Экспериментально-эмбриологическое исследование раннего развития вьюна: совершенствование метода получения генетически идентичных зародышей

• Автор: Слепцова, Людмила Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 225 c. : ил

1. Активация, оплодотворение и раннее дробление вьюна

при нормальном развитии

2. Развитие зародышей после пересадки ядер в неоплодотворенные искусственно активированные яйцеклетки

I Пересадки ядер в яйцеклетки через мин после

начала активации

2 Пересадка ядер в яйцеклетки через 4 мин после

начала активации

3 0 причинах аномалий и остановки развития экспериментальных зародышей .

3. Проверка эффективности инактивации ядра яйцеклеток

вьюна рентгеном

4. Определение содержания ДНК в ядрах клеток зародышей

вьюна в норме и в опытах с трансплантацией ядер .
5. Опыты по пересадке ядер зародышевых клеток вьюна
при оптимальных условиях операции .
6. Пересадка в яйцеклетки ядер клеток зародышей разных стадий развития
Глава 1У. Обсуждение результатов
1. Пересадка ядер как способ изучения закономерностей клеточной дифференцировки и возможная основа метода получения генетически идентичных зародышей .
2. Пересадка ядер как способ исследования взаимодействий клеточных компонентов в раннем эмбриогенезе .
3. Общее заключение. Значение метода пересадки ядер для понимания общих закономерностей клеточной дифференцировки в развитии костистых рыб. Пересадка ядер как модель внутриклеточных взаимодействий.
Перспективы клонирования костистых рыб .
Выводы
Список цитированной литературы


Иными словами, сохраняют ли ядра растущего или взрослого организма способность обеспечивать нормальное развитие при помещении их в цитоплазму яйцеклеткиреципиента и, таким образом, полноценно заменять собой ядро зиготы. После удачных опытов по трансплантация ядер клеток бластулы и последовавшего затем вывода об их тотияотентности ученые перешли к исследованию потенций ядер
клеток зародышей более позних стадий развития i, i , i, i , . Если в качестве доноров ядер использовали клетки энтодермы поздней гаструлы, процент дробления и образования бластул из яицреципиентов оставался почти таким же около 4, как и при пересадке ядер клеток поздней бластулы. Однако дальнейшее развитие экспериментальных бластул сопровождалось различными аномалиями, остановкой развития при переходе к гаструляции, гибелью на последующих стадиях. Лишь небольшое количество зародышей а достигало стадии личинки i, i . С увеличением возраста зародышейдоноров количество ядер, способных поддерживать нормальное развитие, прогрессивно уменьшалось, и на стадии хвостовой почки таких ядер почти не оставалось i, i . При использовании в качестве доно
ров ядер клеток различных закладок на стадии хвостовой почки оказалось возможным получить лишь около личинок из ядер энтодермальных клеток . Ядра клеток энтодермы ii ст. Щумвею только в 7 случаев поддерживали развитие до стадии бластулы ни один экспериментальный зародыш не достиг личиночной стадии i. Ядра клеток других закладок, таких, как хордомезодерма i, i . Такое явление было обнаружено всеми исследователями, которые использовали метод трансплантации ядер, для всех объектов. У аксолотля, например, количество ядер, способных поддерживать нормальное развитие, изменяется с повышением степени дифференцировки даже в пределах одной закладки i i. Ограничение потенций ядер хорошо прослежено на X Ivi . Ясно, что методом трансплантации ядер трудно обнаружить все реально существующие в отдельном эмбрионе отдельной закладке, отдельном органе тотяпотентные ядра, но очевидно и то, что с увеличением возраста эмбриона такие ядра становятся все большим и большим исключением. И хотя ядра сохраняют довольно долго свою полипотентность способность к формированию различных закладок, количество аномально развивающихся зародышей неуклонно возрастает. В чем же кроются причин ограничения потенций ядер При первом рассмотрении этого явления можно назвать по крайней мере две причины. Одна из них увеличение технических трудностей, связанных с процессом трансплантации. Клетки зародышей поздних стадий мелкие, более хрупкие, труднее поддаются диссоциации. Слой цитоплазмы, защищающей ядро, очень мал и, таким образом, повышается
возможность повреждения ядер при самой операции пересадки. Однако было отменено, например, что энтодермальные клетки нейрулы пли хвостовой почки по размерам, ядерноплазменному отношений и легкости их диссоциации не отличаются от клеток аншлального полушария ранней гаструлы, а способность побуждать нормальное развитие у первых выражена намного хуже i, i , i , i , , . В таком случае причина неуспеха, очевидно, кроется в особенностях самого ядра, то есть ядра дифференцирующихся клеток приобретают в ходе развития определенные изменения, не позволяющие игл сохранять тотипотентность, причем изменения эти, повидимому, могут быть структурными и или функциональными. Так, например, при изучении ультраструктуры эмбриональных клеток X было обнаружено, что на стадии гаструлы в центральных участках ядер впервые обнаруживается гетерохроматин. Авторы полагают, что гетерохроматинизация связана с началом активности собственного генома, блокированного до этого негистоновыми белками. И не исключено, что именно эта активность собственного генома может мешать репрограммированию ядер в опытах с трансплантацией. К сожалению, мы не располагаем данными литературы, позволяющими провести четкую корреляцию между какимилибо структурными морфологическими особенностями ядер дифференцирующихся или дифференцированных клеток ядерной оболочки, нуклеоплазмы и т. Однако снижение способности поддерживать развитие не обязательно является следствием изменения генов пересаженных ядер.