Трофическое влияние симпатической иннервации на кальциевую чувствительность сократительного аппарата подкожной артерии крысы

• Автор: Пуздрова, Виктория Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.13, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Формирование симпатической иннервации сосудов в онтогенезе.

1.1.1.Формирование сплетения постганглионарных симпатических волокон в разных сосудах

1.1.2 Функциональное созревание симпатической иннервации сосудов.

1.2 Трофическое влияние симпатических нервов на гладкомышечные клетки сосудов

1.3 Регуляция актинмиозинового взаимодействия в гладкомышечных клетках

1.4 Возрастные изменения гладкой мышцы сосудов.

1.4.1 Изменение содержания белков сократительного аппарата при дифференцировке гладкомышечных клеток сосудов.

1.4.2 Са чувствительность сократительного аппарата гладких мышц

1.4.3 Возрастные изменения Са2чувствительности сокращения гладкой мышцы.

1.4.4 Возрастные изменения экспрессииактивности белков, регулирующих Са
чувствительность сокращения гладких мышц сосудов.
1.5 Изменение Са2чувствительности сокращения гладкой мышцы после симпатической денервации.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Общие методические подходы.
2.1.1 Объест исследования
2.1.2 Животные.
2.1.3 Визуализация нервных волокон в стенке сосуда
2.1.4 Модель хирургической денервации подкожной артерии.
2.2 Эксперименты на изолированных сосудах.
2.2.1 Исследование вазомоторных реакций с помощью системы i
2.2.1.1 Принцип метода.
2.2.1.2 Нормализация определение оптимального растяжения сосуда
2.2.2 Исследование изменений Са2 при сокращении сосудов крыс разного возраста
2.2.2.1 Подготовка к эксперименту, используемые растворы.
2.2.2.2 Измерение Са
2.2.2.3 Протокол эксперимента
2.2.2.4 Обработка результатов
2.2.3 Исследование изменений Са2 при сокращении иннервированных и денервированных сосудов
2.2.3.1 Подготовка к эксперименту, используемые растворы.
2.2.3.2 Измерение Са
2.2.3.3 Протокол эксперимента
2.2.3.4 Обработка результатов
2.2.3.5 Проверка эффективности денервации
2.2.4 Реактивы, использованные в экспериментах на изолированных сосудах
2.3 Исследование экспрессии белков в гладкомышечных клетках сосудов
2.3.1 Приготовление образцов ткани.
2.3.2 Приготовление экстрактов ткани.
2.3.3 Электрофоретическое разделение белков
2.3.4 Иммуноблоттинг.
2.3.5 Определение концентрации общего белка
2.3.6 Обработка результатов
2.3.7 Материалы и реактивы, использованные в биохимических исследованиях
2.4 Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Морфологическое исследование иннервации подкожной артерии у крыс разного возраста.
3.2 Исследование изменений Са2 при сокращении сосудов крыс разного возраста
3.2.1 Изменения Са2 и натяжения стенки сосуда при добавлении в раствор разных концентраций метоксамина.
3.2.2 Изменения Са2 и натяжения стенки сосуда при добавлении в раствор разных концентраций 9.
3.2.3 Изменения Са 1 и натяжения стенки сосуда при нерецепторной стимуляции .
3.2.4 Количественный анализ кальцийзависимости сокращения гладкой мышцы
сосудов у крыс разного возраста
3.3 Исследование изменений Са2 при сокращении иннервированных и денервированных сосудов взрослых крыс
3.3.1 Свидетельства эффективности денервации подкожной артерии.
3.3.2 Особенности сосудов и методики исследования
3.3.2 Изменения натяжения стенки сосуда и Са при при добавлении в раствор разных концентраций метоксамина
3.3.3 Изменения натяжения стенки сосуда и Са при добавлении в раствор разных концентраций 9.
3.3.4 Количественный анализ кальцийзависимости сокращения гладкой мышцы иннервированных и денервированных сосудов
3.4 Влияние возраста и денервации на экспрессию сократительных и регуляторных белков в гладкомышечных клетках подкожной артерии
3.4.1 Экспрессия гладкомышечного миозина и кальдесмона.
3.4.2 Экспрессия киназы и регуляторной субъединицы фосфатазы легких цепей миозина
3.4.3 Экспрессия митогенактивируемых протеинкиназ и Ююкиназы.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
4.1 Основные результаты работы
4.2 Характеристика иннервации и сократительного аппарата подкожной артерии у крыс разного возраста.
4.3 Са2чувствительность сокращения подкожной артерии у крыс разного возраста
