Экспрессия тирозингидроксилазы в вазопрессинергических нейронах супраоптического ядра у крыс : Регуляция и функциональное значение

• Автор: Абрамова, Марина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ .

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Супраоптическоб ядро 1 о

1.2. ФУНКЦИИ ВПНЕЙРОНОВ

1.2.1. Синтез, транспорт и выделение ВП.

1.2.1.1. Структура

1.2.1.2. Биосинтез вазопрсссина.

1.2.1.3. Выделение вазопрсссина.

1.2.2. Синтез других пептидов.

1.2.3. Экспрессия шрозннгидрэксилазы
1.2.3.1. Структура
1.2.3.2. Регуляция экспрессии ТГ
1.2.3.3. Эктопическая экспрессия ТГ.
1.3. Структурные компоненты задней доли гипофиза и их функциональное ЗНАЧЕНИЕ.
1.3.1. Аксоны.
4 I
1.3.2. Питуишпы.v.v.v. .
1.3.3. Капилляры
1.4. НПЙРОГУМОРАЛЬНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ВАЗОПРЕССИНЕРГИЧЕСКИХ НЕЙРОНОВ.
1.4.1. Гуморальная регуляция
1.4.2. Нервная регуляция
1.4.2.2. Регуляция на уровне задней доли гипофиза.
1.5. Развитие крупноклеточной вазопресо1нергичгскойсистрмы
1.5.1. Рождение нейронов и формирование супраоптичсского ядра.
1.5.2. Морфология нейронов
1.5.3. Экспрессия спегшфичсских синтезов.
1.5.4. Развитие эфферентных проекций
1.5.5.Функции вазопресснна в период онтогенеза
1.5.5.1. Нейромеднагорная.
1.5.5.2. Анпгдиуретическая функция
1.5.6. Нейрогуморальная регуляция развития ВПергнческой системы.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
2.1. ЖИВОТНЫЕ.
2.2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ.
2.2.1. Хроническая осмотическая стимуляция
2.2.2. Фармакологическое ингибирование либо активация адрснорсцспторов
2.3. Обработка ткани
2.3.1. Перфузия, фиксация
2.3.2. Посгфиксацня и замораживание ткани.
2.3.3. Приготовление срезов.
2.4. Иммуноцигохимия
2.4.1. Мономеченне с использованием нммуноперокендазной реакции.
2.4.2. Двойное иммунофлуоресцентиое мечение.
2.5. Гибридизация i i.
2.5.2. Прегибрндпзация и гибридизация мРНК вазопрессина.
2.5.3. Гибридизация мРНК гкрознигидроксилазы
2.6. Микроскопия и анализ изображений.
2.6.1. Световая микроскопия.
2.6.1.1. Полуколичественный анализ.
2.6.1.2. Анализ зеркальных срезов гипофиза.
2.6.2. Люминесцентная микроскопия.
2.6.3. Конфокальная микроскопия.
2.7. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. КОЛОКАЛИЗАЦИИ ВАЗО 1РЕССИНА И ТМ РОЗИН ГИДРОКСИЛ АЗЫ В АКСОНАХ В ЗАДНЕЙ ДОЛЕ ГИПОФИЗА
3.1.1. Мономсчсние. зеркальные срезы
3.1.2. Двойное мсчснис
3.2. ВАЗОПРЕССИНЕРГИЧЕСКИЕ НЕЙРОНЫ СУПРАОПТ ИЧЕСКОГО ЯДРА ВЗРОСЛЫХ КРЫС В УСЛОВИЯХ ДЛИТЕЛЬНОЙ ДОТРЕХ НЕДЕЛЬ ОСМОТИЧЕСКОЙ СТИМУЛЯЦИИ.
3.2.1. Тела нейронов в супраоптаческом ядре.
3.2.2. Аксоны нейронов в задней доле гипофиза.
3.3. ВАЗОПРЕССИНЕРГИЧЕСКИЕ НЕЙРОНЫ СУПРАОПТИЧЕСКОГО ЯДРА В ОНТОГЕНЕЗЕ.
3.3.1 Солевая нагрузка плодов на й день эмбрионального разви та и крысят на 3й
и й постна гальные дни.
3.3.1.1 Контроль.
3.3.1.2. Осмотическая стимуляция.
3.3.2 Фармакологическое ингибирование оПадренорсцепгоров на фоне осмотической стимуляции
3.3.2.1. Контроль
3.3.2.2. Ингибирование Iадрснорецспгоров.
ГЛАВА IV ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. КОЛОКАЛИЗАЦИЯ ВАЗОПРЕССИНА И ТИРОЗИНГИДРОКСИЛАЗЫ В
ВАЗОПРЕССИНЕРГИЧЕСКИХ АКСОНАХ ЗАДНЕЙ ДОЛИ ГИПОФИЗА
4.2 Динамика экспрессии ВП иТГ в крупноклеточных нейронах СОЯ в условиях длительной осмотической стимуляции
4 .2.1. Методические замечания
4.2.2. Реакция ВПергических нейронов на длительную осмотическую стимуляцию
4.2.3. Морфологические особенности ВПергических нейронов в условиях осмотической стимуляции.
4.3 Функциональное значение тирозингидроксилазы в вазопрессинергических
нейронах.
4 4. РЕАКЦИЯ ВАЗОПРЕССИНЕРГИЧЕСКИХ НЕЙРОНОВ НА ОСМОТИЧЕСКУЮ СТИМУЛЯЦИЮ В ОНТОГЕНЕЗЕ
4.4.1. Отвег вазопрессинергических нейронов супраоптического ядра на осмотическую стимуляцию 1 И
