Проблемы лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis: ускоренное культуральное выявление, контроль адекватности химиотерапии, вирулентность

• Автор: Маничева, Ольга Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 178 с. : ил.

1.1.Проблема быстрого определения лекарственной устойчивости i i

1.2. Проблема лабораторного контроля адекватности химиотерапии

1.3. Проблема оценки вирулентности i i.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Метод биохимической индикации роста МБТ

2.2. Метод ускоренного определения ЛУ МБТ с помощью полужидкой среды.

2.3. Методы определения бактериостатической активности крови

2.3.1. Метод серийных разведений сыворотки с использованием стандартной среды ЛевенштейнаЙенсена.

2.3.2. Метод вертикальной диффузии.

2.3.3. Метод ускоренного определения БАК с помощью полужидкой среды.

2.4. Методы исследования вирулентности МБТ i vi.

2.4.1 .Определение скорости роста размножения МБТ в питательной среде.
2.4.2. Определение скорости роста размножения МБТ в макрофагах
2.4.3. Исследование индукции клеточной гибели цитотоксичности.
2.4.4. Исследование продукцие цитокинов
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 3. РАЗРАБОТКА МЕТОДА УСКОРЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ МБТ
3.1. Индикация роста МБТ и определение ЛУ МБТ по восстановлению трифенилтетразолийхлорида.
3.2. Определение лекарственной устойчивости МБТ с помощью полужидкой питательной среды с разным содержанием лошадиной сыворотки
3.3. Определение чувствительности МБТ к этамбутолу с помощью полужидкой среды
3.4. Определение лекарственной устойчивости МБТ к стрептомицину, изониазиду, рифампицину, этамбутолу с помощью полужидкой среды в сравнении со стандартным методом
Глава 4. ИССЛЕДОВАНИЕ БАКТНРИОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ПЛОТНОЙ СРЕДЫ
4.1. Исследование БАК у больных туберкулезом с помощью метода вертикальной диффузии в среде ЛевенштейнаЙенсена.
4.2. Изучение с помощью метода вертикальной диффузии фармакокинетики изониазида в крови и тканях больных туберкулезом органов мочеполовой системы
Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ БАКТЕРИОСТАГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
КРОВИ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ УСКОРЕННЫМ МЕТОДОМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛУЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ.
5.1. Разработка ускоренного метода определения БАК
5.2. Исследование БАК у больных туберкулезом органов дыхания, сопоставление с клиническими и бактериологическими данными
Глава 6. ИССЛЕДОВАНИЕ I VI ВИРУЛЕНТНОСТИ МБТ РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПОВ.
6.1. Скорость роста МБТ в жидкой питательной среде i 7Н9. .
6.2. Скорость роста МБТ в макрофагах клеточной линии ТИР 1.
6.3. Индукция клеточной гибели в культурах макрофагов, зараженных МБТ различных генотипов.
6.4. Продукция цитокинов клетками ТНР1, зараженными МБТ разных генотипов.
6.5. Характеристика больных туберкулезом органов дыхания и биологических свойств МБТ различных генотипов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Список литературы.
Список сокращений
БАК бактериостатическая активность крови
БЛТ бактериостатическая активность ткани
КОЕ колониеобразующая единица
ЛЧ лекарственная чувствительность
ЛУ лекарственная устойчивость
МБТ микобактерии туберкулеза
М3 малахитовый зеленый
МИК минимальная ингибирующая концентрация
МЛУ множественная лекарственная устойчивость
МТТ ,5диметилтиазол2ил2,5дифенилбромид тетразолия
НТМБ нетуберкулезные микобактерии
ПТП противотуберкулезные препараты
ГТБМ пропорция бактериимакрофаг
ТОД туберкулез органов дыхания
ТТХ 2,3,5трифенилтетразолия хлорид
ВММ iii
Н iiii i i изониазид
i
1 i Ii
iivi iii
i
i ii
ВВЕДЕНИЕ