4.4 Экспрессия регуляторных белков в подкожной артерии крыс разного возраста
4.5 Изменения Са2чувствительности сокращения подкожной артерии крысы после
денервации.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Вопервых, было исследовано формирование баланса Са2зависимых и Са2независимых регуляторных механизмов при развитии симпатической иннервации сосудов крыс в постнатальном периоде. Такой подход позволил связать возрастные изменения Са2чувствительности сокращения гладкой мышцы с влиянием именно симпатических нервов, а не факторов иной природы механической или гуморальной. В работе были зарегистрированы изменения силы сокращения и Са х для сосудов с различной степенью симпатической иннервации. Эти данные были сопоставлены с изменением экспрессии ключевых белковрегуляторов взаимодействия актина и миозина в гладкомышечных клетках. В результате исследования были выявлены потенциальные мишени трофического воздействия симпатической иннервации и описан вероятный механизм становления функциональной активности, характерной для зрелых сосудов. В качестве объекта исследования была выбрана подкожная артерия крысы . Это артерия мышечного типа, у взрослых крыс она густо иннервирована симпатическими волокнами , Тарасова и др. Целью настоящей работы являлось исследовать формирование механизмов, регулирующих чувствительность сократительного аппарата гладкомышечных клеток сосудов к Са2, у крыс в период созревания симпатической иннервации и их изменение при экспериментальной денервации сосудов во взрослом возрасте. Научная новизна работы. Са2зависимых и Са2независимых регуляторных механизмов. Впервые показано, что становление симпатической иннервации сопровождается уменьшением роли Са2сенситизации в сокращении периферических резистивных сосудов большого круга кровообращения. Впервые показано, что нарушение симпатической иннервации приводит к обратным изменениям, то есть к увеличению роли Са2сенситизации в сокращении сосудов. Впервые в этих двух экспериментальных моделях сопоставлены изменения экспрессии белков, регулирующих зависимость силы сокращения от Сав Важно, что весь комплекс физиологических и биохимических исследований выполнен на одном объекте, в отличие от предыдущих работ, где затрагивались только функциональные или только биохимические аспекты этой проблемы. Практическая значимость работы. Значимость работы для фундаментальной и практической медицины обусловлена необходимостью разработки новых способов коррекции тонуса сосудов, лишенных симпатической иннервации при регуляторных расстройствах у новорожденных детей, а также при нарушении иннервации во взрослом возрасте в результате травм, аутотрансплантации или трансплантации тканей, диабетической нейропатии и др Результаты работы дают основание полагать, что развитие патологий сердечнососудистой системы, сопряженных с нарушением симпатической иннервации, может быть связано с уменьшением роли Са2зависимых и возрастанием роли Са2независимых механизмов регуляции сокращения гладких мышц сосудов. Следовательно, для лечения таких патологий следует использовать не традиционно применяемые блокаторы Са2каналов, а препараты, действие которых направлено на снижение активности Са2независимых механизмов регуляции сокращения. Основное положение, выносимое на защиту. Трофическое влияние симпатических нервов на сосуды приводит к изменению экспрессии белков, обеспечивающих тоническое Са2независимое сокращение гладкой мышцы, что обеспечивает возможность динамической регуляции тонуса сосудов симпатическими вазомоторными влияниями. Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы были представлены на международных симпозиумах ii ii Пущино, , , на конференции Центральные и периферические механизмы вегетативной нервной системы Донецк, , на III и V Всероссийских конференциях с международным участием Механизмы функционирования висцеральных систем СанктПетербург, , на III Всероссийской школеконференции по физиологии кровообращения Москва, , на IX Международной конференции Центральные и периферические механизмы вегетативной нервной системы ДонецкСлавянск, , на XX Съезде физиологического общества И. П. Павлова Москва, . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 2 статьи и 8 тезисов.