Сравнительное исследование О- и Н-антигенов почвенных бактерий рода Azospirillum

• Автор: Бурыгин, Геннадий Леонидович
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 114 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Бактерии рода ЛгоэргНИит модельный объект в исследованиях эффектов ассоциативности

1.2. Строение наружной мембраны и характеристика ос

новных поверхностных антигенов грамотрицатель

ных бактерий

1.2.1. Строение наружной мембраны грамотрицательных бактерий.

1.2.2. Основные антигены грамотрицательных микроорганизмов и их взаимодействие с иммунной системой животных

1.3. Липополисахарид грамотрицательных бактерий

1.3.1. ЛПС как соматический антиген
1.3.2. Гетерогенность препаратов ЛПС в отношении их физикохимических свойств
1.3.3. Изменения ЛПС в зависимости от возраста и условий культивирования бактерий.
1.4. Капсульные полисахариды.
1.5. Бактериальный жгутик
1.5.1. Строение бактериальных жгутиков.
1.5.2. Жгутик как Нантиген.
1.5.3. Гликозилирование полярного жгутика
1.5.4. Выявление чехла на поверхности полярного жгутика
1.6. Формулировка задач исследования.
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Бактериальные штаммы, условия выращивания бакте
рий и использованные реактивы.
2.2. Получение антител, специфичных к бактериальным
липополисахаридам.
2.3. Получение препаратов липополисахаридов
2.4. Получение препаратов полярного жгутика
2.5. Изучение подвижности бактериальных клеток.
2.6. Двойная иммунодиффузия
2.7. Денатурирующий электрофорез в полиакриламидном
геле и иммуноблоттинг.
2.8. Дотанализ целых клеток и иммуноэлектронная мик
роскопия
2.9. Спектрофотометрический анализ препаратов ЛПС
2 Конкурентный иммуноанализ
Глава 3. Полученные результаты и их обсуждение
3.1. Исследование антигенов полярного жгутика бактерий
р. АгозрИНит
3.1.1. Выявление липополисахаридного чехла на поверхности полярного жгутика.
3.1.2. Исследование углеводных фрагментов гликозилированного флагеллина полярного жгутика
3.1.3. Получение и анализ антител на флагеллин
А. ЬгазИете Бр7.
3.1.4. Исследование изменений подвижности клеток азоспирилл при взаимодействии с антителами к О и Нантигенам.
3.2. Изучение Оантигенов азоспирилл.
3.2.1. Сравнительный анализ ЛПС различных штаммов
азоспирилл
3.2.2. Конкурентный иммуноанализ в оценке строения углеводных эпитопов бактерий
3.3.Изменения иммунохимических характеристик ЛПС азоспирилл в зависимости от возраста бактериальной культуры и условий выращивания бактерий.
3.3.1.Влияние возраста культуры на экспонированность различных ОПС в составе ЛПС
3.3.2. Изменение антигенных свойств ЛПС азоспирилл
при модификации условий культивирования
3.4. Модификация способа получения высокоочищснных препаратов ЛПС.
Заключение.
Выводы.
Список использованных источников


В первую очередь, это относится к структуре основных антигенов соматического, жгутикового и капсульного. Исследование деталей строения этих важнейших бактериальных антигенов представляет фундаментальный интерес, поскольку дает возможность узнать, как организована поверхность бактерий, функционирующих в ризосфере растений. А ответ на вопрос как устроено Целью настоящей работы было получение новых сведений о строении жгутикового и соматического антигенов азоспирилл типовых штаммов и изучение топографической диспозиции этих антигенов в составе клеточной поверхности бактерий. Примененный в работе комплексный иммунохимический анализ с использованием антител, специфичных к изучаемым структурам, а также использование мутантных штаммов, дефектных по синтезу данных структур, позволили впервые получить сведения о деталях строения и топографическом распределении О и Нантигенов в составе клеточной поверхности бактерий . ii. Впервые выявлено наличие чехла липополисахаридной природы, экранирующего флагеллин полярного жгутика бактерий . ii. Обнаружена иммунохимическая идентичность углеводных фрагментов гликозилированного флагеллина полярного жгутика и Оспецифического полисахарида соматического антигена у азоспирилл. Продемонстрировано наличие антигенных перекрестов у Нантигена бактерий для представителей видов . . i. Определен иммунодоминантный моносахарид в составе антигенных детерминант ЛПС типового штамма . 5. Продемонстрированы изменения экспонированности Оспецифических полисахаридов в составе ЛПС азоспирилл на разных фазах роста культуры. Кроме того, установлено, что структура антигенных детерминант ЛПС азоспирилл может изменяться под влиянием изменений состава среды культивирования. Предложенный оригинальный способ получения высокоочищенных препаратов ЛПС может быть использован при решении широкого круга исследовательских и практических задач. Работа выполнена в лаборатории физической химии клеточных структур ИБФРМ РАН в соответствии с плановой темой НИР Разработка эффективных тестсистем к антигенным структурам клеток микроорганизмов и растений гос. Щеголев С. Ю.. Работа была также поддержана грантами Комиссии РАН по работе с молодежью по итогам конкурсов и г. РАН, грантом РФФИ 0з для поездки на й Международный Конгресс по бактериологии и прикладной микробиологии Мир микробов Париж, Франция, и гратом Президента РФ НШ4 на поддержку молодых российских ученых и ведущих научных школ. Глава 1. Почвенные азотфиксирующие бактерии рода ii являются модельным объектом в исследовании феномена ассоциативности благодаря их способности увеличивать продуктивность сельскохозяйственных растений. Впервые эти бактерии были выделены М. В. Бейеринком ii, из обедненных азотом почв Нидерландов и названы ii i. Позднее их многократно выделяли из ризосферы различных тропических и субтропических растений i i, . В настоящее время эти бактерии отнесены к роду ii, включающему в себя на сегодняшний день 7 видов . . i . . . . i . . i i . . i . . i . Род ii относят к группе ростстимулирующих ризобактерий в международной транскрипции , i ii, поскольку эти бактерии могут стимулировать развитие растений как непосредственно, так и опосредованно, путем подавления развития растительных патогенов Баканчикова с соавт. Предполагается существование нескольких возможных факторов непосредственного стимулирующего действия азоспирилл на растение азотфиксация, гормональный эффект, общее улучшение роста корней, нитратредукция и улучшение минерального и водного питания растений i , v, . Анализ экспериментальных данных дает основание предположить, что ростстимулирующее влияние азоспирилл определяется совокупностью данных факторов i, .