Изучение физиологической роли особого эстроген-связывающего белка печени крыс

• Автор: Мирошниченко, Маргарита Леонтьевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение.

Глава I. Эстрогенные рецепторы клеток органов половой

сферы и печени обзор литературы.

1. Роль рецепторов в механизме действия эстрогенов.

2. Основные свойства эстрогенных рецепторов и краткие сведения о механизмах стероидрецепторного взаимодействия.

3. Современная модель действия стероидных гормонов.

4. Мультирецепторная гипотеза действия стероидных гормонов.

5. Современные представления о механизмах реализации эффектов ГРК.

6. Эстрогенсвязыващие белки печени.

7. Гетерогенная система эстрогенсвязывающих белков печени и ее особенности

Глава П. Материалы и методы. .
А. Материалы, буферные растворы и реактивы
1. Экспериментальные группы животных.
2. Введение гормонов.
3. Буферные растворы, реактивы и препараты
Б. Методы
1. Получение цитозоля печени крыс
2. Получение частично очищенного препарата
3
3. Получение ядер печени.
4. Изучение гормонсвязывающих свойств ОЭСБ
а общие принципы метода.
б определение ж ОЭСБ в экспериментах
в определение концентрации Е2связывающих мест ОЭСБ по связыванию минимальной добавки гормона
г изучение стереоспецифичности ОЭСБ.
5. Исследование транслокации гормонрецепторных комплексов в ядра иг iv
6. Определение белка и ДНК
7. Статистическая обработка результатов.
Глава Ш. Стереоспецифичность сродства ОЭСБ к гормональным стероидам и его возможная физиологическая
1. Количественная характеристика взаимодействия ОЭСБ с рядом стероидных и нестероидных соединений
2. Структурный анализ взаимодействия исследуемых лигандов с ОЭСБ
3. Модель структуры связывающего центра ОЭСБ
4. Возможная физиологическая роль связывания гормональных лигандов с ОЭСБ
Глава 1У. Влияние ОЭСБ на аккумуляцию эстрогенрецептор
ных комплексов в ядрах гепатоцитов.
Глава У. ОЭСБ как объект программирующего и регулирующего действия эстрогенов и андрогенов.
Стр.
1. Роль андрогенов в детерминации ОЭСБ
2. Андрогены как регуляторы содержания ОЭСБ.
3. Эстрогены как регуляторы содержания ОЭСБ.
4. Взаимодействие регулирующих эффектов эстрогенов
и андрогенов на уровень ОЭСБ.
Заключение.
Выводы.
Литература


В последнее время накоплено значительное количество разнообразных экспериментальных данных, позволивших создать единое представление о механизмах действия стероидных гормонов. В его основе лежит твердо установленный факт существования в клетках специальных рецепторных структур, опосредующих действие гормонов. Гормон рецепторное взаимодействие, как считается, ключевой этап в механизме действия гормонов В. Б.Розен,А. Н.Смирнов,. Было показано, что специфический захват и аккумуляция эстрогенов происходят с помощью крупномолекулярных белковых компонентов цитоплазмы, способных обратимо, но с высоким сродством, избирательностью и ограниченной насыщаемостью связывать эти гормоны. Образование гормонрецепторных комплексов ГРК первичное событие после попадания гормона в компетентную клетку, непосредственно не зависящее от . ДНК, РНК, белка, интенсивности дыхания и окислительного фосфорилирования В. ЪоииЖъш . По современным представлениям рецепторная молекула является двухвалентной в структурнофункциональном отношении ее гормонсвязывающий локус осуществляет дискриминированный прием гормонального сигнала и его аккумуляцию, эффекторный участок определяет взаимодействие гормона с акцепторными структурами клетки, инициируя специфические гормональные эффекты. В.Б. Розен, . Рецепторы эстрогенов, как и других стероидных гормонов, локализованы внутри клетки, а не на ее поверхности, что характерно для многих гормональных и прочих сигнальных веществ. I. Роль рецепторов в механизме действия эстрогенов. Б настоящее время не вызывает сомнений то, что гормонрецепторное взаимодействие представляет собой решающее звено в механизме, обеспечивающем адекватный ответ компетентных клеток на действие гормона В. Б.Розен, А. Н.Смирнов, . В.Б. ОЕНСьНЕеЦ , , сЬ СьЕ . Последующие опыты показали, что, кроме действия на органы женской половой сферы, эстрогены обладают спектром эффектов и на другие органы животного организма. Эти гормоны стимулируют синтез ряда белков печени В. Б.Розен, . Мен. Хь , Дч г , легких Ввп ИосъъС , , мозга Скгкь , Риыг , и т. А.Н. Смирнов с соавт. А.Н. Смирнов, 0. В.Смирнова, . ЫН, . Эти и другие данные свидетельствуют о том, что концентрация рецепторов максимальна в гормонзависимых поликомпетентных тканях тех, дифференцировка, рост и метаболизм которых полностью обусловлен соответствующим гормоном, т. Одним из доказательств непосредственного участия рецепторов в реализации гормонального эффекта является корреляция между интенсивностью гормонрецепторного взаимодействия и характером тканевого ответа. Усиппе оЛ , ВоиЬоп еВ х ,. Параллелизм наблюдается также в уровне акцептированных ядрами клеток яйцеводов ГРК и способностью этих клеток к синтезу овальбуминовой . РНК, а также весом этих органов при стимуляции цыплят эстрадиолом 7ау1оъ , i. РнВтСВег, . Аналогичные данные были получены другими учеными Киок, еА а Подтверждением обсуждаемой теории, полученным для других стероидных гормонов является и недавно доказанное существование специфических акцепторных мест ДНК для ГРК. Эксперименты были проведены на глгококортикоидзависимом вирусе ММТУ в линиях опухолей молочной железы мышей и гена овальбумина яйцеводов кур с помощью очищенных рецепторов соответствующих гормонов глюкокортикоидов и прогестерона и методов генной инженерии. Полученные данные выявили в генома ограниченное число акцепторных локусов, избирательно взаимодействующих с ГРК. СопрЬою, е,1 а Дополняет приведенный ряд фактов и возможность воспроизведения биологических эффектов гормонов в бесклеточных системах, полученная при использовании высокоочищенных препаратов рецепторов. Большим достижением в этом отношении является эксперимент с рецепторами прогестерона яйцеводов птиц. Показано, что при добавлении 6 3 формы и субъединицы А этих рецепторов к хроматину происходит значительное в 1,5 раза увеличение количества мест инициации для РНКполимеразы 9 . Основные свойства эстрогенных рецепторов и краткие сведения о механизмах стероидрецепторного взаимодействия.