Генерация активированных кислородных метаболитов и антиоксидантные ферменты в гемолимфе насекомых отряда Lepidoptera при бактериозах, вызываемых бактериями Bacillus thuringiensis

• Автор: Хвощевская, Марина Федоровна
• Шифр специальности: 03.00.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 103 с. : ил

Оглавление
Введение

Глава 1. Литературный обзор.

1.1. Классификация гемоцитов

1.2. Фагоцитоз.

1.3. Инкапсуляция и гранулообразование.

1.4. Меланизация капсулы.

1.5. Образование активированных кислородных метаболитов в

гемоцитах

1.5.1. Строение и свойства АКМ.

1.5.2. Химические свойства АКМ.

1.5.3. Источники АКМ в организме.
1.6. Регуляция цитотоксических механизмов
1.7. Изменения гемоцитов при патогенезе
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Исследуемые насекомые.
2.2. Заражение насекомых.
2.3. Сбор гемолимфы и получение гемоцитов
2.4. Определение ферментативной активности в гемоцитах.
2.5. Определение продукции активированных кислородных
метаболитов в гемоцитах
2.6. Ингибиторы.
2.7. Определение влияния СОД на восстановление НСТ в супернатанте разрушенных гемоцитов.
2.8. Определение активности СОД в гемоцитах и лимфе
2.9. Определение активности ФО в лимфе.
Глава 3. Продукция активированных кислородных метаболитов в гемоцитах
насекомых отряда i
3.1. Люминолзависимая хемилюминесценция
3.2. Метод восстановления нитросинего тетразолия
3.2.1. Восстановление НСТ в гемоцитах насекомых отряда i
3.2.2. Влияние активаторов фагоцитоза на восстановление НСТ в гемоцитах насекомых отряда i .
3.2.3. Влияние ингибиторов на восстановление НСТ в гемоцитах насекомых представителей отряда i
ГЛАВА 4. Ферментативная активность в гемоцитах насекомых
4.1. Фенолоксидаза.
4.2. Пероксидаза.
ГЛАВА 5. Изменение продукции АКМ и антиоксидантов в гемоцитах и
лимфе при бактериозах
5.1 Изменение продукции АКМ и антиоксидантов в гемоцитах и
лимфе при инъекции бактерий в гемоцель насекомых
5.2. Изменение продукции АКМ и антиоксидантов в гемоцитах и лимфе . в течение бактериоза.
Заключение
Выводы.
Список литературы


Изучить фенолоксидазную активность в гемоцитах и лимфе у нативных насекомых и при бактериозах. Изучить характер распределения пероксидазы и суиероксиддисмутазы в гемоцитах и лимфе у нативных насекомых и при бактериозах. Научная новизна. Впервые при исследовании генерации кислородных радикалов в гемоцитах насекомых представителей отряда i выявлено, что активация продукции АКМ происходит в результате адгезии гемоцитов и в процессе фагоцитоза. Продукция АКМ в гемоцитах осуществляется в результате деятельности ферментов дыхательной цепи и каскада реакций меланогенеза. Установлено, что характер изменений в продукции АКМ и активности СОД зависит от способа заражения. В частности, при инъецировании бактерий в гемоцель насекомого происходит активация гемоцитов за счет увеличения продукции АКМ, этот процесс сопровождается снижением активности супероксиддисмутазы. При пероральном заражении насекомых бактериями происходит угнетение продукции АКМ в гемолимфе и повышение активности супероксиддисмутазы. Научнопрактическая ценность. Разработаны подходы для оценки состояния клеточного иммунитета как интегральной характеристики состояния организма насекомого. Данная оценка может позволить проводить прогноз динамики численности насекомых в природных популяциях, что может явиться составной частью интегрированных методов регуляции и контроля численности насекомых вредителей леса и сельского хозяйства. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на Всероссийской конференции Беспозвоночные животные Южного Зауралья и сопредельных территории Курган, март , на VI Европейском энтомологическом конгрессе Чехия, август , на Международном симпозиуме Сохранение и защита горных лесов Ош, октябрь , на отчетных сессиях ИСиЭЖ СО РАН апрель, , . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 3 страницах машинописного текста состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована рисунками и 1 таблицей. Список литературы включает 4 работы, из них 6 на иностранных языках. Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность к. В.В. Глупову за руководство научной работой, к. Л.И. Бурцевой за представленные штаммы i iii, И. М. Дубовскому, В. В. Мартемьянову и Я. Л. Лозинской за помощь в выполнении исследований, д. М.П. Мошкину и к. С.А. Бахвалову за обсуждение рукописи и ценные критические замечания, к. Ю.Я. Соколовой за помощи при проведении электронной микроскопии. Глава 1. Гемоциты являются свободно циркулирующими клетками лимфы, которые выполняют разнообразные функции от транспорта различных веществ до участия в регенерационных процессах и формировании иммунного ответа i . i . i, i, , . Это обусловливает гетерогенность популяции гемоцитов насекомых как по морфологическим, так и по функциональным критериям. Кроме того, гетерогенность популяции гемоцитов связана с тем, что процессы их деления и дифференциации проходят в гемолимфе, поэтому в определенный промежуток времени можно зафиксировать клетки одного типа на разных стадиях развития. Соответственно степень гетерогенности популяции гемоцитов зависит от принадлежности насекомого к той или иной таксономической группе, его возраста, стадии развития и физиологического состояния организма , ii, ii, . i, . В настоящее время существует большое количество классификаций, в которых гемоциты объединяются авторами в различные типы до названий. В основном исследователи объединяют гемоциты в 57 основных типов клеток прогемоциты, илазматоциты, гранулоциты, сферулоциты, эноцитоиды , i . , i, , , i, . При рассмотрении любой классификации можно обнаружить сходные типы гемоцитов, отличия в основном касаются терминологии или присутствия в гемолимфе насекомых высокоспециализированных клеток хромоциты, кристаллические клетки, подоциты и т. Запольских, , i .