Получение очищенной коллагеназы CLOSTRIDIUM HISTOLYTICUM и разработка мазей на ее основе

• Автор: Колпакова, Елена Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 167 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список основных сокращений

Введение
Глава 1. Коллагеназа ii ii свойства, технологии получения, применение в клинической практике обзор литературы

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Объект исследования

2.2. Материалы исследования

2.3. Методы оценки физикохимических свойств коллагеназы

ii ii

2.4. Методы оценки биологической активности препарата

коллагеназы
2.5. Методы для изучения физикохимических свойств мазей
2.5. Биологические методы исследования
2.6. Микробиологические методы исследования
2.7. Статистический анализ результатов
Глава 3. Получение очищенной лиофилизированной коллагеназы ii ii
3.1. Получение концентрированной очищенной коллагеназы
3.2. Получение лиофилизированного препарата
Глава 4. Физикохимические и иммунобиологические свойства коллагеназы ii ii
4.1. Физикохимические свойства
4.2. Иммунобиологические свойства
4.2.1. Изучение элиминации коллагеназы из организма
животных в зависимости от способа введения
4.2.2. Экспериментальное изучение токсичности препаратов, содержащих коллагеназу ii ii
4.2.3. Испытание на пирогенность
4.2.4. Экспериментальное изучение аллергенного действия коллагеназы ii ii
Глава 5. Теоретическое и экспериментальное обоснование состава
коллагеназосодержащих мазей
5.1. Выбор основ для мазей
5.2. Разработка оптимального состава мазей
5.3. С груктурномеханические параметры мазей
5.4. Осмотическая активность мазей
5.5. Характеристика антимикробного действия коллагеназосодержащих мазей
5.6. Рзучение стабильности мазей в процессе хранения
5.6.1 .Физикохимическая стабильность
5.6.2.Сгруктурномеханическая стабильность
5.6.3.Антимикробная и микробиологическая стабильность
Глава 6. Изучение эффективности и безвредности мазей с коллагеназой в опытах на животных
6.1. Влияние мазей на раневую инфекцию у кроликов
6.2. Влияние мазей на заживление ожоговых ран
6.3. Морфологическая характеристика инфицированных и ожоговых ран мри лечении мазью с коллагеназой
6.4. Влияние мазей на заживление резаных ран
6.5. Противовоспалительное действие мазей
6.6. Местнораздражающее действие мазей
Заключение
Выводы
Список литературы


Субстратом коллагеназ является коллаген основной волокнистый компонент соединительной ткани млекопитающих кожи, сухожилий, кровеносных сосудов, костей и т. Коллаген существует в нескольких формах табл. Основная структура всех типов коллагена является схожей, состоящей из включающих аминокислотных остатков трех пептидных цепей, построенных из многократно повторяющегося трипептида глицин X, где глицин представлен всегда, а X и любые аминокислоты, но наиболее часто пролин, гидроксипролин или лизин . Аминокислотная последовательность зависит от видового происхождения коллагена. Таблица 1. Ш Фибробласты гладкая мускулатура Кровеносные сосуды, ретикулярные волокна в различных тканях. Трехспиральная молекула коллагена, которую в настоящее время называют молекулой тропоколлагена, имеет длину приблизительно 0 нм, диаметр 1,5 нм и молекулярную массу 0 0. Она упорядочена таким образом, что свободные группы глицина каждой пептидной цепи находятся внутри общей спирали, а требующие пространсгва кольца пролина, оксипролина и боковые группы других аминокислотных остатков выступают наружу. Исследование синтетических аналогов коллагена показало, что наличие в первичной структуре пролина, оксипролина и последовательности типа глипрооксипролин спонтанно определяег трехспиральную форму макромолекулы. Тройную спираль молекулы коллагена стабилизируют водородные связи, имеющие межепиральный характер, а также электростатические и гидрофобные связи. С возрастом поперечное сшивание коллагена усиливается и коллаген становится менее растворимым и более резистентным к лизису . Коллагеназы являются единственными энзимами, способными расщеплять нативную трехспиральную молекулу коллагена. Коллагеназы могут расщеплять одновременно все три молекулы коллагена или атаковать отдельные участки 9,1,1. Коллагеназа С. I и III на ряд мелких пептидных фракций. Она распознат в коллагене последовательность и разрывает связь , где обычно является нейтральной аминокислотой 7. В отличие от коллагеназ млекопитающих, которые расщепляют коллаген на две большие фракции, бактериальные коллагеназы способны атаковать коллаген во многих участках вдоль спирали и расщеплять его на ряд мелких пептидных фракций желатин, которые становятся легко доступными для расщепления другими протеазами 9,1 . В таблице 2 представлены сравнительные характеристики коллагеназ млекопитающих и клостридиальных коллагеназ. Коллагеназа . Впервые коллагеназа . Мае . . Получению препаратов очищенной коллагеназы были посвящены многочисленные исследования ряда авторов ,3,9,5,0,8,9. Для получения и очистки коллагеназы С. Коллагеназа . Таблица 2. Молекулярный вес в среднем ООО Ба в зависимости от источника Выделяется как проэнзим с молекулярным весом около ООО Ба, нуждается в активации Расщепляет коллаген на 2 фрагмента 13 и 23 Является металлопротеиназой, содержит в активном центре Ъп 2. Полученные препараты отличались своей гетерогенностью по составу энзимов и содержали более различных энзимов, большую часть которых составляют энзимы с коллагеназной активностью, поразному обозначаемой различными авторами. Препараты отличались по активности и количеству примесей, что зависело от выбора штаммапродуцента коллагеназы, условий культивирования, способа очистки фермента 2,5. Наиболее детально охарактеризованы свойства коллагеназы . V 8,9,0. Авторы предложили многоступенчатую комплексную очистку коллагеназы . V выделили и описали 6 типов коллагеназ а, 3, о, е, Таблица 3. 3 А,В,С . x 3 1,,I I. 2 1,И i . 3 а, Ва, ВЬ . 2 А,В i . 2 А,В i . x 0 2 i . I 3 С1,С2, СЗ . xi 0 i x 6 I II . x iv 2 6 , ,6 .