Механизм регуляции роста нейритов в органотипической культуре спинальных ганглиев

• Автор: Пеннияйнен, Валентина Альбертовна
• Шифр специальности: 03.00.13, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 166 с. : ил

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. СТРУКТУРА И СВОЙСТВА 4 КАТФазы.

2.2. ВЛИЯНИЕ ИНФРАКРАСНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОБЪЕКТЫ

2.3. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О НТФ И ИХ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ РОЛИ В РАЗВИВАЮЩЕЙСЯ II ЗРЕЛОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ

2.3.1. Концепции действии нейротрофических факторов

2.3.2. Семейство нейротрофинов

2.4. ИНГИБИТОРЫ СЕРИНОВЫХ ПРОТЕАЗ СЕРПИНЫ

2.5. КОМПОНЕНТЫ СЕКРЕТА СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКИ.

3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ НЕРВНОЙ ТКАНИ ПРИ

ИССЛЕДОВАНИИ НЕЙРОТРОФИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ.
3.1.1. Органотипическая культура спинальных ганглиев как тестсистема для исследования нейротрофических свойств биологически активных веществ и воздействий.
3.2. ПОДГОТОВИТЕЛЬНЫЕ ЭТАПЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НЕРВНОЙ ТКАНИ
3.2.1. Состав и приготовление питательной среды
3.2.2. Получение коллагена и коллагеновой подложки.
3.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ТКАНЕЙ И МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ.
3.3.1. Органотипическая культура спинальных ганглиев куриных эмбрионов.
3.4. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ЭКСПЛАНТАТОВ НЕРВНОЙ
ТКАНИ .
3.5. МЕТОД БИЛЬШОВСКОГОГРОС
3.5.1. Приготовление аммиачного раствора.
3.5.2. Метод окраски.
3.6. ГЕНЕРАТОР ИК ИЗЛУЧЕНИЯ.
3.7. ВЫДЕЛЕНИЕ ДЕСТАБИЛАЗЫ
3.8. ВЫДЕЛЕНИЕ ЭГЛИИА С.
3.8.1. Получение культуры
3.8.2. Выделение эглина С
4. РЕЗУЛЬТАТЫ.
4.1. РАЗВИТИЕ ЭКСПЛАНТАТОВ СПИНАЛЬНЫХ ГАНГЛИЕВ ДНЕВНЫХ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ В
ОРГАНОТИПИЧЕСКРЙ КУЛЬТУРЕ ТКАНИ.
4.2. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ СЕЛЕКТИВНОГО ИНГИБИТОРА Ха КАТФазы ОУАБАИНА НА РОСТ НЕЙРИТОВ СЕНСОРНЫХ НЕЙРОНОВ СПИНАЛЬНЫХ ГАНГЛИЕВ ДНЕВНЫХ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ
4.3. ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ ПК ИЗЛУЧЕНИЯ НА РОСТ НЕЙРИТОВ В ОРГАНОТИПИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЕ СПИНАЛЬНЫХ ГАНГЛИЕВ.
4.4. ИССЛЕДОВАНИЕ НЕЙРОТРОФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ Д ЕСТ А БИЛА ЗЫ В ОРГАНОТ1ШИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЕ СПИНАЛЬНЫХ ГАНГЛИЕВ.
4.5. ИЗУЧЕНИЕ НЕЙРОТРОФИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИНГИБИТОРОВ СЕРИНОВЫХ ПРОТЕАЗ ДБЕЛЛАСТАЗИНА, ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО БДЕЛЛИНА В н ЭГЛИНА С В КУЛЬТУРЕ СПИНАЛЬНЫХ ГАНГЛИЕВ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ
4.6. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ ДЕСГАБИЛАЗЫ И ИНГИБИТОРА СЕРИНОВЫХ ПРОТЕАЗ ДБЕЛЛАСТАЗИНА НА РОСТ НЕЙРИТОВ.
4.7. ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОЙ ЮЛИ Чл ЫАТФлзы КАК ТРАНСДУКТОРА СИГНАЛА В КУЛЬТУРЕ СЕНСОРНЫХ НЕЙРОНОВ ДНЕВНЫХ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
6. ВЫВОДЫ.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АХ ацстилхолин
Б ПА белок предшественник амилоида ИК излучение инфракрасное излучение ИП индекс площади
МРНК матричная рибонуклеиновая кислота НТ3, 4 нейротрофин3, 4 НТФ нейротрофичсский фактор
ПМНТФ производный из мозга нейротрофичсский фактор
ФРН фактор роста нервов
ФРФ фактор роста фибробластов
ФРЭ фактор роста эритроцитов
ЦНС центральная нервная система
ЦНТФ цилиарный нейротрофический фактор
а2М а2макроглобулин
АР белок связанный с ростом
гликопротеин
НМВ i i i
I iv Iii
I высокоаффинный рецептор к ФРН
р, низкоаффинный рецептор к ФРН
рецептор, активируемый протеиназой
1. ВВЕДЕНИЕ
АКТУАЛЬНОСТЬ


