Влияние тромбина на регенерацию периферических нервов и синапсов

• Автор: Герасименко, Наталья Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 171 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИИ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Общая характеристика денервационнореинервационного синдрома.

2. Элиминация синапсов.

3. Сериновые протеиназы и их рецепторы в рауляции функций клеток центральной нервной системы

3.1. Общая характеристика тромбина и его рецепторов

3.2. Роль тромбина и его рецепторов в регуляции функций клеток ЦНС

i vi и i viv.

3.3. Трипсин как активатор 2 рецепторов и его роль в активности нейронов ЦНС

4. Содержание ссриновых протеиназ трипсина и тромбина как активаторов
рецепторов в составе периферических смешанных нервов.
4.1. Трипсин и рецепторы 2 в регуляции функций периферической
нервной системы.
4.2. Содержание тромбина, ею рецепторов и ингибитора протеазного нексина
в периферическом нерве после повреждения.
4.3. Влияние тромбина на формирование моторных синапсов млекопитающих
4.3.1. Опыты в культуре клеток
4.3.2. Эксперименты i viv.
4.3.3. Экспрессия тромбина, рецептора тромбина I и ингибитора
тромбина протеазного нексина1 мышечными клетками
ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Пережатие нерва п. i
2. Регистрация суммарного потенциала действия нерва п. ii iii.
3. Регистрация суммарного потенциала действия мышцы
4. Приготовление изолированного нервномышечного препарата . i т. мыши
5. Метод внутриклеточной регистрации спонтанных и вызванных потенциалов концевой пластинки.
6. Регистрация спонтанных миниатюрных потенциатов концевой пластинки МПКП.
7. Регистрация вызванных потенциалов концевой пластинки Г1КП.
8. Однократное локальное введение веществ
9. Определение динамики десорбции тромбина из плюронического геля
. Метод определения агрегации тромбоцитов
И. Используемые в работе вещества.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Изменение параметров суммарного потенциала действия нерва после его передавливания в контроле и при аппликации веществ агонистов рецепторов.
1.1 Характер СПДН .i в норме, на и сутки после пережатия нерва
1.2. Влияние сериновой протеиназы тромбина на процесс регенерации периферического нерва мыши
1.2.1 Определение скорости высвобождения тромбина из плюронического геля
1.2.2. Влияние однократной аппликации иммобилизованного тромбина на регенерацию
. i мыши
1.3 Изучение влияния нептидаагониста I IАР на процесс
регенерации периферического нерва мыши
1.3.1. Динамика десорбции пептидаагониста тромбиновых рецепторов I АР
из плюронического геля
1.3.2. Эффекты однократной аппликации IАР в составе плюронического геля
на процесс регенерации нерва
1.4. Влияние однократной аппликации иммобилизованного трипсина на
процесс регенерации периферического нерва i мыши
1.5. Изучение влияния на регенерацию периферического нерва мыши
однократной аппликации пептидаагонисга 2
2. Изменение параметров суммарного потенциала дейсгвия мышцы после передавливания нерва и последующей реиннервации в контроле и при
аппликации веществ агонистов I рецепторов
2.1. Анализ суммарного потенциала действия мышцы в норме и на сутки после передавливания малоберцового нерва
2.2. Изучение влияния тромбина на регенерацию моторной ветви малоберцового нерва
и решшервацию мышцы.
2.3. Изучение влияния пептидаагониста I IАР на регенерацию
моторной ветви малоберцового нерва и реиннервацию мышцы.
3. Анализ изменений параметров спонтанной активности нервномышечных синапсов мыши иод действием пептидаагониста I в норме и на е сутки
после передавливания нерва
3.1. Сравнение параметров М ПСП в норме и на е сутки после передавливания нерва
3.2. Влияние пептидаагониста I IАР на спонтанную активность
зрелых нервномышечных синапсов мыши
3.3. Влияние пептидаагониста I IАР на спонтанную активность новообразованных нервномышечных синапсов мыши на е сутки после
пережатия нерва
4. Анализ параметров вызванной активности нервномышечных синапсов . мыши в норме, на е сутки после пережатия нерва в контроле и на фоне аппликации пептидаагониста 1.
4.1. Сравнительный анализ параметров одиночных ПКП в норме и на е сутки
после пережатия нерва
4.2. Сравнительный анализ ритмической вызванной активности нервномышечных синапсов в норме и на е сутки после пережатия нерва.
4.3. Изучение влияния пептидаагониста I IАР на параметры одиночных ПКП на е сутки после пережатия нерва
4.4. Анализ влияния пептидаагониста I IАР на ритмическую вызванную активность нервномышечного синапса мыши на е сутки после пережатия нерва.
4.5. Влияние блокаторов Рзрсцепторов, РКС и РКА на развитие облегчающих эффектов 1 АР
4.5.1. Влияние блокады 1Рзрецепгоров на облегчающее действие псптидаагониста I IАР на вызванную активность новообразованного нервномышечного синапса мыши на е сутки после передавливания нерва
4.5.2. Влияние ингибирования протеинкиназы С бисиндолилмалейимидом I