Высокая частота множественной лекарственной устойчивости наблюдается как у штаммов с выраженной цитотоксичностью, так и с низкой. Получен патент на изобретение Питательная среда для ускоренного определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза 8 от . Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи, а также в учебном процессе на кафедре фтизиатрии ГОУ ДПО СанктПетербургская медицинская академия последипломного образования Росздрава. Материалы по теме диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской конференции по внелегочпому туберкулезу, СПетербург, г. СанктПетербурга в г. VIII Российском съезде фтизиатров, ой Международной конференции СПИД, рак и общественной здоровье СПб. Межрегиональном семинаре для заведующих бактериологическими лабораториями СевероЗападного Федерального Округа РФ . Всероссийской научнопрактической конференции Актуальные вопросы лечения туберкулеза различных локализаций юбилейная к летию СПб НИИФтизиопульмонологии, . По материалам работы опубликовано или находится в печати печатных работы, из них 9 статей в изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Диссертация изложена на 8 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего отечественных и 2 зарубежных источника. Диссертация иллюстрирована таблицами и рисунками. Глава 1. Проблема быстрого определения лекарственной устойчивости i i. МБТ продолжает оставаться успешным патогеном и в XXI веке. Эта успешность обусловлена свойствами возбудителя генетической гетерогенностью популяции, трансмиссивностью, высокими адаптивными возможностями, которые выражаются в способности вегетировать в самых разных органах и тканях, а также приобретать лекарственную устойчивость в ответ на проводимую химиотерапию. Несмотря на достижения медицины, проблема выявления и лечения туберкулеза остается актуальной. Лабораторная бактериологическая диагностика этой распространенной во всем мире инфекции важный инструмент в решении проблемы туберкулеза. В последние годы фтизиатры приходят к выводу о недостаточности выявления и контроля лечения туберкулеза только методом микроскопии. Так, . МБТ. Исследования . Африки возникла и распространилась X от англ. В связи с этим авторы постулируют необходимость включения в прорамму контроля туберкулеза обязательного определения лекарственной устойчивости ЛУ. V у пациентов, у которых не была определена ЛУ, смертность достигала против пациентов, культура которых была тестирована на ЛУ. Необходимость разработки быстрых и дешевых методов определения ЛУ диктуется также продолжающимся ростом лекарственной устойчивости М. Российской Федерации, так и во многих регионах мира Алексеева Г. Н., Кравченко А. Ф., Дорожкова И. Р. и др. С., . Особенно важно в кратчайшие сроки обнаруживать полирезистентность и мультирезистентность множественную лекарственную устойчивость, МЛУ, вопервых, потому что наблюдается сдвиг структуры устойчивости в эту сторону А. А.Баранов и др. Вишневский Б. И., Вишневская Е. Б., Маркелов Ю. М., Дородная И. А., . Даже при относительно низких показателях первичной ЛУ лекарственная устойчивость МБТ, выделенных от ранее не леченных больных наблюдается превалирование МЛУ i . Вовторых, наиболее тяжелое течение заболевания наблюдается у больных при резистентности МБТ к сочетанию основных противотуберкулезных препаратов изониазиду, рифампицину, стрептомицину, этамбутолу Борзенко А. С. и др. Дощак Н. И., Ломаченков В. Д. Мишин В. Ю. и др. Соколова Г. Б. и др. Терапия же с эмпирическим применением препаратов до получения данных о ЛУ может быть неэффективна в случаев Кибрик Б. С., Челнокова О. Г., . Анализ данных англоязычной литературы за период гг. X1,0 мкм со слегка закругленными иногда ветвящиеся, возможно образование нитей или подобие мицелия концами, Эти структуры легко распадаются с образованием палочек и кокковидных элементов. В цитоплазме содержат зернистые образования. Неподвижны, спор не образуют, имеют микрокапсулу.