Модуляция пектинами проницаемости кишечной стенки и иммунного ответа на овальбумин

• Автор: Храмова, Дарья Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Сыктывкар
• Количество страниц: 129 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Проницаемость кишечной стенки

1.2 Иммунный ответ на белковые антигены, поступающие в кишечник

1.3 Пектиновые полисахариды и их иммуномодулирующая активность Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объект исследования

2.2 Растворы и реагенты

2.3 Характеристика пектинов, используемых в работе

2.4 Определение концентрации V в крови

2.5 Определение концентрации цитокинов в слизистой тонкой кишки

2.6 Оценка продукции цитокинов перитонеальными макрофагами
2.7 Протеолиз V в присутствии пектинов i vi
2.8 Измерение активности протеолитических ферментов
2.9 Регистрация иммунного ответа у мышей на белковый антиген, введенный с пектиновыми полисахаридами
2. Оценка противоаллергического действия цирсиумана .
2. Определение количества кишечной слизи
2. Установление структурных особенностей пектиновой макромолекулы, определяющих стимулирование иммунного
ответа на овальбумин
2. Статистическая обработка результатов
Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИСС ЛЕДОВ АМИЯ
3.1 Концентрация V в крови у мышей после его перорального введения с пектинами
3.2 Содержание цитокинов в слизистой оболочке тонкой кишки и продукция цитокинов макрофагами умышей, получивших пектины перорально
3.3 Степень протеолиза V, гидролизованного i vi в присутствии цитрусового пектина и гераклиумана, и активность протеолитичесих ферментов i vi
3.4 Характеристика иммунного ответа на V, введенный перорально с пектиновыми полисахаридами
3.5 Действие пектина бодяка, цирсиумана СЕ, на развитие аллергической реакции
3.6 Иммунный ответ на V, введенный с фрагментами макромолекулы цитрусового пектина, лемнана и цирсиумана
Глава 4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1 Проницаемость кишечной стенки для белкового антигена, введенного перорально с пектиновыми полисахаридами
4.2 Изменение продукции цитокинов и модулирование протеолиза белка как возможный механизм действия пектинов на проницаемость кишечной стенки для белкового антигена
4.3 Развитие оральной толерантности у мышей, получавших V с пектинами
4.4 Особенности иммуностимулирующего действия пектина бодяка съедобного цирсиумана СЕ
4.4 Выявление активной области пектиновой макромолекулы, определяющих их иммуностимулирующее действие
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений
АПК антигенпрезентирующие клетки
БСА бычий сывороточный альбумин
ГЗТ гиперчувствительность замедленного типа
ЖКТ желудочнокишечный тракт
ИЛ1 интерлейкин 1
ИЛ4 интерлейкин
ИФА иммуноферментный анализ
ИФНу у интерферон
Л 1 липополисахарид грамотрицательных бактерий СМ степень метилэтерифицирования ФНОа фактор некроза опухоли а
ВС бергенан, пектин бадана толстолистного i i .
цирсиуман, пектин бодяка съедобного ii iv. полный адъювант Фрейнда v
комаруман, пектин сабельника болотного .
гераклсуман, пектин борщевика сибирского iii . I иммуноглобулин
и лемнаны, пектины ряски малой i .
V овал ьбумин пектин яблочный
фосфатнобуферный раствор i
пектин цитрусовый
1 и 2 Тхелпер 1 и 2 лимфоциты
Введение
Актуальность


Установлено, что модулирование пектинами проникновения белка обусловлено их влиянием на секрецию цитокинов и протеолиз белковой макромолекулы. Впервые показано, что пектины, повышающие проникновение V в кровь лемнаны, цирсиуман и цитрусовый пектин, стимулируют иммунный ответ на белок. Обнаружено, что лемнаны, цирсиуман и цитрусовый пектин ингибируют оральную толерантность к V. Показано, что фрагменты разветвленной области макромолекулы лемнана и црсиумана обладают иммуностимулирующим действием. Научнопрактическая значимость. Расширены представления о модуляции проницаемости кишечной стенки и иммунного ответа на пищевые белки, а также о связи между структурой и иммуностимулирующей активностью пектинов. Получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что иммуностимулирующее действие пектинов может быть обусловлено повышением проницаемости кишечной стенки для антигенов. Способность пектинов повышать проникновение совместно вводимого с ними белка, необходимо учитывать при составлении диет для пациентов, страдающих пищевыми аллергиями. Пектины, стимулирующие иммунный ответ на совместно вводимый с ними антиген, могут представлять интерес при создании пероральных вакцин. Проницаемость кишечной стенки для белкового антигена изменяется при поступлении белка с пектиновыми полисахаридами. Увеличение проникновения белка, вызванное пектинами, приводит к повышению иммунного ответа на антиген. Модулирование пектинами проницаемости кишечной стенки для белка связано с изменением секреции цитокинов и протеолиза белковой макромолекулы. Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора Н. Н.Кеворкова Иммунитет и аллергия от эксперимента к клинике Пермь, , XIII Молодежной научной конференции Института биологии Коми НЦ УрО РАН Актуальные проблемы биологии и экологии Сыктывкар, , VI Молодежной научной конференции Института физиологии Физиология человека и животных от эксперимента к клинической практике Сыктывкар, , ом Европейском симпозиуме по углеводам ЕигосагЬ , Любек, Германия, , I Всероссийской молодежной научной конференции Молодежь и наука на севере Сыктывкар, , V Всероссийской школеконференции Химия и технология растительных веществ Уфа, . Публикации. По теме диссертационной работы в соавторстве опубликовано девять печатных работ из них четыре опубликованы в изданиях, рекомендованных ВАК. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 9 машинописных страницах, состоит из введения, четырех глав обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, обсуждение результатов, выводов и списка литературы 2 источника. Диссертация содержит таблиц и 6 рисунков. Всасывание питательных веществ из просвета кишки в кровь и лимфу происходит главным образом в тонкой кишке Камкин, Каменский, . Для выполнения этой функции тонкая кишка обладает обширной поверхностью, которая обр1Эована эпителиальными клетками, осуществляющими всасывание веществ. Увеличение всасывающей поверхности происходит за счет образования циркулярных или спиральных складок, называемых клапанами Керкринга Эве, Карбах, . Эти складки имеют максимальные размеры и располагаются наиболее близко друг к другу у проксимального отдела тонкой кишки, в верхней части тощей кишки они становятся меньше и располагаются дальше друг от друга, а в середине подвздошной или у се дистального конца исчезают. Поверхность слизистой на складках и между ними усеяна кишечными ворсинками. Длина и площадь поверхности ворсинок максимальна в начале тонкой кишки и снижается в подвздошной. Всасывающая поверхность становится еще более значительной за счет наличия микроворсинок на свободных поверхностях эпителиальных клеток. Клетки эпителия ворсинок бывают двух типов около их составляют высокие цилиндрические клетки высотой рм и 8 рм шириной с широкой щеточной каемкой, состоящей из плотно упакованных микроворсинок, это всасывающие клетки энтероциты. Остальные клетки эпителия ворсинок представлены выделяющими слизь бокаловидными клетками.