Функциональная характеристика генов slr1944 и slr1506 цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803

• Автор: Серебрийская, Татьяна Сауловна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Строение цианобактериальной клетки.

1.2. АЗОТНЫЙ КОНТРОЛЬ В ЦИАНОБАКТЕРИЯХ.

1.3. Строение и биогенез фотосистем цианобактерий

1.4. Методы исследований белков

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Бактериальные штаммы и условия культивирования

2.2. Плазмиды

2.3. Рестрикция, лигирование и модификация ДНК.

2.4. Трансформация клеток бактерий.
2.5. Выделение геномной ДНК и блотгибридизация по Саузерну
2.6. Выделение РНК и нозернблот анализ
2.7. Выделение и разделение белков.
2.8. Определение липазной активности i viv.
2.9. Определение липазной активности i vi
2 Приготовление липидных экстрактов
2 Тонкослойная хроматография.
2 Изучение влияния азотного голодания
2 Фотоинактивация
2 Электронная микроскопия
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Компьютерный анализ нуклеотидной последовательности гена
и гена .
3.2. Амплификация кодирующих последовательностей генов аШ4 и
6 ИЗ ГЕНОМНОЙ ДНК
3.3. Клонирование в экспрессионные векторы . i
3.4. Транскрипция в . i.
3.5. Анализ белков в полиакриламидном геле
3.6. Определение каталитической активности в штаммах . i,
ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ГЕНЫ И .
3.7. Влияние продуктов экспрессии генов и . на состав
липидной фракции в . i .
3.8. Определение характера транскрипции генов и в
i . РСС
3.9. Получение мутантов i с инактивированным геном
3 Физиологические характеристики штаммов
РСС .
3 Получение мутантов i . по гену
3 Физиологические характеристики штаммов
РСС
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Результаты реакции с кристаплвиолетом определяются, в основном, архитектурой пептидогликанового слоя. Эта удобная и широко используемая классификация к настоящему времени стала излишне упрощенной i . Цианобактерии это самая большая и разнообразная группа прокариотических организмов. Их попрежнему относят к граммотрицательным бактериям, хотя они имеют клеточную стенку с комбинацией признаков граммплюс и граммминус , i . Отличия от граммотрицательных бактерий можно увидеть как в структуре нептидогликанового слоя, так и в строении наружной мембраны. Пе1 ггидогл и каповый слой в цианобактериях значительно тоньше, чем в большинстве граммотрицательных бактерий. Степень кросссвязей между цепями пептидогликана выше на , что напоминает 1раммположительные бактерии. Кроме того, пептидогликан образует комплекс со специфическими полисахаридами, что характерно для граммположительных . i . С другой стороны, большинство пентанептидов, участвующих в кросссвязях, содержат мезодиаминопимелиновую кислоту типичную для граммотрицательных бактерий i . Клетки цианобактерий, как и многих граммотрицательных бактерий, покрыты липополисахаридной капсулой. антиген цианобактерий, являющийся частью капсулы, напоминает антиген ii i и так же отвечает за адсорбцию цианофагов или активность эндотоксина в водных условиях , i . i . При этом липополисахариды часто не содержат кетодиоксиоктаната наиболее общего компонента липополисахаридов граммотрицательных бактерий и содержат небольшое количество связанного фосфата, что не характерно для граммотрицательных бактерий i . . ii . ii . i . Наружная мембрана цианобактерий содержит компоненты, нехарактерные для граммотрицательных бактерий. К ним относятся А порины, заякоренные на пептидогликановом слое через мостикоподобные домены, и некоторые другие . i . . . i . Эти каротиноиды защищают цианобактериальные клетки от света высокой интенсивности, особенно в ультрафиолетовом диапазоне. Во многих видах, например , углеводородная оболочка содержит ароматические пигменты типа цитонемина или олигосахаридные микоспориновые аминокислоты i . Часто бактериальная клеточная оболочка покрыта дополнительным наружным слоем и углеводными структурами. слой представляет собой двумерную структуру, состоящую из гликопротеина, харакгерного для данного вида, и покрывает полностью поверхность клетки i . . Он представляет собой простейшую мембрану, развившуюся в ходе эволюции. Для слоя характерны регулярный размер и морфология пор . Функции слоя до конца не выяснены, но показано, что он служит как защитный покров, как ультрафильтрационная мембрана, а так же участвует в клеточной адгезии. слои были найдены более чем в видах цианобактерий i . . Многие цианобакгерии в ответ на изменения различных факгоров окружающей среды образуют разнообразные поверхностные угле водные структуры, которые иногда содержат пигменты. Некоторые углеводы легко секрстируются аналогично слизи, используемой для скольжения другие остаются плотно прикрепленными к клеточной стенке. Хотя структура и состав экзополисахаридов цианобакгерий мало изучены, в них были найдены целлюлозо и пектиноподобные углеводы, что подразумевает некоторое сходство с клеточной стенкой высших растений i . Транспортная функция клеточной стенки. Одна из основных функций клеточной оболочки это обеспечить поглощение питательных веществ и выделение метаболитов из клетки. В ходе эволюции цианобактерии, как и другие прокариоты, развили различные транспортные системы, обслуживающие эти процессы. Транспортные системы различаются по источникам энергии, используемой для транспорта, по механизмам и химической природой транспортируемого субстрата i .