Участие потенциал-управляемых калиевых каналов гладкомышечных клеток a. gracilis крысы в формировании антиконтрактильного эффекта периадвентициальной жировой ткани

• Автор: Заварицкая, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 с. : ил.

1.1 Строение и функции артериальных кровеносных сосудов.

1.1.1 Эндотелий кровеносных сосудов.

1.1.2. Медия кровеносных сосудов

1.1.2.1 Калиевые каналы гладкомышечной стенки сосуда

1.1.2.1.1 АТФзависимые калиевые каналы.

1.1.2.2.2 Кальцийактивируемые калиевые каналы

1.1.2.2.3 Погенциалуправляемые калиевые каналы.

1.1.3 Адвентиция кровеносных сосудов

1.2 Роль периадвентициальной жировой ткани в регуляции артериального тонуса

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследований

2.2. Растворы.
2.3. Метод получения препарата изолированной артерии . ii
2.4. Метод получения изолированных гладкомышечных клеток . ii
2.5. Изучение силы изометрического сокращения фрагмента артерии.
2.5.1. Структура экспериментальной установки для изучения силы изометрического сокращения фрагмента артерии
2.5.2. Принцип фиксации и растяжения сосуда в перфузионной камере миографа
2.5.3. Процедура нормализации.
2.5.4. Протоколы экспериментов
2.6. Измерение Са 2 в гладкомышечных клетках стенки сосуда
2.6.1. Характеристики кальциевого зонда.
2.6.2. Блоксхема экспериментальной установки для двухволнового измерения концентрации кальция.
2.6.3. Окраска сосудов флуоресцентным красителем.
2.6.4. Протокол эксперимента.
2.7. Регистрация электрофизиологических свойств свежеизолированпых гладкомышечных клеток
2.8. Используемые реактивы.
2.9. Анализ и обработка данных эксперимента
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Исследование релаксирующего эффекта периадвентициального жира на а. ii.
3.1.1. Влияние серотонина
3.1.2. Влияние
3.1.3. Влияние фенилэфрина.
3.1.4. Влияние
3.1.5. Обсуждение
3.2. Роль эндотелия в антиконтрактильном эффекте псриадвентициальной жировой ткани на сократимость . ii
3.2.1. Обсуждение
3.3. Роль калиевых каналов в антиконтрактильном эффекте псриадвентициальной жировой ткани
3.3.1. Обсуждение
3.4. Исследование типов калиевых каналов, участвующих в антиконтрактильном эффекте периадвентициальной жировой ткани.
3.4.1. Кальцийактивируемые калиевые каналы
3.4.1.1. Са2т активируемые калиевые каналы большой проводимости.
3.4.1.2. Са2 активируемые калиевые каналы малой проводимости.
3.4.2. АТФзависимыс калиевые каналы.
3.4.3 Потенциалуправлясмыс калиевые каналы
3.4.3.1 Потенциалуправлясмые калиевые каналы семейства v
3.4.3.2 Потенциаяуправлясмые калиевые каналы семейства v
3.4.3.3 Исследование действия активатора v7 каналов.
3.4.4. Обсуждение
3.5. Механизм релаксации, вызываемой активатором v7 каналов
3.5.1. Роль эндотелия и нервных окончаний в механизме действия, активатора v7 каналов
3.5.2. Роль калиевых каналов в механизме релаксации, вызываемой активатором v7 каналов
3.5.3. Изменение внутриклеточного кальция Са при релаксации сосуда, вызванной 1.
3.5.4. Обсуждение
3.6. Характеристика выходящего К тока
3.7. Изучение эффекта ХЕ1 на v в гладкомышечных клетках, изолированных из . ii крысы.
3.7.1. Обсуждение
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРА ТУРЫ
СОКРАЩЕНИЯ
4АП 4аминопиридин
АТФ адснозинтрифосфат
АХ АсЬ ацетилхолин
ГМК гладкомышечные клетки
ГТФ гуанозинтрифосфат
МП мембранный потенциал
ОПС общее периферическое сопротивление
ПАЖ периадвентициальная жировая ткань
РОК Шю киназа
ТЕЛ тетраэтил аммоний
цГМФ циклический гуанозинмонофосфат
ЭГФ эндотелиальный гиперполяризующий фактор
ЭРФ эндотелийзависимый релаксирующий фактор
р сосуд с периадвентициальным жиром, интактный сосуд
Р сосуд, лишенный периадвентициального жира
вк Са2активирусмые Кканалы большой проводимости
СЬТх харибдотоксин
ЕС полумаксимальная эффективная концентрация
1ЬТХ ибериотоксин
1К Са2активируемые Кканалы средней проводимости
КАТР АТФзависимые калиевые каналы
КСа Са2активируемые Кканалы
КС1 хлорид калия
К калиевые каналы аномального выпрямления
Ку потенциалуправляемые калиевые каналы
мьс легкая цепь миозина
мьск киназа легких цепей миозина
0 оксид азота
РвЕ простагландин
Рв простациклин
РКА протеинкиназа А
РКС протеинкиназа С
8К Саактивируемые Кканалы малой проводимости
ВВЕДЕНИЕ


