Нейропротективное действие ключевых протеиназ гемостаза

• Автор: Горбачева, Любовь Руфэльевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 216 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТРОМБИНА И ЕГО ОБРАЗОВАНИЕ.

1.1. Образование тромбина и его полифункциональность

ГЛАВА 2. РЕЦЕПТОРЫ, АКТИВИРУЕМЫЕ ПРОТЕИНАЗАМИ, КЛЮЧЕВОЕ ЗВЕНО В РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНЫХ ПРОЦЕССОВ СЕРИНОВЫМИ

ПРОТЕИНАЗАМИ

2.1 Структура и активация рецепторов

2.2. опосредованные механизмы передачи внутриклеточных сигналов

ГЛАВА 3. УЧАСТИЕ ТРОМБИНА В РЕГУЛЯЦИИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ И ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ.
3.1. Локализация тромбина, его предшественников, ингибиторов и рецепторов в нервной системе.

3.2. Нсйротоксичсское действие тромбина.

3.3. Нейропротекторное действие тромбина
3.3. Особенности действии фактора Ха на клетки
3.4. Провоспалнтельные функции тромбина к нервной системе.
ГЛАВА 4. ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ ПРОТЕИНА С И МЕХАНИЗМ ЕГО АКТИВАЦИИ.
4.1. Структура протеина С.
4.2. Активация протеина С.
ГЛАВА 5. УЧАСТИЕ АКТИВИРОВАННОГО ПРОТЕИНА С В ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЯХ ОРГАНИЗМА
5.1. Антикоагулянтнаи активность АРС
5.2. Активированный протеин С новый высокоэффекгивный препарат при терапии сепсиса.
5.3. Активированный протеин С и его протекторные функции
5.4. Молекулярные механизмы эффектов активированного
протеина С
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Основные, использованные в работе препараты.
Получение культуры гиппокампальных и кортикальных нейронов
Оценка гибели нейронов
Флуоресцентномикроскопические исследования.
Иммунофлуорссцентное окрашивание. Определение
Иммуиофермснтныи анализ. Определение .
Определение амидазиой активности АРС, тромбина и фактора Ха.
Обратная транскрипция ОТ и полимеразная ценная реакция ПЦР
Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ ПРОТЕИНАЗ ГЕМОСТАЗА ТРОМБИНА, ФАКТОРА Ха И АРС, НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ НЕЙРОНОВ В НОРМЕ И ПРИ ЭКСАЙТОТОКСИЧНОСТИ, ВЫЗВАННОЙ ГЛУТАМАТОМ
6.1. Влияние тромбина на выживаемость нейронов при глутаматнои цитотоксичности
6.2. Влияние фактора Ха на выживаемость культивируемых нейронов в условиях токсическою воздействия глутамата.
6.3. Влияние АРС на выживаемость культивируемых гиппокампальных и кортикальных нейронов крысы при глутаматнои эксайтотоксичности
ГЛАВА 7. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ мРНК И В КУЛЬТУРЕ ГИППОКАМПАЛЬНЫХ И КОРТИКАЛЬНЫХ НЕЙРОНОВ МОЗГА КРЫСЫ.
7.1. Экспрессии и рецепторов в гиппокампальных и кортикальных нейронах в норме
7.2. Изменение экспрессии и рецепторов в гиппокампальных и кортикальных культурах в зависимости ог времени культивирования клеток и иод действием тромбина.
ГЛАВА 8. УЧАСТИЕ РЕЦЕПТОРОВ, АКТИВИРУЕМЫХ ПРОТЕИНАЗАМИ В НЕЙРОПРОТЕКТОРНОМ ДЕЙСТВИИ ТРОМБИНА, ФАКТОРА Ха И АРС.
8.1. I опосредует протекторное действие тромбина па культивируемые нейроны гиппокампа крысы.
8.2. Нейропротекторнос действие ФХа реализуется через новый не известный подтип расщепляемого рецептора .
8.3. Для протекторного действии АРС на нейронах необходимы два рецептора I и .
ГЛАВА 9. ВЛИЯНИЕ ПРОТЕИНАЗ ГЕМОСТАЗА НА КОНЦЕНТРАЦИЮ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО КАЛЬЦИЯ Са2Ь В КУЛЬТИВИРУЕМЫХ НЕЙРОНАХ
9.1. Влияние тромбина на уровень I2 в культивируемых нейронах гиппокампа крысы
9.2. Тромбин и фактор Ха повышают способность нейронов восстанавливать уровень 2i после длительного воздействия глутамата.
ГЛАВА . ВЛИЯНИЕ ПРОТЕИНАЗ ГЕМОСТАЗА НА АКТИВАЦИЮ ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА кВ В НЕЙРОНАХ
.1. Влияние высоких концентраций глутамата на активацию транскрипционного фактора кВ
.2. Влияние АРС, тромбина и фактора Ха на уровень субъединицы в ядре гиппокампальных нейронов в условиях токсического действия глутамата на клетки
.3. Рецепторы, опосредующие влияние АРС на вызванную глутаматом транслокашно в ядро гиппокампальных нейронов
ГЛАВА . ВЛИЯНИЕ ИНГИБИТОРА БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА НА НЕЙРОПРОТЕКЦИЮ, ВЫЗВАННУЮ АРС, ТРОМБИНОМ И ПЕПТИДОМАГОНИСТОМ I.
ГЛАВА . ЭНТЕРОПЕПТИДАЗА КАК ЭНДОГЕННЫЙ ИНАКТИВАТОР РЕЦЕПТОРА ТРОМБИНА I.
.1. Влияние энтсронсптидазы на вызванное тромбином изменение Са i в культивируемых нейронах мозга крысы.
