Нейроны медиобазального гипоталамуса крысы, экспрессирующие ферменты синтеза дофамина : Дифференцировка и функциональное значение

• Автор: Ершов, Петр Витальевич
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 с. : ил

Содержание

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Структурная и функциональная характеристика нейронов аркуатного ядра, экспрессирующих ферменты синтеза дофамина.

1.1 Л. Нейроны аркуатного ядра, экспрессирующие ферменты синтеза дофамина, у

взрослых животных

1Л Л. 1. Топография и морфология нейронов.

1.1.1.2. Функциональные характеристики неГронов

1.1.1.3. Нейрогуморальная регуляция нейронов

1.1.1.4. Функциональное значение нейронов.

1.1.2. Дифференцировка нейронов аркуатного ядра, экспрессирующих ферменты синтеза дофамина, в онтогенезе.
1.1.2.1. Образование нейронов.
1.1.2.2. Морфологические характеристики развивающихся нейронов
1.1.2.3. Функциональные характеристики развивающихся нейронов.
1.1.2.4. Регуляция нейронов.
1.1.2.5. Функциональное значение нейронов. Становление регуляции иролактина
1.2. Проекции катехоламинергических волокон в срединное возвышение
1.2.1. Взрослые животные.
1.2.2. Формирование в онтогенезе.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Животные
2.2. Экспериментальные модели
2.2.1. Стереотаксическое введение 6гидроксидопамина
2.2.2. Беременные самки.
2.3. Фиксация, приготовление срезов.
2.4. Двойное иммуноцитохимическое мечение и его модификации.
2.5. Люминесцентная и конфокальная микроскопии, компьютерный анализ изображения
2.6. Количественный анализ результатов иммуноцитохимического исследования.
2.7. Гибридизация i i.
2.8. Высокоэффективная жидкостная хроматография с электрохимической детекцией
2.9. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Нейроны аркуатного ядра, экспрессирующие ферменты синтеза дофамина, в онтогенезе
3.1.1. й эмбриональный день.
3.1.1.1. Аркуатнос ядро
3.1.1.2. Срединное возвышение
3.1.2. 9й постнатальный день.
3.1.2.1. Аркуатнос ядро
3.1.2.2. Срединное возвышение
3.1.3. Взрослые.
3.1.3.1. Аркуатнос ядро
3.1.3.2. Срединное возвышение
3.2. Реакции нейронов на экспериментальные воздействия
3.2.1. 6гидроксидофамин качественные характеристики нейронов, экспрессирующих ферменты синтеза дофамина, и их количественное соотношение
3.2.1.1. Иммуноцитохимическое выявление ферментов синтеза дофамина.
3.2.1.2. Высокоэффективная жидкостная хромаюграфияс электрохимической
детекцией.
3.2.2. Беременные самки качественные характеристики нейронов, экспрессирующих ферменты синтеза дофамина, и их количественное соотношение
3.2.2.1. Иммуноци гохимичсское выявление ферментов синтеза дофамина.
3.2.2.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография с электрохимической дегекцией.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Количественное соотношение популяций нейронов аркуатного ядра, экспрессирующих ферменты синтеза дофамина, в онтогенезе
4.2. Анализ пространственных взаимоотношений между нейронами, экспрессирующими тирозингидроксилазу иили декарбоксилазу ароматических Ьаминокислот, и их проекции в срединное возвышение.
4.3. Экспрессия транспортного белка дофамина в нейронах аркуатного ядра в онтогенезе .
4.4. Реакция нейронов, экспрессирующих ферменты синтеза дофамина, в условиях локального дефицита дофамина или транзиторного отсутствия регуляции по принципу обратной связи.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений
ВЭЖХЭД Высокоэффективная жидкостная хроматография с эл ектрохим и ческой детекцией ГАМ К Гаммааминомасляная кислота
ДАА Декарбоксилаза ароматических Гаминокислот
ДБГ ДофаминВ идроксилаза
ГДОФА Ьдигидроксифени л аланин
ДОФУК 3,4Дигидроксифенилуксусая кислота
П остнатьньй день
ТБДА Транспортный белок дофамина
ТГ Т ирозингидроксилаза
Э Эмбриональный день
Иммунопозитивный
Иммунонегативный
