Разработка технологии получения протеолитического ферментного комплекса из бактерий рода Bacillis

• Автор: Холодная, Жанна Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 134 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Гидролитические ферменты бактерий рода i, их получение и применение

Глава 2. Способы выделения и очистки ферментов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Г лава 3. Материалы и методы

Глава 4. Оптимизация способа получения Протеолитического ферментного комплекса ПФК с целью увеличения его активности
4.1. Создание нового штамма i ii эффективного продуцента протеолитических ферментов .

4.2. Оптимизация состава питательной среды для промышленного получения ПФК

4.3. Отработка физикохимических параметров культивирования Глава 5. Разработка способов стабилизации, выделения и очистки ПФК
5.1. Стабилизация ПФК
5.2. Выделение ферментсодержащего материала
5.3. Очистка и концентрирование ПФК
Глава 6. Изучение свойств ПФК
6.1. Определение оптимумов , температуры и термостабильность ПФК
6.2. Изучение влияния ингибиторов на активность ПФК
6.3. Определение изоэлектрической точки ПФК
6.4. Определение молекулярной массы
6.5. Определение субстратной специфичности
6.6 Изучение стабильности ПФК при хранении
6.7. Изучение безвредности и токсичности ПФК
Глава 7. Практическое использование ПФК
7.1. Изучение возможности применения Бактилина для гидролиза мозговой ткани в производстве медикобиологического препарата Церебролизат
7.1. Изучение возможности гидролиза белковых основ питательных сред с использованием Бактилина
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Одной из задач биотехнологии на современном этапе является удовлетворение потребности здравоохранения в ферментных лекарственных средствах, которую нельзя решить в полном объеме только за счет использования ферментов животного и растительного происхождения Ильин Г. П., Москвичев Б. В., . Важную роль в решении этой проблемы отводится микробному синтезу, поскольку микроорганизмы быстро растут и идеально подходят для интенсивного культивирования компоненты питательной среды дешевы и обычно представляют собой сельскохозяйственные продукты, доступные в большом количестве имеется широкий выбор продуцентов и они могут быть улучшены генетическими приемами Прист Ф. Бактерии рода i привлекают внимание исследователей с давних времен. Накопленные знания о них в области микробиологии, физиологии, биохимии, генетики свидетельствуют об их преимуществах как продуцентов биологически активных веществ Смирнов В. В. и др. Бациллы это аэробные, образующие эндоспоры, граммположительные палочки. Род i был открыт в г. Фердинандом Коном, который изменил название Vii ii, данное Эренбергом . ., , на i ii. До сих пор типовым штаммом вида В. Кона, В. , 4 Харвуд К. Благодаря способности к спорообразованию, свойственной немногим видам микроорганизмов, бактерии рода i занимают особое место в микробном мире нашей планеты. За исключением . .i, все бациллысапрофиты, они не производят вредных для человека токсинов и патогенные штаммы среди них не найдены Смирнов В. В. и др. Разнообразие метаболических процессов и низкая патогенность видов i послужили причиной их использования для получения продуктов четырех типов ферментов, антибиотиков, высокоочищенных биопрепаратов и инсектицидов. Промышленная ценность представителей этого рода объясняется в основном спросом на ферменты. В настоящее время имеется достаточный практический опыт по крупномасштабной ферментации многих ферментов. Бациллы служат основным источником получения гидролитических ферментов. Среди гидролаз особый практический интерес представляют протеолитические ферменты, основной функцией которых является расщепление белков Харвуд К. Микробные протеиназы делятся на три класса сериновые, металло и кислые, которые имеют оптимумы активности при щелочной, нейтральной или кислой реакции среды соответственно Прист Ф. Существует классификация протеаз, основанная на строении их активных центров. В соответствии с этим различают четыре группы таких ферментов сериновые протеиназы, металлопротеиназы, цистеиновые протеазы и аспартатные протеазы В. ., . . I., . Сериновые протеазы ингибируются фенилмстилсульфонилфлуоридом и диизопропилфлуоридом I, металлопротеиназы хелатирующими агентами, цистеиновые ферменты йодацетамидом и тяжелыми металлами, а аспартатные протеазы пепстатином. В смеси протеаз эти ингибиторы дают возможность измерять активность фермента каждого класса без предварительной очистки. Данная классификация протеаз хорошо коррелирует с оптимумами зависимости их активности от . Так, сериновые протеазы имеют оптимумы в щелочной области, металлопротеиназы максимально активны при нейтральных , а цистеиновые и аспартатные ферменты проявляют наибольшую активность при кислых значениях . Существующие данные свидетельствуют о том, что штаммы i секретируют металло и сериновые протеиназы, в то время как кислые протеазы в основном встречаются у грибов и высших эукариот . ., . Металлопротеиназы это ферменты, имеющие оптимумы активности при нейтральных или более высоких значениях , их молекулярные массы составляют 0 0 , они активируются ионами цинка и стабилизируются ионами кальция. Общим свойством нейтральных протеиназ . ЭДТА. Активность ферментов восстанавливается в присутствии металлов цинка, кобальта, кальция и некоторых других i В. Внеклеточные металлопротеиназы выделены из клеток . .ii и . . i . ., . ., . .i, . .ii Прист Ф.