4.4.2. Роль норадрснсргичсской иннервации в регуляции экспрессии вазопрессина и гирозпн гидроксилазы.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Установить время начала синтеза ТГ в ВПсргичсских нейронах СОЯ в онтогенезе и роль а1 алренорсцспгоров в регуляции данной экспрессии. Научная новизна н практическая значимость работы. ВПергические аксоны, содержащие ТГ. ТГ со стороны норадреналнна формируется в постнатальном периоде и осуществляется через а1адрснорсцспторы. Совокупность результатов работы позволила сформулировать научную гипотезу об участии ЛДОФЛ продукта ферментативной активности ГГ в регуляции выделения ВП. Полученные данные открывают возможности для понимания механизмов адаптации ВПергической системы в условиях сс хронической активации, что может иметь практическое значение в клинике при лечении несахарного диабета, а также при исследовании приспособленности организма к условиям длительною стресса, например, при гипо и пнтергравитацнн в космосе. Работа выполнена по плану научных исследований лаборатории гормональных регуляций Института биологии развития им. Кольцова РАН и лаборатории нейробиологии и клеточных взаимодействий Института нейронаук Университета П. И М. Кюри в рамках программы проектов I, I, РФФИ и Министерства Иностранных дел Франции. Публикация результатов исследовании и апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на колловкиумах лаборатории гормональных регуляций МБР им. Н К. Кольцова на международных и российских симпозиумах и конференциях XVII съезд физиологов России в РостовенаДону в сентябрь , XV международный конгресс но нейронаукам II3 в Иерусалиме в июле , Всероссийская конференция Нейрозндохринология в СанктПетербурге в апреле . Но материалам диссертации опубликовано 4 научных статьи, одна находится в печати. ГЛАВА 1. Гипоталамогнпофизариая система изучается еще с начала века. Именно с нес начались исследования, пролившие свет на функциональную организацию легггндергяческой нейрональной системы, механизмы синтеза и секреции пептидных гормонов. С развитием знаний и методов исследования биологических объектов появилась возможность на примере этой модели выявить ряд закономерностей, связанных с взаимодействием систем гормонов и классических нейротрансмитлсров катехоламинов. Крункоклсточнзя вазог. Аксоны нейронов через внутреннюю зону срединного возвышения попадают в заднюю долю гипофиза, где ВI выделяется в общую циркуляцию рис. Чась аксонов из паравентрнкулярного ядра оканчивается вблизи капилляров портальной системы в наружной зоне срединною возвышения. На периферии В связывается с рецепторами на органахмншенях см. I. посредством чего выполняет свои основные функции аггидиурсгичссхую и вазоконстрикторную. Таблица 1. Сосуды п эдком 1. Супраоггтическое ядро СОЯ парное, латерально примыкающее к хиазме. Было показано, что приблизительно общего объема ядра приходится на нейрональные элементы, 8 составляют глиальные клетки. СОЯ содержит две популяции нейронов ВПергическне их доля составляет приблизительно от общего числа клеток СОЯ и окситоцннергичсскнс. I i ичсскис нейроны их в СОЯ около . Ноу . I., . ВПнсйроны СОЯ это крупные клетки овальной формы диаметром от до мкм с асимметрично расположенным ядром . Отростки нейронов подразделяют на две различные категории дендриты и аксоны, кроме того есть группа толстых отростков, которые не были идентифицированы как аксоны или дендриты i . Обычно нейрон имеет один немиелиннзнрованный аксон и от трех до пяти дендритов. Наблюдаются также нейроны, имеющие один аксон и один толстый отросток, а также нейроны с одним аксоном, одним дендритом и одним толстым отростком. Длина дендритов колеблется от до 0 мкм ориентированы они, в основном, в нентродорсальном направлении, перпендикулярно оптическим трактам. Дендриты имеют разветвления первого и, реже, второго порядка и могут образовывать крупные расширения, локализованные в вентральной части ядра. Аксоны начинаются от денлрнгов первоговторого порядка либо от тел нейронов Ii , , . Принято считать, что все аксоны нейронов СОЯ участвуют в формировании супраопгикопостгипофизарнот тракта. Толстые отростки имеют длину от 0 до 0 мкм н формируют крупные расширения диаметром.