Изучить нейротрофические свойства ингибиторов сериновых протеаз бделластазина, высокомолекулярного бделлина В и эглина С в культуре спинальных ганглиев куриных эмбрионов. Исследовать механизм действия дестабилазы и ингибитора сериновых протеаз бделластазина на рост нейритов. Оценить возможную роль Ыа К4АТФазы как трансдуктора сигнала в культуре сенсорных нейронов дневных куриных эмбрионов. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В работе впервые исследовано воздействие ИК излучения низкой интенсивности на сенсорные нейроны спинальных ганглиев дневных куриных эмбрионов. Впервые показано, что возможной мишенью действия ИК излучения, ингибирующего рост нейритов в соме сенсорных нейронов, является КАТФаза. Полученные результаты свидетельствуют о том, что аЗизоформа в мембране сенсорных нейронов в эмбриональный период играет такую же важную роль, как и а 1изоформа во взрослом организме. В и эглина С, наличие которых позволяет объяснить механизм положительного действия трудотерапии при лечении заболеваний, связанных с патологиями нервной ткани. Зизоформа , КАТФазы в . Зизоформа взрослого организма. ИК излучение низкой интенсивности полностью блокирует рост нейритов в органотипической культуре сенсорных нейронов дневных куриных эмбрионов. Неспецифическос нейротрофичсскос действие компонентов секрета слюнных желез медицинской пиявки дестабилазы, бделластазина, высокомолекуляного бделлина В, эглина С лежит в основе положительного эффекта трудотерапии при лечении нейродегенеративных заболеваний и опосредуется через активацию высокоаффинных рецепторов фактора роста нервов. Ыа, КАТФаза принимает участие в регуляции роста нейритов сенсорных нейронов спинальных ганглиев и внугриклеточной сигнализации. НАУЧНОРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. КАТФаза в регуляции процессов роста, развития и диффсренцировки нервных клеток. Полученные результаты впервые объясняют механизм положительного эффекта гирудотерапии при лечении заболеваний, обусловленных нарушениями проведения сигналов в нервной системе. Применение ИК излучения низкой интенсивности, может быть рекомендовано при лечении некоторых воспалительных процессов различной этиологии. Результаты исследований могут быть использованы при создании лекарственных препаратов нового поколения и при разработке медицинских приборов лазеров для низкоинтенсивной лазерной терапии. Материалы диссертации могут быть использованы в курсах лекций в медицинских и биологических ВУЗах. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены на VII научнопрактической конференции ассоциации гирудологов, Москва, на международной конференции СПИД, рак и родственные проблемы, СанктПетербург, на заседании СанктПетербургского общества физиологов, СанктПетербург, на IV международной конференции по функциональной нейроморфологии, СанктПетербург, на межлабораторном заседании отдела сенсорных систем Института физиологии им. И.П. Павлова РАН января г. Содержание диссертации изложено в 8 печатных работах. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов исследований, обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 5 страницах машинописного текста, содержит рисунков и 1 таблицу. Библиографический указатель состоит из 2 источников. КАТФаза важнейший регулятор клеточных функций, обеспечивающий нормальное функционирование любой клетки. Известно, что , Кзависимая АТФаза, гидролизующая АТФ в присутствии ионов и К4, является интегральным мембранносвязанным ферментом и рассматривается как составная часть , Кяасоса. Основной функцией , КАТФазы является поддержание трансмембранных ионных градиентов и К. Эти градиенты обеспечивают движущую силу других транспортных механизмов, играющих важную роль в регуляции клеточного объема, мембранного потенциала, внутриклеточной концентрации ионов Са2 и , электрической возбудимости. КАТФаза играет основную роль в регуляции водносолевого обмена, является важным фактором, препятствующим развитию гипоксии и утомления. Снижение активности , КАТФазы является одним из признаков различных форм патологий, включая сердечнососудистые заболевания, диабет, возрастную невропатологию и др.