Получение множественно маркированных штаммов холерного вибриона и их использование для картирования хромосомы

• Автор: Ерошенко, Галина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 140 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА ИНДУЦИРОВАННЫХ МУТАНТОВ

ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА . .

1. Алкилирулцие агенты, механизм действия нитрозогуанидина .

2. Получение мутантов холерного вибриона и изучение их свойств.

3. Использование мутантов холерного вибриона для генетического анализа

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Штаммы и препараты.

2. Методики.
ГЛАВА Ш. ПОЛУЧЕНИЕ МНОЖЕСТВЕННО МАРКИРОВАННЫХ МУТАНТОВ
Х0ЛЕШ0Г0 ВИБРИОНА.
1. Подбор оптимальных условий воздействия нитрозогуанидина на клетки холерного вибриона с целью получения мутантов .
2. Моноауксотрофные мутанты холерного вибриона
и их идентификация.
3. Полиауксотрофные мутанты холерного вибриона классического биовара .
4. Полиауксотрофные мутанты холерного вибриона биовара Эль Тор
5. Получение антибиотикоустойчивых штаммов холерного вибриона .
6. Мутанты холерного вибриона с измененной продукцией токсина
Стр.
7. Мутанты холерного вибриона с нарушенным синтезом 0антигена.
8. Получение мутантов холерного вибриона, продуцирующих меланин и гемолизин изучение
их свойств
ГЛАВА 1У. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МНОЖЕСТВЕННО МАРКИРОВАННЫХ МУТАНТОВ ДЛЯ КАРТИРОВАНИЯ ХРОМОСОМЫ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА .
1. Определение частоты передачи селектируемых маркеров при скрещивании донорного штамма
с полиауксотрофными реципиентами .
2. Определение положения некоторых маркеров на хромосоме холерного вибриона по сцепленности неселектируемых маркеров с селектируемыми
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ЛИТЕРАТУРА


Использование полимаркированных штаммов в экспериментах конъюгационного переноса позволило определить локализацию генов на хромосоме холерного вибриона, два из них картированы впервые. Депонированы в музее живых культур ВНИПЧИ Микроб и могут быть использованы в качестве реципиентов в экспериментах по конъюгации восемь антибиотикоустойчивых полиауксотрофных штаммов холерного вибриона. Составлены методические рекомендации Получение мутантов холерного вибриона с измененной продукцией токсина, одобренные Ученым Советом института Микроб протокол от б июня года и утвержденные директором института 9 июня года. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты диссертационного исследования доложены на Всесоюзной школе семинаре молодых ученых и специалистов противочумной системы по молекулярной генетике в г. Марксе в году на научной конференции института Микроб, посвященной ИЗ годовщине со дня рождения В. И.Ленина в году на Всесоюзной конференции по молекулярной биологии, генетике и иммунологии возбудителей особо опасных инфекций в г. РостовенаДону в году. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСЯЩИЕСЯ НА ЗАЩИТУ. 5,5 получен высокий выход мутантов, достигающий 3,8. Для создания множественно маркированных штаммов целесообразно получать полиауксотрофные мутанты под действием нитрозогуанидина с последующим отбором среди них клонов с нарушенной продукцией факторов вирулентности и иммуногенности. Полученные полиауксотрофные мутанты могут быть использованы в качестве реципиентов в экспериментах по конъюгации с целью картирования хромосомы возбудителя холеры. ГЛАВА I. Первые химические мутагены были открыты более сорока лет назад и с тех пор стали широко применяться в генетических исследованиях. Наибольший интерес среди них представляют алкилирующие агенты, переносящие алкильные группы на биологически важные молекулы в физиологических условиях. В году И. А.Рапопорт впервые доказал исключительно высокую мутационную активность этиленимина. Позже было обнаружено, что такими же свойствами обладают иприт, этиленоксид, диэпоксибутан, этилметансульфонат, метилметансульфонат, нитрозогуанидин и другие. Все они отличаются типом переносимых алкильных групп метильная, этильная и т. Механизм действия алкилирующих соединений будет рассмотрен нами на примере нитрозогуанидина, относящегося к классу нитрозосоединений. Его мутагенные свойства были открыты в I0 году . ., ,, I0. Стабильность нитрозогуанидина в буфере зависит от температуры, , ионной силы и других факторов. Его наибольшая устойчивость наблюдается при 5,0 Б,, . ., 5,5 . ., ,, I0. . ., i . ., . В сильно щелочных растворах нитрозогуанидин образует ,6 диазометана . При 69 продуктами разложения нитрозогуанидина являются соли нитроцианамидов и алкилдиазогидроксид . ., . ., . . . ., . . ., . . .. . i В. ДНК. . . i М. . ., . ДНК. Ь. . . i . ii В. . i . i . . ДНК. Чаще всего разрыв сахарофосфатной цепи будет приводить к летальным последствиям и лишь иногда может обуславливать крупные перестройки, в то время как депуринизация может вызывать образование мутаций. Ярко выраженный мутагенный эффект депуринизации описан рядом авторов i . . .. Возможность образования таким образом транзиций и трансверсий была подтБервдена . . и ii, . i, . Нитрозогуанидин способен также вызывать сдвиг рамки считывания и вызывать другие перестройки ДНК , Обычно выделяют два типа механизмов мутагенеза. Согласно первому мутации возникают изза ошибок репликации, а в соответствии со вторым благодаря системе репарации, способной допускать ошибки i Показано, что у Вi и . Р i , . i . i . ., . Так . Нес, ехг клетках, клетках дикого типа и vмутантах Iii , , .