В главе Результаты и обсуждения представлены полученные данные о влиянии периадвентициальной жировой ткани на сократимость . С помощью метода миофафии показан эффект периадвентициального жира на сократимость скелетных артерии крыс и участие в этом эффекте потенциалуправляемых калиевых каналов подсемейства Ку7. В работе впервые исследован вопрос о влиянии периадвентициальной жировой ткани на сократимость скелетной артерии . Были изучены пути реализации антиконтрактильного действия периадвентициального жира. Впервые показано, что периадвентициальпый жир, окружающий артерию, снабжающую скелетную мышцу, обладает ангиконтрактильным действием на сосуд. Получены принципиально новые данные об экспрессии потенциалуправляемых калиевых каналов семейства Ку7 в гладкомышечных клетках скелетных артерий. В свежеизолированных гладкомышечных клетках . Саг активируемых Кканалов большой проводимости специфическим ингибитором ибериотоксином, выявлено существование потенциалуправляемых калиевых каналов, принадлежащих семейству v7. Показан эффект специфического блокатора v7 каналов ХЕ1 в концентрации мкМ и 0 мкМ на выходящий Кток в гладкомышечных клетках мелких артерий на примере . В основу работы положены результаты экспериментов, проведенные на 0 животных. Для изучения сокращения фрагментов артерии сосудов в изометрическом режиме с помощью системы i было проведено 7 экспериментов, из них 9 подверглись статистической обработке как соответствующие протоколу. С применением метода в конфигурации поставлено эксперимента. На освоение методики потребовалось три месяца. Полученные данные существенно развивают современные представления о механизмах регуляции тонуса скелетных артерий и роли в этом адипокинов. Теоретическое значение работы заключается в том, что впервые в изучено паракринное влияние периадвентициальной жировой ткани на артериальный тонус мелких сосудов. Полученные данные расширяют представления о возможной роли периадвентициального жира и Кканалов, локализованных в гладкомышечных клетках, в регуляции сократимости сосудов. ХЕ1. Практическая значимость результатов заключается в том, что на базе полученных экспериментальных данных может быть осуществлен целенаправленный поиск и изучение фармакологических препаратов, регулирующих сосудистый тонус, а именно обладающих вазодилятирующим эффектом, что позволит использовать их при лечении сердечнососудистых нарушений. Работу завершают выводы, вытекающие из обобщения результатов экспериментов. Работа изложена на 9 страницах машинописного текста, включая 6 таблиц, рисунков и список литературы из 7 источников. Г ипертоническая болезнь человека сопровождается повышенным артериальным давлением при изначально нормальном минутном объеме сердца, при этом повышается общее периферическое сопротивление 0. Этому вопросу посвящена работа МиКапу МЛ. На1реш XV. Основное внимание в ней уделено роли артерий и артериол, поскольку они, главным образом, характеризуют общее периферическое сопротивление сосудов ОМС, то есть сопротивление току крови, оказываемое сосудами большого круга кровообращения 3. Артериолы обладают развитой гладкой мускулатурой, благодаря которой они способны активно менять свой просвет и, таким образом, регулировать сопротивление кровотоку. На артериолы приходится наибольшее падение давления, и именно они определяют соотношение артериального давления АД и объема кровотока, поэтому артериолы называют резистивными сосудами. Тонус артериол является составляющим фактором в величине АД. ОПС и, вместе с тем кровяное давление, регулируется за счет сокращения и расслабления артериальных кровеносных сосудов. Повреждение кровеносных сосудов, как, например, эндотелия при атериосклерозе, является важной этиопатологичсской ступенью для развития кардиоваскулярных заболеваний, поскольку нарушение сосудистой функции может приводить к повышению общего периферического сопротивления и, как следствие, к развитию сосудистосердечных заболеваний. Поэтому важное значение приобретает отдельных слоев кровеносных сосудов, для того чтобы выяснить их роль в развитии кардиоваскулярных заболеваний .