Получение, характеристика и применение моноклональных антител к антигенам синегнойной палочки

• Автор: Ломтатидзе, Марина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : 1 ил.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Лабораторная диагностика синегнойной инфекции

1.2. Применение МкАт для изучения синегнойной палочки и ее обнаружения в различных объектах исследования

Собственные исследования

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Штаммы микроорганизмов, питательные среды

2.2. Лабораторные животные.

2.3. Клеточные линии.

2.4. Антигены

2.5. Схемы иммунизации животных, получение иммунных спленоцитов и антисывороток
2.6. Протоколы гибридизации
2.7. Отбор антителопродуцирующих гибридом и их клонирование
2.8. Накопление, очистка, изотигшроваиие МкАт
2.9. Анализ специфичности МкАт.
2.9.1. Иммуноферментный анализ.
2.9.2. Иммуноблоттинг
2 Диагностические препараты
21. Антимышиный ИПК
22. Получение экспериментальных образцов меченых МкАт.
23. Приготовление меченых флуорохромом антител
на основе поликлональных иммуноглобулинов
2 Оценка активности и специфичности эксперимен
тальных образцов меченых флуоресцеинизотиоцианатом поли и моноклональных антител.
2 Оценка активности моноклональных ИПК и их применение в ИФА для выявления антигенов . i
2 Методы статистической обработки результатов опытов
Глава 3. Получение гибридомпродуцентов МкАт к антигенам .i.
3.1. Оптимизация схем стимуляции В лимфоцитов
3.2. Стабилизация свойств гибридом, условия их сохранения и накопление МкАт i vi и i viv.
Глава 4. Характеристика свойств МкАт к антигенам
.i.
4.1. Специфическая активность МкАт.
4.2. Иммунохимический анализ.
Глава 5. Изучение возможности применения МкАт к антигенам синегнойной палочки в качестве основы иммунодиагностических препаратов для ИФлА и ИФА
5.1. Получение и оценка свойств иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих моноклональных и поликлональных к антигенам .i.
5.2. ИФА с применением моноклональных антител
Глава 6. Перспективы совершенствования лабораторного анализа синегнойной инфекции.
6.1. Обнаружение . i в пробах из объектов внешней среды стационаров
6.2, Идентификация синсгнойной палочки, изолированной из проб клиническое материала .
6.3. Применение моноклональных иммуноглобулинов в ИФлА для изучения мазковотпечатков при моделировании экспериментальной синегнойной инфекции
Заключение.
Выводы.
Список использованных источников


Глава 1. Глава 2. Лабораторные животные. Клеточные линии. Анализ специфичности МкАт. Иммуноферментный анализ. Получение экспериментальных образцов меченых МкАт. Оценка активности моноклональных ИПК и их применение в ИФА для выявления антигенов . Глава 3. Получение гибридомпродуцентов МкАт к антигенам . Стабилизация свойств гибридом, условия их сохранения и накопление МкАт i vi и i viv. Глава 4. .i. Специфическая активность МкАт. Иммунохимический анализ. Глава 5. Получение и оценка свойств иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих моноклональных и поликлональных к антигенам . Глава 6. Перспективы совершенствования лабораторного анализа синегнойной инфекции. Обнаружение . Идентификация синсгнойной палочки, изолированной из проб клиническое материала . Заключение. Выводы. Список использованных источников. Актуальность проблемы. Проблема внутрибольничного инфицирования приобретает все большую медицинскую и социальную значимость , , , , , . Повышение внимания к данной проблеме связано с регистрируемым в последние годы ростом тяжелых осложнений в стационарах различного профиля, обусловленных циркуляцией в них штаммов микроорганизмов с высоким уровнем резистентности к химиопрепаратам , 1. На смену доминировавшей прежде грамположительной микрофлоре все чаще приходят грамотрицательные условнопатогенные микроорганизмы 8,, . Изменение микробного пейзажа стационаров связано с рядом причин, среди которых наиболее значимой являются появление полирезистентных к антимикробным препаратам госпитальных штаммов , , , , , 1 как следствие повсеместного широкого и зачастую бесконтрольного применения антибиотиков. Отмечают также возрастание числа иммунокомпромегированных лиц со сниженным уровнем резистентности. Увеличение числа пожилых лиц в возрастной структуре населения сопровождается также увеличением частоты нозокомиальных инфекций. Среди всех случаев бактериемии и менингитов вызванного грамотрицательной микрофлорой на долю лиц старше лет приходится . Снижение естественного антибактериального иммунитета и появление большого числа лиц с измененным иммунным статусом зачастую обусловлено интенсивной иили нерациональной антибактериальной терапией или являются результатом проводившейся иммуносупрессивиой терапии , , 8. Синегнойная палочка одна из наиболее частых причин возникновения внутрибольничных нозокомиальных инфекций пневмоний, раневой инфекции, бактериемии, поражений мочевыводящих путей. Сипегнойная инфекция распространена повсеместно. Мониторинг внешней среды стационаров в части циркуляции штаммов . В нашей стране госпитальные штаммы . i занимает второе место по частоте инфицирования пациентов хирургических отделений и третье в терапевтических стационарах , , , , 8. Смертность от синегнойного сепсиса у ожоговых больных достигает , несмотря на проводимую комплексную терапию 8, . Кроме того, высокий уровень внутрибольничного инфицирования синегнойной палочкой регистрируют в отделениях урологии, травматологии, трансплантологии и неонатологии 1, , , , 8, 1. Традиционные методы бактериологической идентификации патогенов обеспечивают получение ответа в сроки не ранее 23 суток от момента начала исследования, что тормозит проведение адекватной терапии. В связи с этим, особую значимость приобретает вопрос об использовании методов экспрессанализа проб клинического материала и объектов внешней среды , . В нашей стране методы экспрессобнаружения . В то же время, известно, что ПЦР и ИФА зарекомендовали себя как эффективные и быстрые методы исследования проб клинического материала и объектов внешней среды при поиске синегнойной палочки ,, 6. Перспективы совершенствования всей системы контроля микробного пейзажа медицинских учреждений напрямую связаны с разработкой и применением в повседневной работе быстрых и достоверных методов обнаружения и идентификации возбудителей госпитальных инфекций.