Экспериментальное обоснование новых подходов к коррекции микробиоценоза кишечника

• Автор: Глушанова, Нина Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 260 с. : 5 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА И ПРОБИОТИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ДИСБИОЗОВ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Значение резидентной микрофлоры

1.2. Коррекция микроэкологических нарушений.

1.3. Биологические свойства бактерий рода i.

1.4. Возможные причины недостаточной эффективности пробиотической коррекции дисбиозов.

1.5. О методах изучения взаимоотношений лактобацилл.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал.

2.1.1. Микроорганизмы для микроэкологических исследований.

2.1.2. Питательные среды
2.1.3. Экспериментальные животные.
2.1.4. Антибиотики
2.1.5. Сорбирующие диски из картона.
2.2. Методы исследования
2.2.1. Количественное определение и выделение чистой культуры кишечных лактобацилл
2.2.2. Количественное определение и выделение чистой культуры вагинальных лактобацилл.
2.2.3. Количественное определение и выделение чистой культуры оральных лактобацилл
2.2.4. Идентификация лактобацилл
2.2.5. Получение жидкого пробиотика на основе лиофилизированных штаммов лактобацилл.
2.2.6. Определение количества жизнеспособных лактобацилл
в лиофилизированном препарате.
2.2.7. Приготовление жидкого препарата резидентных лактобацилл и определение количества жизнеспособных клеток.
2.2.8. Определение экзометаболитов лактобацилл.
2.2.8.1.Определение концентрации летучих жирных кислот.
2.2.8.2. Определение способности лактобацилл к продукции перекиси водорода.
2.2.8.3. ОпрсделсЕше способности к кислотообразованию по Тернеру
2.2.8.4. Получение, фракционирование и изучение биологической активности фильтратов биомассы лактобацилл.
2.2.9. Определение биосовместимости лактобацилл
2.2 Определение антагонистической активности лактобацилл в отношении патогенных и условнопатогенных бактерий.
2.2 Хранение штаммов лактобацилл.
2.3. Экспериментальные модели кишечного лакгодисбиоза
2.3.1. Тотальная лактодеконтаминация кишечника ТДК.
2.3.2. Частичная лактодеконтаминация кишечника ЧДК.
2.4. Статистическая обработка
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ БИОСОВМЕСТИМОСТИ И АНТАГОНИЗМА ЛАКТОБАЦИЛЛ
3.1. Количественный и видовой состав лактобацилл, изолированных от человека и экспериментальных животных
3.2. Экспериментальное обоснование выбора метода определения антагонизма лактобацилл
3.3. Взаимоотношения резидентных и пробиотических лактобацилл
3.4. Взаимоотношения между резидентными лактобациллами, изолированными от разных людей
3.5. Взаимоотношения лактобацилл, изолированных из разных биотопов
у одного индивидуума.
3.6. Взаимоотношения лактобацилл, принадлежащих к разным видам
и штаммам.
3.7. Взаимоотношения лактобацилл, изолированных от разных видов животных
3.7.1. Взаимоотношения резидентных лактобацилл матери и потомства
у экспериментальных животных.
3.8. Антагонизм лактобацилл в отношении патогенных
и условнопатогенных микроорганизмов.
3.9. Исследование экзометаболической активности резидентных и пробиотических лактобацилл
3.9.1. Продукция лактобациллами органических кислот и перекиси водорода
3.9.2. Исследование изо и гомоантагонизма у пробиотических штаммов
лактобацилл.
ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛОНИЗАЦИИ КИШЕЧНИКА ПРОБИОТИЧЕСКИМИ ЛАКТОБАЦИЛЛАМИ
4.1. Влияние пробиотиков на резидентную микрофлору здорового организма.
4.2. Исследование колонизации пробиотическими лактобациллами тотально лактодсконтаминированного кишечника
4.3. Исследование колонизации пробиотическими лактобациллами
частично лактодсконтаминированного кишечника.
ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ И ЖИДКИХ ПРЕПАРАТОВ
ПРОБИОТИЧЕСКИХ ЛАКТОБАЦИЛЛ
5.1. Динамика накопления биомассы i ii при посеве лиофилизированпой и жидкой культуры
5.2. Определение содержания летучих жирных кислот в сухих и жидких пробиотических препаратах.
5.3. Исследования антагонистической активности лиофилизированного и жидкого препаратов пробиотических лактобацилл в отношении патогенных и условнопатогенных микроорганизмов
5.4. Исследование колонизационной активности лиофилизированного и жидкою препаратов гетеронробиогических лактобацилл на модели тотальной лактодеконтаминации кишечника
5.5. Исследование колонизационной активности лиофилизированного и жидкого препаратов гетеронробиотических лактобацилл
на модели частичной лактодеконтаминации кишечника
ГЛАВА 6. ПРИКЛАДНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ, ИМЕЮЩИЕ ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
