Роль посттрансляционных модификаций клеточных белков в регуляции репликации и транскрипции у микроорганизмов

• Автор: Лёзина, Лариса Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 150 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Вирус ЭпстайнаБарр молекулярные механизмы регуляции вирусной репликации и роль клеточных факторов.
1.2. Теломеры, как аналоги нонамеров вирусного генома, и факторы, связывающиеся с теломерными повторами.
1.3. Регуляция инициации транскрипции на уровне формирования прединициационного транскрипционного комплекса

1.3.1. Образование и свойства прединициационного

транскрипционного комплекса у дрожжей

1.3.2. Роль фактора ТТПА в регуляции транскрипции.

1.4. Регуляция жизнедеятельности вирусов и клеток на уровне посттрансляционных модификаций белков.

1.4.1. Роль полиАДФрибозилирования белков в жизни клетки

1.4.2. Фосфорилирование и его роль в регуляции транскрипции.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Идентификация теломерных белков, ассоциированных с ЭБэлементом через взаимодействие с ЕВКА1
3.2. Ассоциация теломерных факторов с опР в латентно инфицированной клеточной линии лимфомы Бркитта.
3.3. Кооперативное связывание ТКР2 и ЕВИА1 с ЭБ элементом.
3.4. Влияние белков, связывающихся с нонамерными последовательностями, на огРзависимую репликацию ДНК
3.5. Функции нонамеров в поддержании стабильности
вирусного генома
3.6. Влияние полиАДФрибозных модификаций на функцию поддержания стабильности вирусного генома.
3.7. Значение взаимодействия между II и ТВР для роста и жизнеспособности дрожжей
3.8. Нарушение клеточного цикла у дрожжей, мутантных по II
3.9. Роль взаимодействия между II и ТВР в выборе
промотора i viv
3 Активатор и промотор зависимые дефекты у дрожжей, мутантых по II
3 I viv фосфорилирование субъединицы II комплекса
3 Стимуляция образования IIДНК комплекса
в результате фосфорилирования
3 Значение фосфорилирования для поддержания индуцибельной транскрипции группы промоторов i viv.
3 Влияние фосфорилирования на жизнеспособность
дрожжей
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ЛИТЕРАТУРА


Репликационные факторы, необходимые для этого типа репликации, в своем большинстве кодируются вирусным геномом. Сайты инициации литической репликации, i, находятся в двух различных регионах вирусного генома i , . В латентном состоянии вирусная ДНК существует, как правило, в кольцевой эписомной форме в количестве нескольких копий на клетку. ДНК может быть интегрирована в хозяйскую хромосомную ДНК ii . Эписомная форма представляет собой кольцевую, экстрахромосомную форму существования вирусной ДНК так называемую вирусную плазмиду. В отличие от литической, латентная репликация инициируется только один раз на один цикл деления клеткихозяина, так что в клетке поддерживается стабильность вирусного генома, другими словами, стабильное количество копий вирусных плазмид на клетку , . Сайт инициации латентной репликации, i, представляет собой 2,2 КЬр тысяч пар оснований участок генома ВЭБ. В дополнение к нему были обнаружены еще несколько сайтов инициации репликации, отличных от i i i, . В отличие от литической репликации, для поддержания латентного ВЭБ генома требуется только один вирусный белок 1, однако, механизм, благодаря которому 1 инициирует репликацию вирусного генома, пока неизвестен. i имеет два участка сайтов связывания с белком 1. Один участок называется семейство повторов и представляет собой сайтов связывания с I. Другой участок является элементом симметрии второго порядка лучевой симметрии и содержит 4 сайта связывания с 1. Благодаря работам с использованием направленного мутагенеза было показано, что элемент важен для репликационной функции i i, i, . Дальнейшие работы на клеточных линиях, стабильно экспрессирующих 1, выявили, что элемент также является минимальной автономно реплицирующейся последовательностью i ii, . Другие биохимичекие исследования подтвердили, что двунаправленная репликация опЯсодержащей плазмиды iплазмиды инициируется в районе элемента i, . Таким образом, элемент является сайтом инициации вирусной репликации. элемент состоит из 0 пар оснований и содержит два повтора последовательностей, симметрично расположенных относительно друг друга. Каждый повтор содержит два сайта связывания с 1 по Ьр пар оснований, промежуток между которыми представляет собой всего только одну пару оснований. Таким образом, в общем числе элемент содержит 4 сайта связывания с I, пронумерованных от сайта 1 до сайта 4. 1 формирует димер и в таком виде взаимодействует с единичным сайтом связывания v . Эти 1связывающиеся последовательности очень важны для репликационной функции ВЭБ. Единичный повтор, содержащий сайты связывания 1 и 2 или сайты 3 и 4, обладает очень низкой автономной репликационной активностью, в раз меньше, чем у целого элемента. Однако в составе всей последовательности i половина элемента, содержащая два сайта связывания с 1, обладает обычным уровнем репликационной активности i, . Таким образом, семейство повторов , возможно, усиливает активность единичного повтора элемента и компенсирует нехватку другой половины. Дальнейшие эксперименты с использованием направленного мутагенеза выявили, что внедрение последовательности размером в 5 Ьр между сайтами 1 и 2 или сайтами 3 и 4 полностью уничтожает репликационную активность i, . В результате такой вставки сайт 2 или сайт 4 поворачивается на 0е вдоль оси ДНК. I может связываться со всеми 4 сайтами такого мутированного элемента, но позиции 1 димеров относительно друг друга абсолютно различны по сравнению с таковыми дикого типа. Таким образом, определенная пространственная позиция 1 на элементе важна для нормальной репликационной активности. Анализ кристаллической структуры выявил, что один димер белка 1, связанный с сайтом 1, взаимодействует с другим, связанным с сайтом 2 v , . Образование такого тетрамера может быть важным для инициации репликации с элемента.