.2. Влияние ш героиептидазы на вызванное пептидомагонистом I изменение 2 в культивируемых нейронах гиппокампа.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Протекторное действие протеиназ на клетки мозга при повреждении и эксайтотоксичности позволяет отнести их к клеточным регуляторам физиологических и патофизиологических процессов. С . Уровень экспрессии модулируется под действием тромбина и глутамата. Тромбин регулирует экспрессию . АРС защищает нейроны от гибели, блокируя активацию транскрипционного фактора кВ, вызванную глутаматом или тромбином. Показано, что исследованные протеиназы тромбин, ФХа и АРС в узком диапазоне низких концентраций через активацию подтипов , защищают гиппокампальные и кортикальные нейроны от гибели при эксайтотоксичности. Протекторное действие тромбина на нейроны при эксайтотоксичности реализуется через I, ФХа через неизвестный подтип , а АРС через и I. Нейроиротекторное действие тромбина и ФХа обусловлено уменьшением дестабилизации кальциевого гомеостаза нейронов при глутаматной эксайтотоксичности. АРС защищает нейроны от гибели, блокируя активацию кВ, вызванную токсическим действием на нейроны высоких концентраций глутамата или тромбина. Полученные данные о протекторном действии протеиназ в низких физиологических концентрациях на клетки при эксайтогоксичости позволяют отнести тромбин, ФХа и АРС к клеточным регуляторам физиологических и патофизиологических процессов. Данные о прямом цитопротекторном действии протеиназ гемостаза могут служить основой для разработки новых подходов к лечению травматических и ишемических повреждений нервной ткани и создания на базе агонистов и антагонистов рецепторов препаратов с антиапоптотическими, антивоспалитсльными и репаративными свойствами, защищающими клетки от гибели и восстанавливающими ткани при терапии данных повреждений. Результаты этой работы могут найти применение в теоретической и экспериментальной физиологии, патофизиологии и фармакологии. Данные о новых функциях протеиназ гемостаза вне системы свертывания могут быть включены в курсы лекций по теме Физиология и патофизиология гемостаза, Нейрофармакологии. Материалы диссертации были представлены на I и II Съездах физиологов СНГ Дагомыс, Кишинев, 4,ьи 5 Ii i , . Ii , , Ii iii i i, , XX Съезде Физиологического общества им. И.П. Ярославль, Москва, Биотехнология и медицина Москва, , Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС Пенза, Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки Минск, Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии Украина, Крым, ЯлтаГурзуф, , Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечнососудистой хирургии Москва, . Результаты работы обсуждались на заседаниях кафедры физиологии человека и животных МГУ им. М.В. Ломоносова и лаборатории, мембранологии с группой генетических исследований ГУ НЦЗД РАМН. По теме диссертации опубликовано научных работ в отечественной и зарубежной печати. Диссертация изложена на 5 стр. Работа иллюстрирована рисунками, содержит 2 таблицы. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Активация фазы инициации процесса свертывания крови приводит к появлению сериновых протеиназ факторов Vi, Ха и тромбина. Тромбин играет ключевую роль в системе гемостаза, т. Тромбин стимулирует первичный гемостаз, а так же активирует антикоагулянтую систему протеина С. Основным механизмом тромбиногенеза в сосудистом русле является так называемый внешний путь свертывания крови, индуцируемый субэндотелиальным тканевым фактором, который экспонируется в кровоток вследствие повреждения или активации эндотелия , Бутенас, Манн , . Тканевый фактор1Т трансмембранный гликопротеин член семейства рецепторов цитокинов класса II связывается с циркулирующим в крови фактором Vi, изменяя его конформацию, и комплекс VII активирует факторы IX и X свертывания крови рис. Сначала на стадии инициации свертывания крови образуется небольшое количество фактора Ха, который, активируя протромбин, стимулирует появление следовых количеств тромбина, достаточных для активации кофакторов факторов V и VIII в активные формы факторы V и Vi рис. АггоПе и i в протромбине, превращает его в тромбин , v, . Рис. Молекулярная модель VIIФХа комплекса . Рис. Схема процессов, происходящих в фазе инициации свртывания крови.