Влияние редокс-агентов на тирозиновое фосфорилирование белков растений

• Автор: Петрова, Наталья Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 138 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Понятие редокссигналинга.

1.2. Активные формы кислорода

1.2.1. Пути образования АФК в клетках

1.2.2. Защита от АФК.

1.3. Редокссигналинг

1.3.1. Роль АФК в передаче сигнала.

1.3.2. Редоксрегуляция белков.
1.4. Тирозиноное фосфорилирование белков
1.4.1. Тирози новые протеин киназы.
1.4.2. Тирозиновые нротеинфосфатазы
1.5. Редоксрегуляция ферментов тирозинкиназного каскада
1.5.1. Киназы и фосфатазы в передаче рсдокссигнала
1.5.2. Редоксрегуляция тирозинфосфатаз
1.5.3. Редоксрегуляция тирозинкиназ.
1.6. Изучение тирозинового фосфорилирования в растениях.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Объекты исследования.
2.2. Условия культивирования
2.3. Определение тирозинового фосфорилирования белков.
2.3.1. Приготовление образцов
2.3.2. Одномерный электрофорез по методу ЕаеттП
2.3.3. Двумерный электрофорез
2.3.4. Метод полусухого блогирования Вестернблотинг.
2.3.5. Им му подоге кция тирозинового фосфорилирования белков
2.3.6. Детектирование хемилюминесцснции
2.3.7. Анализ данных, полученных с помощью методов одномерного и
двумерного электрофореза.
2.3.8. Метод конфокальной лазерной сканирующей микроскопии
2.4. Идентификация белков методом МАЬП1ТОР МБ
2.4.1. Трипсинолиз белкового образца.
2.4.2. Регистрация массспектров.
2.4.3. Идентификация белков
2.5. Определение специфичности использованных антител
2.6. Определение содержания 2 в клетках корней гороха
2.7. Определение митотической активности и хромосомных аберраций
2.7.1. риготовление цитогенетических препаратов
2.7.2. Вычисление митотического индекса и частоты аберраций
2.8. Определение количества белка в растворе по методу Бредфорд
2.9. Химические реактивы и материалы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выявление фосфотирозиновых белков корней гороха
3.2. Изменение содержания Н2 в корнях гороха при различных видах
стресса и действии экзогенных эффекторов.
3.3. Редоксрегуляция уровня тирозинового фосфорилирования белков
растений
3.4. Идентификация белков корней гороха, тирозиновое фосфорилировапие
которых контролируется рсдоксстатусом клетки.
3.5. Влияние Н2 и ДТГ на пролиферацию клеток растений .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Это приводит к тому, что белки, которые находятся во внеклеточных условиях, формируют дисульфидные мостики аминокислотными остатками цистсина. Таким образом создается способность сохранять ковалентные связи, которые стабилизирует структуру белка. i важно для внеклеточных белков, поскольку они постоянно подвергаются действию множества лротеаз, способных разрушать особенно легко белки со свободной конформацией. Остатки цистеина не вовлечены в формирование дисульфидных мостиков, если внутриклеточный окислительновосстановительный баланс не сдвинут в сторону окислительного стресса. Формирование дисульфидных мостиков способно привести к изменению конформации и активности белков, в том числе ферментов фосфорилировапиядефосфорилирования белков иротеинтирозинкиназ и протешггирозинфосфатаз. Условия внешней среды, включая свет, температуру, водный статус, засоление, влияют на редоксстатус растительной клетки. Редокссигиалинг используется у широкого круга организмов, чтобы индуцировать защитные ответы против окислительного повреждения и восстановить исходное состояние редоксгомсостаза после временного повышения уровня АФК. Растениям, как и другим аэробным организмам, кислород необходим для выработки энергии. Однако одним из неблагоприятных моментов жизни в аэробных условиях является образование активных форм кислорода, как побочных продуктов реакции восстановления до Н, если происходит неполное восстановление кислорода. При этом идет образование таких активных форм, как супероксид пероксид водорода Н2О2, и гидроксильный радикал НО. На начальном этапе цепь реакции нуждается в источнике энергии, тогда как последующие шаги являются экзотермическими и могут произойти спонтанно, как в ходе каталитической реакции, так и не каталитической. Эти молекулы и радикалы очень реакционны сами по себе, взаимодействуют со всеми биомолекулами. И всетаки их образование в малых количествах происходит в ходе нормального метаболизма клетки, и клетки избегают токсических эффектов благодаря антиоксидантным системам. Патологические состояния и окислительный стресс начинаются, когда накапливаются высокие концентрации пероксида водорода, превышающие возможности антиоксидантных систем. И при высоких концентрациях Н2 становится токсичным. В здоровой клетке уровень Н2 поддерживается на физиологически допустимом уровне. Тем нс менее, во многих публикациях Н2 называется нежелательным продуктом аэробного метаболизма и упоминается исключительно в контексте деструктивной активной формы кислорода, повреждающей биоструктуры и участвующей в патогенезе ряда заболеваний. Однако, в последние годы появились убедительные свидетельства в пользу участия Н2 в регуляции различных процессов, необходимых для нормального функционирования здоровой клетки, таких как клеточный рост, дифференцировка. , . В дыхательной цепи митохондрий в аэробных клетках, кроме полного четырехэлектронного восстановления молекулы до воды, всегда происходит и неполное однотрехэлектронное восстановление с последовательным образованием различных АФК. В основном состоянии триплетный молекулярный кислород является радикалом с двумя внешними валентными электронами, занимающими отдельные орбитали, с параллельными спинами. Чтобы окислить нерадикальный атом или молекулу, триплетный кислород должен прореагировать с партнером, у которого есть пара электронов с параллельными спинами, которые заполнят его свободные электронные орбитали, но нары электронов, как правило, имеют противоположно направленные спины, и это налагает ограничения на реакцию триплстного молекулярного кислорода с большинством органических молекул . i. Однако кислород из основного триплстного состояния может быть превращен в гораздо более реакционноспособные активные формы кислорода либо в процессе переноса энергии, либо в ходе реакций транспорта электронов. Первое ведет к образованию синглетного кислорода, в то время как второе приводит к последовательному восстановлению до супероксида, пероксида водорода и гидроксилрадикапа , . о 8 О2 о Схема 1. Генерация разных активных форм кислорода в ходе переноса энергии по .