Экспресс-детекция и выявление генов факторов патогенности бактериальных возбудителей острых кишечных инфекций

• Автор: Орлова, Клавдия Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика бактерий возбудителей острых кишечных инфекций

1.2. Факторы патогенности бактериальных возбудителей острых кишечных инфекций и их генетическая детерминация.

1.3. Молекулярнобиологические методы идентификации

бактериальных возбудителей ОКИ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Методы взятия и транспортировки проб

2.2. Методики выделения ДНК в процессе подготовки к проведению

2.3. Проведение ПЦРамплификации фрагментов генома энтеробактерий.
2.4. Регистрация результатов.
2.5. Учет результатов
2.6. Анализ плазмидного состава энтеробактерий.
2.7. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение.
3. 1. Разработка ПЦР тестсистемы для экспрессдетекции шигелл и энтероинвазивных эшерихий
3.2. Апробация и оптимизация к проведению практических исследований экспериментальных вариантов ПЦР тестсистем для детекции бактериальных возбудителей ОКИ сальмонелл,
кампилобактеров, йерсиний
3.3. Изучение распространенности генов факторов патогенности бактериальных возбудителей ОКИ с использованием метода ПЦР
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научнопрактической конференции Генодиагностика инфекционных заболеваний Н. Новгород , на научнопрактической конференции, посвященной 0летию со дня рождения Елкина И. И. Актуальные проблемы эпидемиологии инфекционных болезней Н. Новгород, , на заседании Ученого совета и межлабораторного семинара Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. РАМН И. Н. Блохиной. ГЛАВА 1. Наиболее часто ОКИ вызываются бактериями семейства i. Несмотря на то, что энтеробактерии являются одними из наиболее изученных микроорганизмов, научный и практический интерес к ним остается попрежнему высоким. При различных состояниях, сопровождающихся ослаблением резистентности организма, энтеробактерии могут составлять до клинических изолятов всех грамотрицательных бактерий и вызывать до всех случаев септицемий, до всех случаев гастроэнтеритов и более инфекций мочевыводящих путей Покровский В. И. , Бухарин О. В. , Воробьев . . . Семейство i представляет собой сравнительно четко очерченную таксономическую группу, включающую грамотрицательные нефотосинтезирующие, факультативно анаэробные, палочковидные бактерии. Все родов семейства i, описанных в руководстве Берги , охватывают диапазон по содержанию ГЦпар в ДНК от до , А ГЦ. На рисунке 1 показаны уровни геномного родства отдельных родов семейства i. Рис. Уровни геномного родства отдельных родов семейства i с типовым родом этого семейства ii Блохина И. Н. и др. ДНК между родами в , рассчитанные по результатам молекулярной гибридизации ДНК ДНК при оптимальных условиях эксперимента Блохина И. Н. и др. Эшерихии и шигеллы по строению генома могут рассматриваться как один вид 0 гомологии ДНК. Определитель бактерий Берги относит эшерихии и шигеллы к одному геновиду. В работе . . . . . РНК эшерихий и шигелл было показано, что 4 вида шигелл . . ii, . . xi формируют единый кластер с эшерихиями. Это подтверждает ранние высказывания о том, что 4 вида шигелл и Е. Род ii признан типовым родом семейства i. Род включает 4 вида Е. Е. ii, Е. Е. vi. Типовой вид Е. Установлено, что для патогенных сероваров кишечных палочек характерна колициногения, т. Покровский В. И., ,. Какиелибо морфологические различия между патогенными и непатогенными Е. Их дифференцируют по структуре поверхностных антигенов липополисахаридных О, жгутиковых Н и капсульных полисахаридных КАг. Варианты антигенов обозначают арабскими цифрами. На практике обычно используют соотношение ОН типирование по ОАг ведущее. В настоящее время выделено 3 О и Нсеротипов. Эшерихиоз острая антропонозная кишечная инфекция, вызываемая диареегенными . Ющук Н. Д., . Диареегенные Е. ЕТЕС, энтероинвазивные I, энтеропатогенные ЕРЕС, энтерогеморрагические ЕНЕС, энтероадгезивные ЕАЕС Бондаренко В. М.,, Покровский В. И. и др. . . . Шигеллы кишечные патогены человека и приматов в различных странах бактериальная дизентерия или шигеллез составляет до всех кишечных инфекций. По сравнению с прочими кишечными бактериями шигеллы биохимически практически инертны. Все шигеллы не образуют сероводород на агаре Криглера, трехсахарножелезном агаре и агаре с ацетатом свинца. Эти характеристики могут служить косвенными признаками принадлежности выделенной культуры к роду i Покровский В. И. и др. Антигенный комплекс шигелл включает 2 термостабильных Аг типовые и групповые и термолабильные Аг. Термолабильные Аг включают КАг, сходный с КАг у эшерихий обнаружены у всех шигелл исключая шигеллы Флекснера и Зонне эти антигены способны маскировать ОАг и вызывать Оинагглютинабсльность. Менее изучены термолабильные фимбриальные Аг, у . . Флекснера, а также широкое распространение АТ к . Покровский В. И. . В соответствии с антигенной структурой ОАг и биохимическими свойствами, известных серотипов шигелл разделяют на 4 вида . , . В, . С и . .