы, на которой происходит процесс образования тромбина. Исследование кинетики активации фактора X быка во внешней системе показало, что тканевой фактор уменьшает К ш в раз и увеличивает к кат в раз.