Влияние биологически активных веществ на созревание и оплодотворение in vitro ооцитов крупного рогатого скота

• Автор: Ахмолдаева, Анар Муханбетжановна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: п. Дубровицы, Московской обл.
• Количество страниц: 103 с.

Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Строение и рост фолликулов.

2.2. Ядерноцитоплазматическое созревание ооцитов.

2.3. Способность к созреванию и оплодотворению вне

организма ооцитов крупного рогатого скота.

2.4. Методы извлечения ооцитов из яичников и отбор

ооцитов для культивирования и оплодотворения i vi.

2.5. Среды и сыворотки, используемые для созревания

ооцитов коров.

2.6. Подготовка ооцитов для оплодотворения i vi.

2.7. Культуры клеток, используемые для культивирования
эмбрионов крупного рогатого скота.
2.8. Культивирование и сокультивирование оплодотворенных
ооцитов i vi на монослоях различных соматических клеток.
3. Собственные исследования.
3.1 Материал и методика исследований.
3.2. Влияние сезона года на созревание и оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота при культивировании вне
организма.
3.3. Созревание ооцитов в различных средах в присутствии
сыворотки и гонадотропных гормонов.
3.4. Культивирование ооцитов в различных культуральных
средах.
3.5. Влияние дозы гепарина и времени капацитации
спермисв на их оплодотворяющую способность.
3.6. Культивирование и сокультивирование предымплантационных эмбрионов на монослоях
соматических клеток.
4. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность


Английские ученые проводили опыты по производству эмбрионов коров i vi в большом количестве, и пришли к выводу, что применение этой технологии возможно в производстве, и в ближайшем будущем будет иметь огромное значение в развитии скотоводства . Нель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось совершенствование метода культивирования и оплодотворения вне организма ооцитов крупного рогатого скот. Исследования влияния эффекта биологически активного вещества на созревание и оплодотворение ооцитов i vi подразумевает следующие этапы 1 выявление оптимальной концентрации, в которой биологически активное вещество оказывает какойлибо эффект на мейоз ооцитов коров 2 определение характера влияния биологически активных веществ на оплодотворение, дробление и выход качественных эмбрионов на пролонгированных стадиях развития морула, бластоциста. Определить влияние сезона года на созревание и оплодотворение ооциов крупного рогатого скот при культивировании вне организма. Определить влияние астральной сыворотки и гонадотропных гормонов на созревание и оплодотворение ооцитов i vi. А также выявить минимальную концентрацию эстралыюй сыворотки и гонадотропных гормонов, влияющих положительно на созревание ооцитов. Выяснить роль гепарина и различных сред для капацитации и времени их соинкубирования с ооцитами на оплодотворяющую способность спермиев и их выживаемость в культуральных средах. Изучить влияние фолликулов и их стенок, соматических клеток на развитие зародышей после экстракорпорального оплодотворения ооцитов i vi. Научная новизна. Научная новизна исследований состоит в эффективности использования биологически активных веществ для созревания и оплодотворения ооцитов i vi. Продемонстрирована возможность преодоления блока клеточного деления на стадии 8 бластомеров путем использования монослоя гранулезных клеток. Впервые была установлена оптимальная доза мкгмл гепарина язя капацитапии спермы быков, при котором процент дробления составил ,5. Практическая значимость работы. На основании результатов проведенных исследований разработаны оптимальные культуральные среды, с добавлением астральной сыворотки и гонадотронных гормонов, при котором созрело ооцитов , а оплодотворилось . Преяюжсно, минимизировать концентрацию астральной сыворотки до 5 с добавлением мклмл ФСГ, что позволит получить до ,7 созревших ооцитов и ,1 оплодотворенных ооцитов i vi. Показана одинаковая эффективность созревания, оплодотворения и развития ооцитов крупног о рогатого скота в культуральных средах ТСМ9, МРМ, МММ. Преяюжсно сокультипирование на монослос гранулезных клеток для успешного преодоления 8 клеточного эмбрионального блока. Схема основных процессов, протекающих при созревании и оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота. Яичник взрослого животною, как орган, состоит из трех отдельных фундаментальных единиц или компонентов стромы и интерстициальной ткани, фолликулов и жел того тела. Отдельные клетки зачаткового эпителия яичника, опускаясь в складках инвагинация в нижележащую ткань, дают начало клеточным скоплениям, из которых затем образуется первичный фолликул, представляющий собой ооцит, окруженный одним слоем фолликулярных клеток и находящийся в стадии покоя. Вторичный фолликул характеризуется образованием нескольких слоев фолликулярных клеток, ростом ооцита и формированием вокруг него прозрачной оболочки. Третичный фолликул характеризуется образованием фолликулярной жидкости, дифференцировкой слоя гранулезы, теки интерна и теки экстерна. У коров по мерс роста и приближения фолликула к овуляции количество рядов гранулезы уменьшается до 6. Гека интерна с момента образования фолликулярной полости превращается в гормонально активную железу. Сначала клетки внутренней теки превращается в эпителоидные, а затем в лютеиновые. Тека экстерна состоит из сосдинительнотканных коллагеновых волокон, богата кровеносными и лимфатическими сосудами. После овуляции тека экстерна превращается в капсулу желтого тела и образует сосудистую систему . Зрелый фолликул граафов пузырек состоит из нескольких слоев клеток, окружающих ооцит, который находился внутри заполненной жидкостью полости.