Разработка питательных сред и микротест-системы для накопления, выделения и идентификации листерий

• Автор: Омарова, Салидат Магомедовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Махачкала
• Количество страниц: 332 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛИСТЕРИОЗА

1.1. Роль листерий в инфекционной патологии человека

1.2. Особенности биологических свойств листерий.

1.3. Современные методы микробиологической диагностики листериоза

1.4. Питательные среды для культивирования листерий.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

РАЗРАБОТКА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И МИКРОТЕСТСИСТЕМЫ ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ, ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛИСТЕРИЙ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования.

2.1.1 .Штаммы микроорганизмов.

2.1.2.Питательные среды и реагенты
2.1.3.Лабораторные животные.
2.2. Методы исследования
2.2.1 .Физикохимические методы.
2.2.2.Биологические методы
2.3.Методы статистической обработки материала.
3. РАЗРАБОТКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬ 1ЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИСТЕРИЙ
3.1. Изучение физикохимических и энергетических показателей культивирования .
3.2. Изучение различных гидролизатов как основы питательных сред для выделения, накопления и идентификации листерий
3.3. Разработка рецептуры среды для накопления . .
3.4. Разработка селективного питательного бульона для предварительного обогащения культур ii в пищевых продуктах.
3.5. Разработка селективной питательной среды для выделения и культивирования листерий листерияагар
3.6. Разработка сухой питательной среды для первичной идентификации листерий теллурит агар.
3.7. Разработка дифференциальнодиагностических питательных сред для изучения биологических свойств листерий.
3.7.1. Питательная среда для определения подвижности культур листерий
3.7.2. Питательная среда для определения лецитиназной активности листерий
4.0. РАЗРАБОТКА МИКРОТЕСТСИСТЕМЫ ДЛЯ УСКОРЕННОЙ БИОХИМИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛИСТЕРИЙ
4.1. Разработка состава питательных сред для ячеек микроконтейнеров
4.2. Подбор оптимальной микробной посевной дозы в ячейку микроконтейнера.
4.3. Изучение эффективности микротестсистем для биохимической идентификации листерий
5.0. ПОЛУЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОПРОИЗВОДСТВЕННЫХ СЕРИЙ РАЗРАБОТАННЫХ СУХИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И МИКРОТЕСТСИСТЕМЫ ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ, ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛИСТЕРИЙ
5.1. Технологическая схема производства сухих питательных сред для листерий
5.2. Технология изготовления МТСЛ для биохимической идентификации листерий
5.3. Определение биохимических свойств листерий с использованием МТСЛ.
6.0.ИЗУЧЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗРАБОТАННЫХ ПИТПТЕЛЬНЫХ СРЕД И МИКРОГЕСТСИТЕМЫ В ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ МИКСТИНФЕКЦИЙ У ЖЕНЩИН С
АКУШЕРСКОГИРНКОЛОГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ.
7.0. ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ . , ВЫРАЩЕННЫХ НА РАЗРАБОТАННЫХ
ОБСУЖДЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Однако было установлено, что при уменьшенном содержании кислорода и замещении его углекислым газом достигается наилучшее развитие листерий. Поэтому, их следует характеризовать как факультативные анаэробы. Рост листерий наблюдали на бульоне КиттаТароцци в эксикаторе при давлении в 8мм ртутного столба 2,4. Среди исследователей нет единого мнения по вопросу возможности реверсии формы и в 8форму. Высказываются сомнения в возможности реверсии вообще, считая, что в культурах формы всегда обнаруживаются в небольшом количестве колонии Бформы, и преобладание их при последующих пересевах нельзя считать за реверсию 6. Вместе с тем, не все исследователи разделяют такую точку зрения. При подкожном введении больших доз шероховатых культур высокочувствительным животным наблюдали переход форм в 8формы, что говорит о значительной изменчивости листерий и возможности циркуляции в природе измененных штаммов. Наблюдения показали, что основные биохимические свойства культур по сравнению с культурами не изменились, однако снизилась вирулентность и повысилась агглютинабельность . Было также установлено, что вирулентность штаммов листерий в форме можно восстановить пассажем через мозг мышей. Выделенная затем культура вызывала положительную конысгивальную реакцию у морских свинок ,8. Как и многие бактериальные виды, листерии способны образовывать формы. Отмечают, что образование форм листерий происходит не непосредственно из бактериальных форм, а через Мцикл при пассировании на средах с постепенно возрастающими концентрациями трансформирующего агента пенициллина 5,,. Аналогичная вариабельность обнаружена и в активности каталазы в клетках разных штаммов листерий, зависящая от условий выращивания. Замечено снижение активности каталазы у культур, выращенных на обогащенных питательных средах, и повышение при пересеве клеток с бульона на агар, при улучшении условий аэрирования среды. Авторы высказывают мнение о том, что определение активности каталазы, возможно, использовать как тест вирулентности листерий, только с учетом принадлежности штамма к той или другой серогруппе микроба. Притом было установлено, что в 1серогруппе более активный фермент содержат клетки слабовирулентных штаммов, во второй более богатые каталазой клетки вирулентных штаммов ,,,6,5,9,0. В последЕше годы достигнут существенный прогресс в изучении факторов патогенности листерий, их роли на различных этапах, инфекционного процесса, генов, определяющих их синтез и механизм регуляции экспрессии 9. Наиболее изученный фактор патогенности листерий листериолизиЕЕ О, характеризующий вирулентность . Два других вида . Листериолизин О это секретируемый белок с молекулярной массой кДа, обладающий классическими свойствами активированного гемолизина. Листериолизин влияет на секреторный метаболизм эукариотической клетки, взаимодействуя с внутренней поверхностью цитоплазматической мембраны. Это подтверждает, что листериолизин является важнейшим фактором патогенности листерий, влияющим на взаимодействие возбудителя с эукариотической клеткой ,4,5,5,2. Другими факторами патогенности листерий являются специфические фосфолипазы фосфадилиназитол и фосфадилхолин, выделенные из культуральной жидкости . Да. Да с помощью листериозной металлопротеазы ,9. Анализ различных штаммов листерий в иммуноблоте подтверждает присутствие только в штаммах . Очищенный активен при нейтральной и слабокислой , обладает слабой гемолитической активностью. Фермент гидролизует широкий спектр фосфолипидов. С помощью иммуноблота показано, что потеря лецитиназной активности совпадает с отсутствием активной формы фермента с молекулярной массой кДа. Эти ферменты патогенности листерий участвуют в лизисе двойной мембраны вторичной вакуоли 4,9,3,7,4,4. Помимо наиболее изученной мембранолитической функции перечисленных ферментов имеются данных об их регуляторной функции на уровне легальной трансдукции мембранных белков эукариотической клетки. Следующим фактором патогенности листерий является интерналин А, поверхностный белок с молекулярной массой кДа, участвующий в инвазии эпителиальных клеток. Наибольшая способность к инвазии выявляется в фазе роста культуры .