Функциональное состояние лейкоцитов, хранившихся в условиях околонулевых температур

• Автор: Лаптев, Денис Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.13, 14.00.29
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Сыктывкар
• Количество страниц: 99 с. : ил.

Введение
ГЛАВА I. Состояние проблемы хранения лейкоцитов в условиях околонулевых температур обзор литературы.

1.1 Структура и функциональные свойства лейкоцитов.

1.2 Способы получения лейкоцитного концентрата и его применение

1.3 Особенности хранения лейкоцитов в условиях околонулевых

температур.

ГЛАВА II. Материалы и методы исследований

2.1 Получение лейкоцитного концентрата.

2.2 Разработка метода хранения лейкоцитов в условиях околонулевых температур 2 О С

2.3 Методы исследования функционального состояния лейкоцитов до и после хранения в условиях околонулевых температур 2 5 0 С.

2.4 Методы изучения биологических особенностей хладоо1раждающего

раствора.
ГЛАВА III. Результаты экспериментальных исследований.
3.1 Сравнительное исследование влияния трех вариантов хладоограждающего раствора на функциональные и морфологические показатели лейкоцитов, хранившихся при 2 0 С.
3.2 Изучение функциональных и морфологических особенностей лейкоцитов в зависимости от срока экспозиции в условиях 2 0 С
3.3 Определение скорости образования продуктов перекисного окисления липидов в мембранах лимфоцитов, хранившихся при 2 0 С.
3.4 Влияние длительности хранения разработанного хладоограждающего раствора на его свойства.
3.5 Биологические особенности разработанного хладоограждающего раствора.
3.5.1 Испытание на острую токсичность разработанного хладоограждающего раствора.
3.5.2 Изучение хронической токсичности разработанного хладоограждающего раствора.
3.5.3 Определение пирогенности разработанного хладоо1раждающего раствора.
3.5.4 Изучение переносимости экспериментальными животными трансфузий аутологичных лейкоцитных концентратов, подвергнутых охлаждению до 2 О С в течение часов с разработанным хладоограждающим раствором
Глава IV. Обсуждение результатов экспериментальных исследований
Выводы.
Список использованной литературы


Ядерные клетки крови обладают сложной внутренней организацией, повышенными процессами метаболизма и являются весьма неустойчивыми к действию факторов холодового стресса Белоус А. М., Грищенко В. И., . Благодаря своему уникальному положению в системе неспецифической резистентности и иммунитета, а также наличию рецепторов к огромному числу биологически активных веществ нейтрофилы быстро реагируют на малейшие изменения постоянства окружающей среды. Резко изменяются их функциональные свойства, морфологические и биохимические характеристики, происходит модификация биоцидных и цитохимических функций Гребенюк А. Н. и соавт. Основное внимание исследователей направлено на выяснение механизмов перестроек биологических систем лейкоцитов, происходящих в условиях криоанабиоза различной глубины, но при околонулевых температурах 2 0 С особенности функционирования ядерных клеток крови не изучены. До настоящего времени метода их краткосрочного хранения в указанном диапазоне температур не существует. Исследования влияния околонулевых температур 2 ч 0 С на лейкоциты и их физиологические свойства расширят представления о механизмах повреждения ядерных клеток крови в цикле охлажденияотогрева и позволят создать простой, эффективный, безопасный метод сохранения ЛК. Холодовой анабиоз для хранения ЛК. Цель исследования определить функциональную активность лейкоцитов крови человека, перенесших охлаждение при околонулевых температурах от 2 до О С под защитой разработанного хладоограждающего раствора. Изучить жизнеспособность, функциональную активность и морфологический состав лейкоцитов, хранившихся в условиях околонулевых температур разные сроки. Установить оптимальную концентрацию ингредиентов хладоограждающего раствора путем сравнения влияния трех его вариантов на сохранение жизнеспособности и функциональной активности лейкоцитов крови человека. Оценить в опытах на животных острую и хроническую токсичность, пирогенность оптимального состава разработанного хладоограждающего раствора и установить переносимость переливания аутологичных Л К после их хранения с данным раствором в течение 1 суток при 2 О С крупными экспериментальными животными собаками. Научная новизна. Впервые установлена возможность сохранения на высоком уровне функциональной активности нейтрофилов, целостной плазматической мембраны лейкоцитов, стабильности их морфологического состава в условиях околонулевых температур 2 О С в течение 6 суток под защитой разработанного нетоксичного и не требующего отмывания хладоо1раждающего раствора. Предложен эффективный и широкодоступный метод краткосрочного хранения лейкоцитов при 2 г О С. Теоретическая и практическая значимость. Результаты работы расширяют представления о механизмах холодового повреждения и защиты лейкоцитов крови человека в условиях околонулсвых температур. Это создает предпосылки для разработки надежных и безопасных методов хранения лейкоцитов крови или других высокоспециализированных клеток. С учетом особенностей воздействия околонулевых температур 2 г О С на ядерные клетки крови предложен оригинальный хладоограждающий раствор патент РФ 7 от ноября г. В работе дано научное обоснование применения каждого из ингредиентов препарата. Под защитой данного хладоограждающего раствора удается сохранить на высоком уровне функциональную активность лейкоцитов в течение 6 суток, что в перспективе позволит решить трудности получения больших доз лейкоцитов. Результаты исследования представляют интерес для учреждений физиологического, медицинского и биологического профиля, специалистов криобиологов и сотрудников криобанков. Лейкоциты сохраняют физиологическую активность и морфологическую полноценность в течение 6 суток в условиях околонулевых температур 2 0 С под защитой разработанного хладоограждающего раствора. Хладошраждаюший раствор, содержащий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, сукцинат оксиметилэтилпиридина, желатиноль, глюкозу, цитрат натрия и воду для инъекций, является нетоксичным, апирогенным и хорошо переносится крупными экспериментальными животными собаками при аутологичных трансфузиях лейкоцитов, хранившихся в условиях околонулевых температур 2 0 С.