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Если наша гипотеза о кооперативном синтезе верна, анализ пространственных взаимоотношений моноферментых нейронов позволит приблизиться к пониманию механизма переноса ЬДОФА из моноферментных нейронов, содержащих ТГ, в нейроны, содержащие ДАА. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение дифференцировки нейронов аркуатного ядра, экспрессирующих ТГ иили ДАА, в онтогенезе и выяснение возможного функционального значения синтеза дофамина моноферментными популяциями нейронов. Научная новизна. Впервые произведена количественная оценка популяций нейронов, экспрессирующих ТГ иили ДАА, в аркуатном ядре у крыс в онтогенезе. Нейроны, содержащие ТГ иили ДЛЛ, в процессе развития характеризуются половым диморфизмом, который проявляется в общей численности этих нейронов и их процентном соотношении. Продемонстрировано наличие тесных топографических взаимоотношений между телами и отростками нейронов, содержащих единичные, но комплиментарные ферменты синтеза дофамина, и особенности этих топографических взаимотношений на разных этапах онтогенеза. Впервые показано наличие моноферментных ТГ или ДААсодержащих волокон в срединном возвышении на всех изученных этапах онтогенеза. При этом в распределении МЮ и биферментных волокон в срединном возвышении выявлена зональность. Причем моноферментные аксоны обоих типов на всех изученных этапах онтогенеза характеризуются сходной локализацией и находятся в тесных топографических отношениях. Продемонстрировано, что в условиях функциональной недостаточности дофаминергических нейронов и, следовательно, при локальном дефиците дофамина происходит увеличение численности моноферментных ТГ и ДААсодержащих нейронов. Подобные изменения были отмечены как при экспериментально вызванной гибели дофаминергических нейронов, так и в условиях хронической стимуляции синтеза дофамина. При этом предполагается, что продукция дофамина моноферментными нейронами в кооперации у взрослых животных носит компенсаторный характер. Научная и практическая значимость работы. Полученные данные способствуют углублению существующих представлений о развитии гипоталамогипофизарного звена нейроэндокринной регуляции репродуктивной функции. В работе приведено обоснование возможности кооперативного синтеза дофамина моноферментными популяциями нейронов, содержащими одиночные комплиментарные ферменты его синтеза, на всех этапах онтогенеза. Полученные в работе свидетельства возможности кооперативного синтеза дофамина позволяют расширить представления о механизме химической интеграции центральной нервной системы. Так, согласно принципу Дейла i . Согласно нашей гипотезе о кооперативном синтезе один нейротрансмиттер может синтезироваться несколькими нейронами. Результаты выполненной работы позволяют поновому оценить патогенез ряда нейроэндокринопатий и неврологических заболеваний, в основе которых лежит дегенерация дофаминергических нейронов, например, синдрома гиперпролактинемии и болезни Паркинсона. Работа выполнена по плану научноисследовательских работ лаборатории нейрогистологии им. Б.И. Лаврентьева Института нормальной физиологии им. П.К. Анохина РАМН и в рамках программы проектов Российского фонда фундаментальных исследований грант 1, 1 грант I 4, Российского фонда фундаментальных исследований Научные школы грант 0, грант , I грант 8, Министерства высшего образования и науки Франции . Публикация результатов исследования и апробация работы. Материалы диссертации доложены на Международном симпозиуме i v i Новосибирск, V Всероссийской конференции Нейроэндокринология СанктПетербург, VIII Всероссийской конференции Физиология нейротрансмиттеров, посвященной 0летию со дня рождения
академика Армянской ССР, членакорреспондента Академии наук СССР Х. С. Коштоянца Москва, i I i Иерусалим, Израиль, i i Майями, США, . По материалам диссертации опубликовано 5 статей, 3 находятся в печати. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 0 страницах машинописного текста и включает в себя графиков, схем, микрофотографию, 3 таблицы. Работа состоит из следующих разделов введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты, обсуждение, заключение, выводы и список литературы, включающий 5 источников.