Изучение новых нейропротекторов на модели фокальной ишемии головного мозга

• Автор: Силачёв, Денис Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 206 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Механизмы повреждения нейронов при ишемическом

инсульте

Нарушение мозгового кровообращения и повреждение нейронов

Глутаматная эксайтотоксичность, роль ионов кальция в гибели

клеток

Некротические и апоптотические процессы при ишемии головного

мозга.
Ацидоз
Окислительный стресс
Механизмы клеточной защиты от АФК и АФА в нервной ткани
Глава 2. Фармакологическая коррекция последствий ишемии
головного мозга.
Фармакологическая защита нейронов от деструктивного действия
глутамата.
Нейропептиды
Защита мозга от окислительного стресса
Глава 3. Модели экспериментальной ишемии головного мозга.
Вид животных и их физиологическое состояние.
Выбор модели
Модели, не требующие краниотомии
Эмболическая модель
Модель перекрытия средней мозговой артерии нитью.
Модель фототромбоза
Инсульт, вызванный эндотелином1.
Модели, включающие краниотомию
Источники вариабельности
Факторы, связанные с видом животного
Факторы, связанные с видом модели.
Анестезия.
Глава 4. Поведенческие тесты для оценки неврологического
дефицита после ишемии головного мозга.
Сенсомоторные тесты.
Когнитивные тесты.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Операция перекрытия средней мозговой артерии нитью
Окраска срезов мозга 2,3,5трифенилтетразолия хлоридом
Магнитнорезонансная томография.
Определение объема инфаркта.
Изучаемые вещества
Тест Цилиндр
Тест Стимулирования конечностей.
Тест Сужающаяся дорожка.
Приготовление гомогенатов ткани.
Определение концентрации белка
Вестернблоттинг
Статистическая обработка данных.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Часть 1. Моделирование фокальной ишемии головного мозга крысы перекрытием средней мозговой артерии нитью
1.1 Исследование формирования ишемического очага с помощью метода МРТ и окраской с анализом моторного дефицита в передних конечностях крыс
1.2 Исследование динамики формирования ишемического очага
методом МРТ.
Часть 2. Нейропротекторная коррекция последствий ишемии головного мозга
2.1 Исследование нейропротекторной активности ионов лития
2.2 Исследование нейропротекторной активности пептида ГК2
2.3 Исследование нейропротекторной активности пептида
2.4 Исследование нейропротекторной активности митохондриальнонаправленных антиоксидантов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Все три рецепторноканальных комплекса обладают различными функциональными свойствами , . При гиперактивации ионотропных глутаматных рецепторов К начинает выходить из нейрона, а Са2 и поступать в клетку через и каинатные каналы. Саканалы. Также определенные подтипы АМРАрецепторов являются проницаемы для Са2т и вносят значительный вклад в клеточную гибель i, . Са в митохондриях. Повышение внутриклеточного натрия ведет к нарушению транспорта глутамина и глюкозы в клетку. Избыточный цитозольный кальций, поступивший в нейрон при действии Глу, в значительной степени аккумулируется митохондриями, что способствует повышенной генерации свободных радикалов этими органеллами. Избыточный вход Са в клетки рассматривается многими исследователями как одна из основных причин повреждения нейронов в результате действия возбуждающих аминокислот i vi i, , а также при ишемии . Помимо ионотроных глутаматных рецепторов, активное участие в патологических каскадах принимают метаботропные глутаматные рецепторы. Действие метаботропных рецепторов опосредовано белками, активация которых приводит к запуску или остановке каскадов вторичных мессенджеров. В мозге млекопитающих выделяют, по крайней мере, восемь различных типов рецепторов, разделенных на 3 группы . Рецепторы 1 группы i и 11I5 активируют фосфолипазу С. Действие рецепторов группы II и ИТ связано через субъединицу , которая ингибирует аденилатциклазу. Считается, что за клеточную гибель главным образом ответственны рецепторы I группы, а именно iiii, . Применение ингибиторов i приводило к снижению клеточной гибели в культуре клеток или к уменьшению объема ишемического повреждения в моделях i viv i . i . . i . . Активация фосфолипазы С рецепторами группы I приводит к гидролизу мембранных липидов с образованием двух молекул инозитол1,4,5трифосфата 1Рз и диацилглицерола. перегрузку нейрона i, . Концентрация свободного Са2 в цитоплазме нейрона, находящегося в состоянии покоя, составляет около 0,1 мкМ. После активации глутаматных рецепторов нейронов концентрация этого иона может достигать 8 мкМ v i, . 2 обменник выходом Са2 через Са2тАТФазу или 2 обменник в цитоплазматической мембране связыванием Са2 с белкамимишенями депонирование Са2 в эндоплазматическом ретикулуме с помощью Са2,АТФазы или в митохондрии электрогенным транспортом i . i, i, . Несмотря на эффективное применение антагонистов кальциевых каналов в экспериментах i vi и i viv, проведенные клинические испытания не выявили их эффективности, что вызвало активное изучение ряда других механизмов проникновения Са2 в клетку . Кроме глутаматных рецепторов, поступление Са7 и накопление его в клетке может происходить в результате вовлечения следующих механизмов вопервых, через активированные каналы, проницаемые для ионов Са2 и через поврежденную мембрану вовторых, вследствие нарушения удаления его из клеток в результате ослабления работы кальциевого насоса при энергетическом дефиците втретьих, посредством изменения направленности работы 2обменника. Рассмотрим эти механизмы подробнее. Са2обменник X 4 Са2 x является белком, широко экспрессирующимся в мозге. Используя энергию концентрационного градиента ионов натрия, X производит перенос иона кальция из клетки и трех ионов натрия в клетку за один цикл. Однако может происходить реверсия направления работы X, возможность наступления которой регулируется изменением ионных градиентов и Са2, внутриклеточным и АТФ . Данные о роли X при ишемии головного мозга являются противоречивыми. Пигнатаро с коллегами показал, что различные ингибиторы X увеличивали объем инфаркта в модели перманентного перекрытия СМА, тогда как активатор уменьшал объем повреждения i .