Пентилентетразоловый киндлинг у крыс: влияние на обучение, нейродегенерация и механизмы гибели нейронов в гиппокампе

• Автор: Павлова, Татьяна Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Эпилепсия

1.2 Склероз гиппокампа.

1.3 Моделирование судорожной активности и эпилепсии на животных

1.4 Феномен киндлинга

1.5 Пентилентетразоловый киндлинг

1.6 Структурнофункциональные перестройки в гиппокампе при

моделировании эпилепсии на грызунах.

1.7 Гипотеза эксайтотоксического повреждения при судорожной

активности
1.8 Окислительный стресс при судорожной активности.
1.9 Пути гибели клетки в норме и патологии.
1. Пути гибели нейронов при судорожной активности
1. Обоснование комплексного исследования модели пентилентетразолового киндлинга.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Работа с животными
2.2 Моделирование пентилентетразолового киндлинга на крысах
2.3 Исследование способности крыс к обучению.
2.3.1 Условная реакция пассивного избегания
2.3.2 Условная реакция активного избегания.
2.4 Биохимические методы исследования
2.4.1 Приготовление гомогенатов ткани мозга
2.4.2 Определение содержания продуктов реагирующих с тиобарбитуровой
КИСЛ0ЮЙ
2.4.3 Определение содержания БНгрупи
2.4.4 Определение содержания белка.
2.5 Морфологические и иммуногистохимические методы исследования
2.5.1 Подготовка ткани мозга к патоморфологическому исследованию.
2.5.2 Подсчет нейронов в отделах гиппокампа
2.5.3 Выявление фрагментированной ДНК в нейронах гиппокампа
2.5.4 Исследование экспрессии циклинов в нейронах гиппокампа.
2.6 Электроэнцефалографическое исследование
2.6.1 Подготовка животных к исследованию.
2.6.2 Регистрация электроэнцефалограммы
2.7 Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Исследование способности к обучению у животных после пентилентетразолового киндлинга
3.1.1 Развитие пентилентетразолового киндлинга.
3.1.2 Влияние пентилентетразолового киндлинга на условную реакцию
активного и пассивного избегания у крыс
3.2 Нейропатологические изменения в результате
пентилентетразолового киндлинга и их возможные механизмы.
3.2.1 Нейродегенерация в гиппокампе животных в результате
пентилентетразолового киндлинга
3.2.2 Участие окислительного стресса в гибели нейронов.
3.2.3 Принимает ли участие апоптоз в нейродегенеративных изменениях в
результате пентилентетразолового киндлинга
3.2.4 Активация клеточного цикла при гибели нейронов в результате
пентилентетразолового киндлинга
3.3 Взаимосвязь между конвульсивной активностью, судорожной активностью в мозге, а также нейродегенерацией в гиппокампе крыс после пентилентетразолового киндлинга
3.3.1 Нейродегенерация и окислительный стресс в гиппокампе чувствительных и
толерантных к пентилентетразоловому киндлингу животных.
3.3.2 Исследование электроэнцефалограммы чувствительных и толерантных к пентилентетразоловому киндлингу животных
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


В некоторых случаях, например, при использовании повторяющегося электрошока, такая связь была обнаружена Зарубенко и соавт. В то же время при введении каината такой связи выявлено не было , , несмотря на наличие корреляции между силой судорог и рядом показателей окислительного стресса и апоптоза в гиппокампе iv . , . Основной целью работы было комплексное исследование влияния пентилентетразолового киндлинга на процессы обучения и памяти, развитие нейродегенерации, а также исследование механизмов гибели нейронов в гиппокампе. Кроме того, целыо работы было выявление соотношения вызванной пентилентетразолом конвульсивной активности с одной стороны и процессами возбуждения в гиппокампе и гибелью нейронов с другой стороны. Изучить влияние пентилентетразолового киндлинга на способность к обучению условным реакциям пассивного и активного избегания у крыс. Провести патоморфологическое исследование гиппокампа при пентилентетразоловом киндлинге. Исследовать возможное участие окислительного стресса в гибели нейронов. Исследовать возможное участие апоптоза в гибели нейронов. Исследовать возможное участие аберрантного клеточного цикла в гибели нейронов. Изучить соотношение между выраженностью конвульсий после пентилентетразолового киндлинга и эпилептической активностью мозга. В работе впервые проведено комплексное исследование влияния па процессы обучения и памяти, развитие нейродегенерации, а также механизмов гибели нейронов в гиппокампе. Кроме того, впервые исследовано соотношение между степенью выраженности конвульсивной активности при РТ2К и паттернами электроэнцсфолограммы в гиппокампе, а также гибелью нейронов. Впервые выявлено, что РТ2К сопровождается накоплением продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, и снижением уровня восстановленных тиолов в гиппокампе крыс. Впервые продемонстрировано участие аберрантного клеточного цикла как возможного механизма гибели нейронов в гиппокампе крыс после РТ2К. Кроме того, показано отсутствие апоптотических ядер в гиппокампе крыс после РТ2К. Впервые было проведено сравнительное исследование крыс Вистар, разделенных на чувствительных и толерантных к конвульсиям, вызванным РТ2К, и установлено, что гибель нейронов и окислительный стресс в гппокампе этих животных не зависят от выраженности конвульсий нейродегенерацию и окислительный стресс наблюдали и у толерантных животных. Впервые продемонстрирована судорожная активность на ЭЭГ у толерантных к конвульсиям крыс. На основе исследований механизма развития РТ2К. В работе систематически исследованы патологические процессы в гиппокампе при экспериментальном моделировании на крысах эпилепсии височной доли. Выявлены ключевые молекулярные механизмы, сопровождающие нейродегенерацию в данной модели эпилепсии. Морфологически показаны зоны гиппокампа, наиболее чувствительные к повреждению при данной модели эпилепсии. Показано, что нейродегенеративные изменения в гиппокампе сопровождаются окислительным стрессом, при этом гибель нейронов не является апоптотической. Более того, нейродегенерация тесно связана с экспрессией циклина В1 маркера фазы клеточного цикла. Полученные нами свидетельства вовлечения белков клеточного цикла в гибель нейронов при эпилепсии позволили предположить новый механизм связанных с эпилепсией нейродегенеративных изменений в ЦНС. Выявлены основные механизмы гибели нейронов при РТ2К, которые позволяют предполагать общность путей гибели нейронов при нейродегенеративных заболеваниях и эпилепсии. Показано, что и у толерантных к конвульсиям животных также происходят нейродегенерация и окислительный стресс в гиппокампе, и поэтому наиболее вероятной причиной этих изменений является именно судорожная активность в мозге животных. Чрезвычайно важен для понимания соотношения конвульсий и нейродегенерации тот факт, что гибель нейронов не зависит от выраженности конвульсий. Понимание механизмов нейродегенерации при эпилепсии позволит более эффективно искать пути патогенетически обоснованного предотвращения гибели нейронов и возможной коррекции дисфункции мозга у больных.