Репродукция и дифференцировка клеток двустворчатых моллюсков и иглокожих in vitro

• Автор: Одинцова, Нэлия Адольфовна
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 240 с. : ил.

От них погибает в течение двух недель около культур, полученных из личиночного материала , i, . Только клеточных культур, полученных из мантии, и около культур, полученных из сердечной ткани, были свободны от простейших, грибов или бактерий i . Асептические культуры фрагментов жабр моллюсков, жизнеспособные в течение месяца, можно получить, используя умеренные концентрации антибиотиков с серотонином. Серотонин расслабляет мускулатуру жабр, и антибиотики получают доступ к местам скоплений микроорганизмов i . Клетки, вводимые в культуру, должны быть получены из чистой ткани. Дезинфицирующие агенты, такие как этанол, перекись водорода или гипохлорит, неприемлемы для яйцеклеток и личинок моллюсков и иглокожих, которые очень чувствительны к таким воздействиям. Однако обработка яиц креветок растворами иодофора и малахитового зеленого дает возможность получать суспензию жизнеспособных клеток, свободных от многих видов микроорганизмов i, . Тем не менее через недели часть этих культур погибала от контаминации. К настоящему времени большинство исследователей для уменьшения риска контаминации клеточных кулмур используют только тщательную подготовку самих животных. Некоторые популяции клеток целомической жидкости иглокожих обладают антибактериальной активностью , , . После инкубации целомической жидкости морских ежей и голотурий с видами различных морских бактерий оказалось, что фагоцитированы были только грамположительные бактерии. Ни один из видов грамотрицательных бактерий не был фагоцитирован , , , . Повидимому, поэтому в культурах иглокожих наиболее часто появляются грамотрицательные морские бактерии. Несколько позже было обнаружено, что антибактериальная акгивность целомической жидкости связана с наличием лизоцимлодобных молекул у амебоцитов i . В клеточных культурах моллюсков также часто появляются фикомицеты и нитчатые грибы родов i и iii i, i, . Рост фикомицегных 1рибов ингибируется при световой экспозиции , . Иногда в культурах моллюсков появляются дрожжевые формы грибов, которые принадлежат семейству готу рода , , . Через недели после инициации клеточных ку льтур в лунках могут появиться клетки гетеротрофных протистов, принадлежащих семейству i , , . Эта группа морских эукариотических микроорганизмов рода i была обнаружена во многих клеточных культурах морских беспозвоночных, таких как двустворчатые и брюхоногие моллюски i, i, . I . Траустохитриды встречаются и в живых губках, как симбионты , , . Введение к культурам клеток противогрибковых агентов, таких как нистатин или амфотерицин, не дает никакого эффекта . Несмотря на многие неудачи, связанные с получением постоянных клеточных линий из тканей моллюсков, иглокожих и ракообразных, ведется интенсивный поиск оптимальных условий жизнедеятельности этих клеток i vi. Отсутствие подходящей питательной среды и особенно веществ, поддерживающих рост этих клеток, значительно осложняет работу с такими культурами. Бурч и Гуадрос , , предприняли попытку создания среды для клеток морских моллюсков, однако, и сейчас в большинстве случаев клетки моллюсков и других морских беспозвоночных культивируют в трех основных средах, разработанных для клеток млекопитающих, но доукомплектованных солями среде 2 х 9 i . Игла в модификации Дульбекко i, ivi, ii, , i, i . Лейбовича . Рядом исследователей был проведен скрининг различных сред, разработанных ранее для клеток млекопитающих или насекомых , i, . При приготовлении среды ее осмотичность обычно уравнивают с осмотичностыо морской воды или гемолимфы, так как в природе большинство морских беспозвоночных существует как осмоконформеры. Однако при сходстве состава морской воды с таковым целомической жидкости иглокожих или гемолимфы моллюсков, последние слегка отличаются соленостью и большей кислотностью i, . Например, в голотурии i i соленость и целомической жидкости были 0 и 7. Xi, . Осмотичность гемолимфы морских моллюсков и ракообразных в значительной мере определяется высокой концентрацией сахаров и аминокислот. Среди этих соединений надо отметить присутствие высоко специфичных именно для тканей беспозвоночных трегалозы и таурина , , .