на облегчающее действие пептидаагониста I IАР на нервномышечную передачу в новообразованном синапсе мыши на е сутки после пережатия нерва
4.5.3. Влияние ингибирования протеинкиназы С бисиндолилмалейимидом I
на нервномышечную передачу в нормальном интактном синапсе мыши
4.5.4. Влияние ингибирования протеинкиназы С хелеретрино.м на развитие эффектов пептидаагониста I IАР на нервномышечную передачу в новообразованном синапсе мыши на е сутки после пережатия нерва.
4.5.5. Влияние ингибирования протеинкиназы А Н на облегчающее действие пептидаагониста I IАР на нервномышечную передачу в новообразованном синапсе
мыши на е сутки после пережатия нерва.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Установлено, что базальная мембрана, которая находится в синаптической шели между нервным окончанием и мышечной мембраной, является структурой, играющей ключевую роль в ре1чнерации нервномышечных синапсов. Синаптическая базальная мембрана представляет собой интенсивно окрашиваемое внеклеточное вещество, состоящее из протеогликанов и гликопротеинов. В ходе исследований было выявлено наличие сигнальных молекул, ассоциированных с синаптической базальной мембраной, которые определяют успех регенерации синапсов. Эти сигналы при регенерации могут инициировать формирование синаптических специализаций как в мышечных волокнах, так и в нервных окончаниях. Одним из таких активных сигнальных компонентов базальной мембраны является агрип по химическому строению это гепаран сульфат протеогликан. Агрин синтезируется мотонейронами, транспортируется по аксонам и, высвобождаясь из нервной терминали, становится частью базальной мембраны, где он участвуег в сохранении иостсинаптического аппарата Николлс и др. В интактных зрелых синапсах на синаптической базальной мембране и в области постсинаптических складок находится фермент ацетилхолинэстераза АХЭ, наличие которого для моторных синапсов характерно и обязательно. Показано, что АХЭ ре1улирует стабильность структуры нервномышечных соединений этот фермент участвует в поддержании существующих на постсинашической мембране кластеров ацетилхолиновых рецепторов , , . При дснервации присутствие этого фермента на синаптической базальной мембране и в области постсинаптических складок сохраняется. Но показано, что холинэстеразная активность в области концевых пластинок после мышечной дснервации уменьшается, что влияет на параметры временного хода спонтанной и вызванной синаптической активности новообразованных в ходе реиннервации синапсов. Норматьный уровень холинэстеразной активности реиннервированных синапсов восстанавливается постепенно после возобновления синаптической передачи ii, , , Гехт, Никитин, Николлс и др. Новообразованные в ходе процесса реиннерваиии синаптические контакты отличаются от зрелых своей меньшей площадью. Через три, а иногда и более недель после начала процесса рсинисрвации структура регенерирующей нервной терминали обычно становится практически неотличимой от структуры зрелой интактной терминали на этом сроке новообразованная нервная терминаль становится более компактной и состоит из коротких терминальных веточек с варикозными расширениями, напоминающих короткие пальцыразветвления, отходящие от аксона. Еще одной отличительной чертой структуры реиннервированных синапсов, но сравнению со зрелыми, является ярко выраженная полинейрональлая иннервация в области одной концевой пластинки можно наблюдать присутствие нескольких собственной, ранее иннервировавшей данную концевую пластинку, и чужих, или подругому компенсаторных нервных терминалей, отличающихся по площади формируемой зоны контакта с мышцей и по своей синаптической активности. Полинейрональная иннервация реиннервированных моторных синапсов сходна с таковой моторных синапсов эмбрионов и новорожденных животных i, ii, а Гехт, Никитин, ii . Переход от множественной к одиночной иннервации происходит в процессе элиминации излишних терминалей. В следующей главе мы подробнее опишем феномен элиминации синапсов. Элиминация синапсов. Феномен элиминации синапсов впервые был описан при изучении процессов иннервации скелетных мышц млекопитающих в ыс годы го столетия. Было установлено, что у новорожденных животных каждое мышечное волокно иннервируется несколькими мотоненронами, образующими до 8 контактов одновременно на одном волокне поблизости друг от друга , i, . В то же время у функционально зрелых мышечных волокон взрослых животных наблюдается только одиночная иннервация каждая концевая пластинка иннервируется отростком одного мотонейрона i , . В году Рсдферном был открыт феномен синаптической элиминации процесса соревнования между нервными окончаниями, иннервирующими одно мышечное волокно, приводящий к ретракции оттягиванию лишних терминалей и установлению одиночной иннервации, характерной для взрослого организма , . Впоследствии это явление было описано и в других областях центральной и периферической нервной системы.