Цитоскелет-связанные полисомы как мишень физиологической регуляции

• Автор: Ерохина, Мария Александровна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общие представления о цитоскелете и цитоскелет растений

2.2. Взаимодействие компонентов белоксинтезирующей системы с цитоскелетом

2.2.1. мРНК.

2.2.2. Рибосомы и полисомы

2.2.3. Факторы белкового синтеза

2.2.4. Цитоскелет и трансляция

2.3. Белкипосредники во взаимодействии белоксинтезирующей системы с цитоскелетом

2.4. Влияние фитогормонов и освещения на цитоскелет растений.
3. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Растительный материал и постановка физиологических опытов.
3.1.1. Опыты с семядолями и проростками тыквы.
3.1.2. Опыты с листьями бобов.
3.2. Выделение и фракционирование полисом
3.2.1. Фракционирование гомогената ткани в градиенте концентрации сахарозы и определение доли ЦСП.
3.2.2. Дифференциальное центрифугирование гомогената ткани
3.3. Электрофорез белков в ПААГ
3.4. Вестернблоттинг и иммунологическая идентификация белков.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Физиологическая регуляция доли цитоскелетсвязанных
полисом.
4.1.1. Оценка доли цитоскелетсвязанных полисом.
4.1.2. Влияние возраста проростков на долю цитоскелетсвязанных полисом
4.1.3. Влияние фитогормонов на долю цитоскелетсвязанных полисом
4.1.4. Влияние освещения на долю цитоскелетсвязанных полисом
4.1.5. Влияние циклогексимида и охлаждения на долю цитоскелетсвязанных полисом.
4.2. Влияние света и фитогормонов на общее содержание актина в тканях.
4.2.1. Влияние интенсивности освещения на содержание актина в листьях бобов
4.2.2. Влияние интенсивности освещения и цитокинина на
содержание актина в изолированных семядолях тыквы.
4.3. Белковый состав субпопуляций полисом
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В системе изолированных семядолей тыквы чувствительных к действию цитокининов и АБК, для которой хорошо изучено влияние этих фитогормонов на трансляцию Кулаева, , провести количественную оценку доли ЦСП. Исследовать влияние других факторов возраст проростков, освещение на долю ЦСП в семядолях тыквы. Исследовать влияние низких концентраций циклогексимида, вызывающих сборку полисом вследствие подавления элонгации белкового синтеза, на долю ЦСП с целью выяснить, коррелирует ли эта доля с интенсивностью трансляции или с процессом сборки полисом. Провести сравнительный анализ полипептидного состава различных субпопуляций полисом с целью поиска белков возможных посредников во взаимодействии полисом и цитоскелета. С использованием моноклональных антиактиновых антител исследовать влияние света и цитокинина на содержание актина в исследуемых тканях. Выяснение закономерностей варьирования доли ЦСП, коррелирующей с интенсивностью белкового синтеза в клетках растений, существенно для понимания механизмов посттранскрипционной регуляции трансляции. Приводимый в данном разделе материал является общеизвестным, но как нам кажется, необходимым в качестве вступления для понимания более частных вопросов, затронутых в диссертации. При его написании мы использовали многочисленные обзоры vi с соавт. Васильев, i, , , i, , Туркина, Соколов, . Мы пытались поставить ударение на данных, полученных для растительных объектов. Часть этих данных, имеющих более близкое отношению к экспериментальному материалу диссертации, будут рассмотрены в последующих разделах обзора литературы. Цитоскелет это сеть специфических белковых полимеров, которые пронизывают цитозоль и определяют архитектуру клетки и активность многих физиологических процессов. Цитоскелет представлен тремя видами структур. Это микрофиламенты, микротрубочки и промежуточные филаменты. Они различаются, вопервых, по толщине. Так, микрофиламенты имеют диаметр около 8 нм, микротрубочки нм, а промежуточные филаменты нечто среднее, порядка нм. Вышеназванные структуры отличаются и по белковому составу. Микрофиламенты состоят из актина мономеры актина упакованы в плотную спираль, на один оборот которой приходится приблизительно два мономера актина Такое устройство создает видимость спирали из двух цепочек актина, но это не так, поскольку одиночная актиновая цепь сама по себе не существует. Промежуточные филаменты состоят из различных белков, характерных для определенного вида ткани кератина в эпителиальных клетках, виментина в фибробластах, ламина в ядерном матриксе, нейрофиламентных белков в нервной ткани. Они состоят из мономеров, соединенных в тетрамеры, которые в итоге собираются в филаменты, имеющие вид палочек. Промежуточные филаменты выполняют в клетке опорную функцию, придают ей специфическую форму. В растительных клетках присутствуют микротрубочки и микрофиламенты, а вопрос о наличии промежуточных филаментов окончательно не решен. Пока показано существование белков, гомологичных ядерным ламинам. В некоторых случаях наблюдали наличие филамснтных структур, состоящих из белков, иммунологически родственных белкам промежуточных филаментов животных, но пока не известна идентичность их функций. Было показано, что в клетках растений эти филаменты колокализованы с микротрубочками. Раньше считалось догмой, что цитоскелет присутствует только в клетках эукариот. Однако недавно в клетках бактерий был найден белок, напоминающий тубулин по своей структуре. Несколько лет назад были найдены два подобных белка, кодируемых в ядре растения и импортируемых в хлоропласты, где они формируют филаментные структуры, поддерживающие целостность пластид и важных для их деления КэНг с соавт. Описанные цитоскелетные структуры характеризуются высокой динамичностью. Это только раньше считали, что цитоскелет это чтото жесткое и неизменное. Микрофиламенты, как и микротрубочки, непрерывно разбираются и достраиваются на обоих концах филамента. Причем концы эти не одинаковые. Их называют плюс и минусконцами, но такие названия не имеют отношения к их заряду. Они различаются по скорости сборкиразборки.