Влияние факторов адгезии на морфофункциональные характеристики эмбриональных клеток моллюсков и иглокожих в культуре

• Автор: Коптяева (Ермак), Анна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 150 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. Актуальность проблемы.

2. Цель и задачи исследования

3. Научная новизна.

4. Теоретическая и практическая значимость работы

5. Апробация работы

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Необходимые условия культивирования

1.1.1. Источ ники клеток.

1Л .2. Тканевая дезагрегация.
1.1.3. Питательная среда.
1.1.4. Специфические стимуляторы клеточного деления
1.1.5. Субстрат и клеточная адгезия
1.2. Дифференцировка клеток в культуре
1.2.1. Лигандрецепторные комплексы
1.2.2. Роль цитоскелета в клеточном ответе.
1.3. .Морфогенетические реакции дифференцированных клеток.
1.4. Неопластическая трансформация
1.5. Углеводсвязывающие белки пектины.
Заключение
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.2.Клеточные культуры
2.3. Приготовление субстратов.
2.4. Количественное определение нуклеиновых кислот
2.5. Сцннтилляционныс методы оценки ДНК и РНК синтезирующей активности клеток по измерению включения 3Н тимпанна и 3Н уриднна
2.6. Метод авторадиографии
2.7. Сканирующая электронная микроскопия
2.8. Флуоресцентная микроскопия.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Клеточная адгезия
3.2. Селекция клеточных типов.
3.3. Морфологические изменения клеток.
3.3.1. Световая микроскопия
3.3.2. Сканирующая электронная микроскопия.
3.4. Синтезирующая активность клеток
3.4.1. Включение 3Нтимидина.
3.4.2. Авторадиография.
3.4.3. Включение 3Нуридина
3.5. Взаимодействие лектина ШЪ с эмбриональными клетками
4. ОБСУЖДЕНИЕ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


i, , ii, i, ii, , ii , взаимодействий клеткаклетка, клеткасубстрат , i, , , изучение цитоскелстных компонентов и их специфических функций, а также защитных свойств морских организмов Коренбаум, Исаева, . О первых попытках культивирования клеток морских беспозвоночных еще в е годы сообщается в ряде обзоров , , , , однако значительных достижений, как при культивировании клеток растений, насекомых и млекопитающих, в этой области до сих пор не достигнуто. Это объясняется рядом трудностей, связанных непосредственно с морскими организмами и их средой обитания, а также с выбором оптимальных условий культивирования. Вместе с тем, интерес исследователей к этой теме не угасал и, благодаря длительной работе, позволил добиться ощутимых результатов за последнее десятилетие. . К сожалению, до настоящего времени не получено ни одной постоянной клеточной линии морских моллюсков или иглокожих. Все попытки исследователей ограничиваются пока культурами с разными сроками культивирования, от нескольких часов i, . x . . iv, , ivi, ii, . Обнадеживающими представляются результаты о значительном увеличении числа клеток , i, и появлении митозов в первичных клеточных культурах моллюсков iv, , i . Особым достижением клеточного культивирования еще в начале нашего столетия являлся подбор подходящих условий культивирования ,при которых клетки могут двигаться и переживать в условиях i vi , , . Однако, современная оценка задач клеточного культивирования требует создания оптимальных условий не только для выживания клеток, но и для их роста. Потребности каждого отдельного объекта должны быть определены в результате специальных исследований. Необходимые условия культивирования. Для успешного культивирования каждого нового типа клеток необходимо решить целый ряд проблем, каждая из которых представляет собой отдельную трудоемкую задачу выбор источника материала и способ дезагрегации ткани, разработка оптимальных питательных сред и ростовых добавок, подбор субстратов и друга х условий культивирования. Немаловажной остается проблема бактериального и грибкового заражения. Именно е решение позволило получить ряд постоянных клеточных линий в результате культивирования клеток насекомых Колокольцева и др. i . ivi, i, ivi, ii, . Так, например, Бревстер и Никольсон сообщают о клеточной линии, полученной ими из эмбрионов американской устрицы , i, . Авторы описывают быстрое увеличение количества клеток в течение первых 7 дней, хотя клетки на стадии митоза обнаружены не были. Их эксперимент столкнулся с проблемой заражения микроорганизмами, что и привело к быстрой гибели клеточных культур. Выбор источника материала для будущей первичной клеточной культуры является одним из основных факторов, определяющих успех исследования. Так, совсем недавно двумя независимыми руинами израильских и японских исследователей получены постоянные клеточные линии из аецндии и iii ivi, ii, , i, . В качестве источника потенциально делящихся клеток ими были выбраны ткани почкующихся животных и эмбрионы на разных стадиях развития. Часто при получении первичных культур клеток морских беспозвоночных в качестве эксплантантов используют маленькие кусочки целого животного или его тканей x . . i, i, i . Наиболее часто экспериментаторы используют клетки сердца моллюсков, как наиболее чистого органа получены клеточные культуры и первичная клеточная линия из сердечных клеток двустворчатых моллюсков . i . ivi, i, , ivi, ii, и гемоциты моллюсков Исаева, Подгорная, Дзюба, жаберные клетки x . Коренбаум, .