Молекулярно-генетическая характеристика штаммов Mycobacterium tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью

• Автор: Желткова, Екатерина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 109 с. : 22 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Страница

Перечень условных обозначений

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Механизмы возникновения лекарственной устойчивости i i к основным противотуберкулезным препаратам

1.1. изониазиду

1.2. рифамлицину

1.3. этамбутолу

1.4. пиразинамиду

1.5. фторхинолонам

1.6. стрептомицину и другим ингибиторам синтеза протеаз Глава 2. Проблемы в установлении лекарственной чувствительности i i и роль молекулярногенетических методов Собственные исследования
Глава 3. Материалы и методы
3.1. Штаммы .i МВТ
3.2 Определение лекарственной чувствительноеги МВТ к изониазиду
и рифампицину бактериологическим методом
3.3. Определение лекарственной чувствительности к рифампицину и изониазиду молекулярно генетическими методами
3.4.Методы молекулярногенетического типирования штаммов МВТ
3.4.1. Сполиготипирование
3.4.2.Vii
3.4.3. типирование
3.5. Статистическая обработка полученных результатов
Глава 4. Изучение лекарственной чувствительности к рифампицину и изониазиду штаммов МВТ
Глава 5. Сполиготипирование штаммов МВТ по числу спейсерных последовательностей БЯлокуса
Глава 6. Типирование штаммов МВТ по вариабельному числу точных тандемных повторов
Глава 7. Генотипирование штаммов МВТ по ИРЫ
Глава 8. Заключение и обсуждение полученных результатов. Молекулярногенетическое типирование штаммов МВТ с МЛУ.
Выводы
Список литературы


Материалы диссертации используются при чтении цикла лекций аспирантам и ординаторам ГУ ЦНИИТ РАМН, а также на курсах усовершенствования враченлаборангов бактериологических лабораторий из различных регионов России. Апробация работы, публикации. Работа апробирована на совместном заседании отдела микробиологии и иммунологии ГУ ЦНИИТ РАМН г. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения и обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 1 странице машинописного текста, иллюстрирована рисунками и таблицами. Список литературы содержит отечественных и 7 зарубежных источников. Обзор литературы. Глава 1. По рекомендациям ВОЗ туберкулез начинают лечить с 2месячного курса, используя несколько ПТП рифампицин, изониазид, пиразинамид, и этамбутол или стрептомицин . Эта схема лечения направлена на то, чтобы нс появились мутантные формы МВТ, устойчивые к какомулибо препарату. Следующие 4 месяца проводят терапию только рифампицином и изониазидом для того, чтобы элиминировать персистирующие микобактерии. Рифампицин и изониазид, два наиболее мощных ПТП, убивают более бацилл ТБ в течение 2 месяцев с начала лечения ,0. Рядом с этими двумя лекарствами пиразинамид с более высоким стерилизующим эффектом применяют для воздействия на дормантные формы, на которые не действуют другие ПТП . Комбинированное применение этих лекарств уменьшает время противотуберкулезной терапии с месяцев до 6 месяцев 2. Появление штаммов, резистентных к какомулибо из этих препаратов, должно настораживать в отношении появления МБТ с МЛУ. Общепринято, что МБТ с МЛУ это штаммы МБТ, устойчивые одновременно как минимум к рифампицину и изониазиду с или без устойчивости к другим ПТП 3. Монотерапия ТБ является важным фактором в развитии ЛУ , так как существует концепция, что в организме присутствуют различные популяции МБТ ,,,1. Каждый из ПТП направлен на уничтожение определенной популяции МБТ. Например, изониазид, главным образом, действует против МБТ, находящихся в аэробных условиях в легочных полостях ,, пиразинамид активен только при низких , становясь идеальным препаратом, убивающим МБТ внутри казеозных некротических очагов . Рифампицин действует против МБТ со сниженным метаболизмом, перси стирующих МБТ . Устойчивость к ПТП у МБТ связана, в основном, с хромосомными мутациями в генахмишенях, хотя иногда перемещение мобильных генетических элементов, например I, также может привести к развитию ЛУ через инактивацию генов, связанных с развитием устойчивости ,. Описан феномен, названный как гетерорезистентность и предсуществующие мутации, который также может являться важным механизмом возникновения ЛУ у МБТ . В исследованиях ii . М i v, который устойчив к стрептомицину, можно разделить на 3 популяции чувствительные к стрептомицину, с низким и высоким уровнем ЛУ к стрептомицину . В исследованиях М. М. был продемонстрирован уровень предсушествующих мутаций к стрептомицину у МБТ при монотерапии 6. Если до лечения стрептомицином мокрота, выделенная от больных ТБ и культивированная на среде, содержала 1 устойчивую к стрептомицину микобактерию на 0 чувствительных бактерий, то уже после 4 недель монотерапии стрептомицином это соотношение сильно изменилось 1 на 8 6. При введении в практику фтизиатрии изоииазида из мокроты больных, не получавших какойлибо терапии, также высевали МБТ с ЛУ к изониазиду . В экспериментах i Н. К. с соавт. Клонирование и секвенирование штаммов МБТ, полученных от больных с ЛЧ к изониазиду, показало наличие двух различных аллелей гена, а феномен получил название гетерорсзистснтность. Подобный механизм был найден и для этамбутола 5. Развитие ЛУ к одному препарату стимулирует появление ЛУ к другому. Молекулярный механизм этого феномена был показан в недавних исследованиях . В ранних исследованиях i . . с соавт.