6.1. Способ получения жидкого лактобактерина на основе разных видов лактобацилл
6.2. Исследование скорости отмирания лактобацилл при хранении жидкого лактобактерина.
6.3. Приготовление лактотампонов для применения в гинекологии
6.4. Оптимизация лиофильного высушивания пробиотических
лактобацилл
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Общая численность резидентных бактерий у взрослого человека достигает клеток, а при некоторых патологических состояниях до , что превышает число клеток всех органов и тканей макроорганизма , 6, 6. В настоящее время имеется множество сведений о механизмах, посредством которых осуществляются внутрипопуляционные, межпггаммовыс и межвидовые контакты у микроорганизмов, а также их взаимодействие с организмом хозяина , 9, 9, 6, 7. Процесс внутрипопуляционно о информационного обмена бактериальных клеток между собой получил название i , ощущение кворума , 9. Микроорганизмы резидентной микрофлоры находятся между собой в разнообразных, сложных и противоречивых взаимоотношениях нейтрализм, конкуренция, мутуализм, синергизм, комменсализм, паразитизм и т. Без существования системы регуляции симбиотических взаимоотношений живые организмы в условиях сравнительно ограниченного пространства существования и лимитированного количества энергетических, пластических и регуляторных субстанций вступали бы в борьбу, которая бы в конечном счете приводила бы к неизбежной гибели одного или обоих организмов симбионтов , 9. Бактериальные клетки нередко взаимодействуют друг с другом с использованием химических сигналов. Грамположительные бактерии в качестве сигналов коммуникации наиболее часто используют пептидные молекулы, в то время как грамнегативные бактерии для этих целей используют ацилгомосериновый лактон , 9, 0, 6, 7. Наиболее исследована система у грамнегативных бактерий. ЛГацетлгомосерин лактоновой природы, которые, достигнув определенной концентрации, запускают работу регуляторных генов семейства x . В результате транскрипции этих генов включаются такие механизмы авторегуляции грамнегативных бактерий, как продукция антибиотиков, субстанций, ответственных за конкурентные взаимоотношения, участвующих в образовании биопленки и т. Осуществление межвидовых информационных контактов у грамположительных и грамнегативных бактерий осуществляется, как полагают, через систему регуляторных x генов. У грампозитивных бактерий бациллы, стрептококки, молочнокислые бактерии. Показано, что . Недавние изучения геномной последовательности позволили обнаружить пептидообусловленные Тсистемы и у других видов грамположительных бактерий листерий, клостридий. Предполагается, что исследования у грамположнтельиых бактерий генов ответственных за биосинтез группы аутоиндуцируемых пептидов, позволят лучше понять механизмы i i viv и i vi 7. Таким образом, благодаря наличию системы саморегуляции, микроэкологическая система человека функционирует как единое целое, согласованно работающее с организмом хозяина , 9, 0, 9. Взаимосвязи, существующие между бактериями резидентной микрофлоры и хозяином , оказывают значительное влияние на все системы организма последнего , 9,1,2,8. Нормальная микрофлора способствует регуляции водносолевого обмена, физикохимического гомеостаза, метаболизма углеводов, белков, липидов, стероидов, желчных кислот, детоксикации зкзо и эндогенных субстратов и метаболитов, продукции биологически активных соединений летучих жирных кислот, витаминов, гормонов, антибиотиков, токсинов , 0, 1, 0, 8, . Нормальная микрофлора выполняет иммупогенную, мутагенную и антимутагенную функции , 0, 9. Значительные отклонения в этом тонком балансе могут приводить к расстройствам здоровья хозяина , , 6, 1. Микроокологический дисбаланс может сопровождаться нарушением мембранного транспорта 2, 1, обмена витаминов 0, 2, возникновением расстройств иммунных реакций 9, 0, 4, 5, 1, эндокринными нарушениями 6, 2, расстройствами электролитного обмена . По мнению Д. А. Воеводина и соавт. И.И. Мечникова об основополагающей роли дисбактериоза в развитии патологического процесса . Расширение наших знаний в области генома микроорганизмов позволит лучше попять механизм осуществления между микробными и эукариотическими клетками на молекулярном уровне. В качестве материальных носителей сигнальной регуляторной системы, вероятно, выступают те метаболиты и компоненты прокариотических и эукариотических клеток, которые имеют схожие мишени для активаторов и репрессоров, продуцируемых этими клетками различные пептиды типа ацетилгексапептиды, амины гистамин, путресцин, серотонин и др.