Структурная организация плазмиды пестициногенности чумного микроба

• Автор: Фурсов, Василий Викторович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 102 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУШ

ГЛАВА I. ПЛАЗМИДА ПЕСТЩИНОГЕННОСТИ ЧУЖОГО МИКРОБА

И ПРИЗНАКИ, ДЕТЕРШИРУШШЕ ЕЮ.

1. Молекулярнобиологические характеристики плазмиды пестициногенности.

2. Пестициногенность чумного микроба

3. Фибринолитическая и плазмокоагулазная активности возбудителя чумы

ГЛАВА П. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ПЛАЗМИД.

1. Методы обнаружения и препаративного

ввделения экстрахромосомальной ДНК
2. Методы физического картирования плазмид .
3. Методы изучения структурной организации
плазмид.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА Ш. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Штаммы и препараты
2. Методы
ГЛАВА 1У. СКРИНИНГ И ПРЕПАРАТИВНОЕ ВЫДЕЛЕНИЕ ПЛАЗМИД
ЧУМНОГО МИКРОБА.
ГЛАВА У. ФИЗИЧЕСКОЕ КАРТИРОВАНИЕ ТпПРОИЗВОДНЫХ ПЛАЗМИДЫ
ПЕСТИЦИНОГЕННОСТИ.
ГЛАВА У1. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПЛАЗМИДЫ ПЕСТИЦИНОГЕННОСТИ ЧУМНОГО МИКРОБА . . . .
I. Локализация генов, детерминирующих синтез пестицина I и фибринолизина, на физической карте плазмиды пестициногенности с. помощью рекомбинантной плазмиды рУР4
2. Локализация участка инициации репликации плазмиды пестициногенности с помощью плазмиды рур1
3. Локализация гена, определяющего устойчивость клеток к пестицину I, на физической карте плазмиды пестициногенности
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В клетках чумного микроба обнаружено три типа собственных плазмид Попов с соавт. , , . Показано, что плазмида x мол. детерминирует синтез антигенов фракции I имышиного токсинаПроценко с соавт. мол. определяет свойство зависимости роста клеток при С от ионов Са и синтез антигенов У, , , i, i, мол. продукцию пестицина, фибринолизина и плазмокоагулазы Попов с соавт. Проценко с соавт. Ранее было начато изучение структуры и функций плазмид возбудителя чумы. Построены физические карты по нескольким рестриктазам для плазмид и . Можаров, . Локализован ген, детерминирующий синтез белка I, на репликоне . i, , . На основе полных репликонов плазмид и 2 создана гибридная молекула б Можаров, , клонированы гены, ответственные за синтез пестицина I и иммунность клеток к этому бактериоцину Гончаров, . Получены производные плазмиды пестициногенности, маркированные транспозонами ТпА Гончаров, Мишанькин, , Тп1 и Тп9 Кутырев и др. Значительный интерес представляет локализация сайтов посадки транспозона Тп1 на молекуле плазмиды пестициногенности, так как на основе Тп меченых производных плазмид возможно конструирование делеционных плазмид , , что является одним из подходов картирования плазмидных репликонов. Изучение плазмид чумного микроба методами генетики и молекулярной биологии представляет интерес, поскольку признаки, детерминируемые генами этих плазмид, относят к факторам вирулентности возбудителя чумы , . Объектом настоящего исследования является плазмида пестициногенности чумного микроба. Выяснение структурной организации плазмиды актуально, так как является необходимым этапом на пути определения роли отдельных генов в формировании фенотипа возбудителя чумы, в том числе свойств, ассоциированных с проявлением вирулентности. Под термином структурная организация подразумевается совмещенная физическая и генетическая карты плазмиды. Решение этой проблемы открывает перспективу расшифровки механизмов регуляции синтеза пестицина I и фибринолизина, а также создания штаммовпродуцентов этих субстанций. Цель работы. Целью данного исследования являлось изучение структурной организации плазмиды пестициногенности чумного микроба. Разработка оптимального метода скрининга и препаративного ввделения плазмид из клеток чумного микроба различного происхождения. Локализация сайтов интеграции и определение ориентации транспозонов на Тп меченых производных плазмиды пестициногенности чумного микроба. Конструирование гибридных молекул на основе вектора 5 и Тп меченых производных плазмиды пестициногенности. Получение делеционных плазмид на основе Тп производных плазмиды . Изучение экспрессии полученных плазмид в клетках кишечной палочки и чумного микроба. Локализация генов, детерминирующих синтез пестицина I и фибринолизина, а также области инициации репликации плазмиды пестициногенности на ее физической карте. Научная новизна. Разработана модификация метода, позволяющая сократить время, затрачиваемое на обнаружение плазмид в штаммах чумного микроба, до 4 часов, и время, необходимое для препаративного вццеления ДНК плазмид, до часов. Локализовано положение транспозонов Тп1 и Тп9 в Тпмеченых производных плазмиды пестициногенности чумного микроба. Определена ориентация транспозона Тп1 в плазмидах рТК1 и рУК2. На основе вектора рВК 5 создана рекомбинантная молекула рУР4, детерминирующая синтез фибринолизина и пестицина I. Показано, что экспрессия генов гибридной плазмиды в клетках чумного микроба и кишечной палочки различна. Получена делеционная производная плазмиды рУК1 детерминирующая синтез пестицина I. Установлено, что выражение генов этой плазмиды одинаково в клетках Е. У.рев11е. Определена структурная организация плазмиды пестициногенности. На физической карте локализованы гены пестицина I, фибринолизина, иммунности к пестицину I, а также область инициации репликации ог1. Практическая ценность.